高中生物总复习 专题一微生物的培养与应用课件 新人教版选修1.ppt

专题一微生物的培养与应用 一 微生物的培养 一 培养基1 概念 人们按照微生物对的不同需求 配制出的供其的营养基质 2 营养构成 一般都含有水 氮源 生长因子 还需满足不同微生物对ph 特殊营养物质以及o2的要求 生长繁殖 营养物质 碳源 无机盐 二 无菌技术1 消毒 1 特点 使用较为的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物 不包括芽孢和 2 常用方法 煮沸消毒法 化学药剂消毒法 温和 孢子 巴氏消毒法 2 灭菌 1 特点 指使用强烈的理化因素杀死物体内外包括芽孢和孢子 2 常用方法 灼烧灭菌 干热灭菌 灭菌 所有的微生物 高压蒸汽 三 微生物培养的基本技术1 配制培养基称量 混合 溶化 调ph 分装 包扎 2 灭菌 加水 加培养基 密封 排冷气 维持压力 取出倒平板 或搁置斜面 3 接种 1 接种过程 洗净双手 点燃酒精灯 接种 贴标签 2 接种工具 包括 涂布器 3 接种方法 平板划线法 法 4 注意事项 整个操作过程都要在旁完成 4 培养 接种后的培养皿放入恒温箱内培养 接种环 稀释涂布平板 酒精灯火焰 四 菌种保藏1 临时保藏 1 操作 采用固体斜面培养基 菌落长成后 放入4 冰箱中保藏 以后每3 6个月 转移一次新的培养基 2 缺点 保存时间不长 菌种易被污染或产生变异 2 长期保存法 甘油管藏法 放在 20 下保存 二 微生物的应用 一 土壤中分解尿素细菌的分离与计数1 菌种筛选 1 培养基 2 特点 是唯一氮源 选择培养基 尿素 2 统计菌落数目 1 计算方法 稀释涂布平板法 显微镜直接计数 3 设置对照 1 对照实验 是指除了外 其他条件都相同的实验 2 主要目的 排除实验组中对实验结果的影响 被测试的条件 非测试因素 二 分解纤维素的微生物的分离 纤维素分解菌的筛选1 土壤取样 选择富含纤维素的环境 2 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 1 制备鉴别培养基 主要碳源cmc na 2 刚果红染色法 先培养 再加入刚果红进行颜色反应 时加入刚果红 微生物 倒平板 3 进一步鉴定 1 为确定得到的菌是否是纤维素分解菌 还需进行发酵产纤维素酶的实验 2 测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的进行定量测定 葡萄糖 一 微生物的培养 一 微生物的实验室培养1 培养基 1 概念 人们按照微生物对营养物质的不同需求 配制出供其生长繁殖的营养基质 2 分类和应用 3 培养基配方及营养要素基本营养要素 各种培养基一般都含有水 碳源 氮源 无机盐 此外还要满足不同微生物生长对ph 特殊营养物质以及氧气的需求 特别提醒 1 微生物最常用的碳源是糖类 尤其是葡萄糖 最常利用的氮源是铵盐 硝酸盐 2 对异养微生物来说 含c h o n的有机化合物既是碳源 又是氮源 能源 3 有些培养基不需要添加特殊营养物质 生物自己能合成 如大肠杆菌能合成某些维生素 作为特殊营养物质 4 制备 计算 称量 溶化 灭菌 倒平板 2 无菌技术 1 消毒和灭菌的区别 特别提醒 用酒精消毒时 70 的酒精杀菌效果最好 原因是 浓度过高 使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜 乙醇分子不能渗入其中 浓度过低 杀菌力减弱 2 无菌技术主要操作要求a 实验前应对操作空间 操作人员消毒 对所用器具和培养基灭菌 b 实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作 另外要避免已灭菌处理材料再次污染 二 纯化大肠杆菌以及菌种的保藏1 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 计算 称量 溶化 灭菌 倒平板 2 纯化大肠杆菌 1 原理 在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞 使其长成单个的菌落 这个菌落就是一个纯化的细菌菌落 2 方法 平板划线法 稀释涂布平板法 平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作 将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面 稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释 然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面 进行培养 3 菌种的保藏 1 短期保存 固体斜面培养基上4 保存 菌种易被污染或产生变异 2 长期保存 20 甘油管在冷冻箱中保藏 特别提醒 平板冷凝后 皿盖上会凝结水珠 凝固后的培养基表面的温度也比较高 将平板倒置 既可以使培养基表面的水分更好地挥发 又可以防止皿盖上的水珠落入培养基 造成污染 解析 灭菌是指杀死物体内外所有的微生物 包括芽孢和孢子 而消毒仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物 不包括芽孢和孢子 答案 b 二 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1 分离的原理 1 土壤中的细菌之所以能够分解尿素 是因为它们体内能合成脲酶 这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起催化作用 2 实验室中微生物筛选的原理 人为提供有利于目的菌株生长的条件 包括营养 温度 ph等 同时抑制或阻止其他微生物生长 2 分离分解尿素的细菌所使用的特定培养基分离分解尿素的细菌的培养基应为选择培养基 培养基中的氮源只有尿素 理论上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生长 其配方如下 kh2po41 4gna2hpo42 1gmgso4 7h2o0 2g 葡萄糖10 0g尿素 唯一氮源 1 0g琼脂15 0g将上述物质溶解后 用自来水定容到1000ml 3 统计菌落数目的方法 1 显微镜直接计数法 原理 利用特定细菌计数板或血细胞计数板 在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 方法 用计数板计数 缺点 不能区分死菌与活菌 2 间接计数法 活菌计数法 原理 当样品的稀释度足够高时 培养基表面生长的一个菌落 来源于样品稀释液中的一个活菌 通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中大约含有多少活菌 操作a 设置重复组 增强实验的说服力与准确性 b 为了保证结果准确 一般选择菌落数在30 300的平板进行计数 2 可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是 a 以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂b 以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂c 以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹 试剂d 以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂 解析 在以尿素为唯一氮源的培养基中 不能分解尿素获得氮源的细菌不能生长 而分解尿素的细菌能利用尿素作氮源 将尿素分解为氨 使ph升高 若培养基中加入酚红指示剂 指示剂将变红 此培养基既属于选择培养基 又属于鉴别培养基 答案 a 三 分解纤维素的微生物的分离1 分解纤维素的微生物的分离 1 实验原理 2 实验流程土壤取样 富含纤维素的环境 选择培养 用选择培养基培养 以增加纤维素分解菌的数量 梯度稀释 涂布平板 将样品涂布于鉴别含cr的纤维素分解菌的培养基 固体 挑选产生透明圈的菌落 产生纤维素酶的菌落周围出现透明圈 2 两种刚果红染色法的比较 特别提醒 1 选择培养的目的是增加纤维素分解菌的浓度 确保能够从样品中分离到所需要的微生物 2 涉及到的微生物技术主要有 培养基的配制 无菌操作技术 稀释涂布平板法 选择培养基的作用 土壤取样等 3 如图为分离并统计分解纤维素的微生物的实验流程 据此回答有关问题 1 要从富含纤维素的环境中分离纤维素分解菌 从高温热泉中寻找耐热菌 这说明 2 某同学根据需要 配制了纤维素分解菌的培养基如下 整个实验过程严格执行无菌操作 纤维素粉nano3na2hpo4 7h2okh2po45g1g1 2g0 9gmgso4 7h2okcl酵母膏 水解酪素0 5g0 5g适量 如果将其中的纤维素粉换成 菌落数 即可说明选择培养基的作用 3 接种微生物最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法 本实验宜采用 法 原因是 解析 1 因为纤维素分解菌与耐热菌有不同的生活习性 生活在不同的环境中 故要根据目的菌株对生存环境的要求 到相应的环境中去寻找 2 因为葡萄糖是纤维素水解的 是能被微生物直接利用的有机小分子 所以如果将其中的纤维素粉换成葡萄糖 纤维素分解菌及其他细菌会生长繁殖得更快 故菌