高效液相色谱法测定青菜中氯氰菊酯残留量的测定.doc

反相高效液相色谱法检测青菜中拟除虫菊酯类农药残留量摘 要运用组合固相萃取（Solid phase extraction，SPE）柱净化、反相高效液相色谱法检测建立了拟除虫菊酯农药残留的液相色谱分析方法。 用丙酮正己烷混合溶液（3:7，v/v）作溶剂、超声波方法辅助萃取样品中的农药残留，萃取液经过组合SPE 柱(由上到下为无水硫酸钠、中性氧化铝、60-100目弗罗里硅藻)净化后浓缩,正己烷定容。各组分分离良好，测得的青菜中氯氰菊酯农药残留量为0.00912mg/Kg。关键字 拟除虫菊酯；反相液相色谱法；农药残留Determination of pyrethroid pesticides residue in greens by RP-HPLCZhang Lianyang, Ye Dongjing, Sun Chunyan*(College of Chemistry and Chemical Engineering，Shaoxing University，Shaoxing 312000)Abstract：A method to simultaneously analyze pyrethroids pesticide residues in greens, using solid phase extraction (SPE) and RP-HPLC was developed. The extract was condensed, transferred into acetone-n-hexane (3:7, v/v), then purified through combined SPE tubes( The combination of SPE tubeswhich includes anhydrous, alumina and 60-100 eye florida diatom from up to down) gives good purified result. With hexane constantly volumed, Gas chromatography analysis of cis-cypermethrin residues is0.00912 mg/Kg.Key words: pyrethroid pesticides ; RP-HPLC ; Pestieides Residue农药是现代农业生产中不可缺少的生产资料，由于其广泛应用大大提高了农作物的产量，但对生态环境、人类生命安全也造成了威胁。近年来，因化学农药严重污染的蔬菜而造成的急性食物中毒事件屡有发生，因此蔬菜的化学农药残留量的检测十分必要。蔬菜中残留的化学农药主要含有机氯、有机磷、氨基甲酸酯和拟除虫菊酯四大类1-2。其中拟除虫菊酯农药具有低毒、高效、广谱和低残留的特点，被广泛应用于农作物的病虫害防治上3，但其大量使用也会对环境及人类健康造成影响。因此世界各国都对其残留量制定出极为严格的限量标准，我国制定的蔬菜中该类农药最高残留量的国家标准为：氯氰菊酯0.20mg/kg(GB 4829.4-1994)；氰戊菊酯0.20mg/kg(GB 14928.5-1994)；溴氰菊酯0.20mg/kg(GB 4828.4-1994)1-2。化学农药残留量监测分析是一种从复杂的混合体系中分离和分析痕量组分的监测分析技术，它要求精细的微量提取操作手段、高分辨率的分离方法和高灵敏度的检测技术。目前，毛细管气相色谱法和高效液相色谱法(配合高灵敏度的检测器)仍然是化学农药残留量监测分析的主要仪器分析方法。本文用反相高效液相色谱法新鲜蔬菜（青菜）中的氯氰菊酯残留量进行了分析和评价，为安全食用蔬菜提供科学依据。1 仪器与药品1.1 仪器Agilent 1200 sevies高效液相色谱仪，ODSCl8 5 m 2504.6 mm色谱柱，电子天平(JY2001)，超声波（SK-5200Hp），碾砵等；1.2 药品(1)有机溶剂：丙酮(A.R.)，正己烷(A.R.)，乙腈(色谱纯)(2)层析剂：无水硫酸钠(A.R.)，层析中性氧化铝(A.R.)，60-100目佛罗里硅藻土,玻璃棉。以上层析剂均在450马弗炉中灼烧4 h后保存在干燥器中备用。(3)农药标准品与纯度：氯氰菊酯(cypermethrin) 96%， (4)农药标准溶液的配备单标准储备液：以市售的氯氰菊酯农药标准品用正己烷溶剂配置成适当浓度的单标准储备液。单标准中间液：用正己烷溶剂将单标准储备液稀释成适当浓度的单标准中间液。 单标准使用液：用正己烷溶剂将单标准中间液稀释成含氯氰菊酯2.00g/mL的单标准使用液。2 实验方法2.1 高效液相色谱分析条件色谱柱为ODSCl8 5 m 250 x4.6 mm，流动相为乙腈，流速为1.0 ml/min，检测波长为230 nm，进样量为20L，载气：氮气（纯度99.999%）；2.2 样品的制备与提取称取经碾砵捣碎的新鲜蔬菜样品10 g于100 mL带塑料烧杯中，根据样品含水量加入适量的无水硫酸钠。然后向塑料烧杯样品中加入10 mL丙酮-正己烷混合溶剂(37，V/V)，混匀后在超声波提取器中萃取15 min，将上层清液转移至离心管中。逐次向塑料烧杯样品残渣中加入3 mL、2 mL正己烷溶剂，重复以上萃取、分离操作两次，合并上层清液至同一试管中，再用超声波分离5 min。若这时清液中还存在水份，再加适量无水硫酸钠除水。2.3 柱层析净化与浓缩在30 cm(长)1 cm(内径)玻璃管层析柱中，于底部加少许玻璃棉，按顺序分别装上无水硫酸钠、中性氧化铝和60-100目佛罗里硅藻土各约1.0 cm高度，轻轻敲实。先用3 mL丙酮预洗层析柱，弃掉淋洗液。再将烧杯中的样液全部转移至柱内进行净化，用3 mL丙酮-正己烷混合溶剂(12，V/V)各洗脱三次，收集洗脱液于接液管中。将接液管置于50恒温水浴中用氮气吹脱至样液体积大约低于0.30 mL，再转移至液相色谱仪专用的样品测试瓶中，用正己烷定容至10 ml，加盖密封保存待测。2.4 样品测定吸取滤液20L进样，进行HPLC分析，记录t=2.2s左右的峰面积。3 结果与讨论3.1 色谱条件的选择高效液相色谱分析方法的主要目的是在尽可能短的时间内将混合物完全地分离，对于多种农药的痕量分析还要求很高的灵敏度因此，只有选择最佳的色谱条件，提高分离度，将待测组分之间和待测组分与干扰组分良好的分离，才能准确对待测组分定性和定量4。3.1.1 检测波长的选择 由氯氰菊酯的紫外吸收光谱图可见，在230 nm处吸收较大，实验结果表明：在波长230nm下被测各组分色谱峰分离效果好且测定灵敏度高，实际加标样品在此波长条件下的溶剂峰、杂质峰对被测各组分的测定影响较小。故选择测定波长为230 nm。3.1.2 流动相的选择为了有利于色谱峰的分离，选用乙腈为流动相。经试验，用乙腈作流动相各组分分离良好且分离时间更短、灵敏度更高。3.1.3 色谱柱流速的选择研究不同流速下氯氰菊酯的分离情况，发现当流速为1.0 ml/min时，符合分离要求且仪器分析时间最短。因此，实验选定1.0mL/min 为最佳流速。3.2 气相色谱测定结果表1 不同浓度下氯氰菊酯对应的峰面积和出峰时间氯氰菊酯浓度（mol/L）峰面积出峰时间（min）0.510-7155.902.28110-7272.282.26110-62537.422.28图1 氯氰菊酯标准曲线回归方程及相关系数由图1可知，氯氰菊酯标准曲线回归方程y=2511.3x+25.866，相关系数r=1实验测得样品中氯氰菊酯的出峰时间为2.226min，峰面积为80.961。从而计算出样品中氯氰菊酯的浓度为0.21910-7 mol/L，进而计算出青菜中氯氰菊酯残留量为0.00912mg/Kg，在我国制定的蔬菜中该类农药最高残留量的国家标准（氯氰菊酯0.20mg/kg(GB 4829.4-1994)）范围之内，人们可放心食用。计算过程如下：样品中氯氰菊酯的浓度C：C=（80.961-25.866）/2511.3=0.21910-7 mol/L蔬菜的氯氰菊酯残留量M：（0.21910-7）（1010-3）416.32103mg 1010-3Kg =0.00912mg/Kg4 结论本实验建立反相高效液相色谱检测青菜中氯氰菊酯残留量的方法，对复杂蔬菜基底的前处理采用了固相萃取柱净化，大大降低了背景噪音干扰5。实验结果表明该检测法方便，灵敏度高、稳定性好。5 致谢感谢负责本实验的孙春燕老师在实验过程中对我们的悉心指导。参考文献：1 国家技术监督局. 中华人民共和国国家标准GB/T14929.4-94食品中氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯残留量测定方法. 2 国家技术监督局. 中华人民共和国国家标准GB/T17332-1998食品中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留的测定.3 Danis T. ,Sakkas V. ,Stratis I. ,et al. Pesticide multiresidue analysis in fresh and canned peaches using solid phase extraction and gas chromatography techniques