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血清丙氨酸氨基转移酶测定 转移酶 transferases 催化特定的基团从一种底物转移到另一种底物的酶 反应代表式为 AB CA BCB为被转移的基团 如氨基 NH2 等 转氨酶 transaminase 又称氨基转移酶 大多数转氨酶是催化 氨基酸的氨基转移到 酮酸的酮基上 产生另一种 酮酸和 氨基酸 血清丙氨酸氨基转移酶测定 alanineaminotransferase ALT 测定方法 定时比色法 两点法 酶联 紫外连续监测法 动力学法或速率法 酶联 紫外连续监测法 原理 L 丙氨酸 酮戊二酸丙酮酸 L 谷氨酸丙酮酸 NADHL 乳酸 NAD 在340nm连续监测NADH的消耗量 从而计算出ALT的活力 ALT LD 方法学评价 血清中也含有酮酸及LDH 可以消耗NADH而使测定结果偏高 对策 采用过量的NADH 终浓度0 14 0 2mmol L 将血清同不含 酮戊二酸的所有试剂一起预温 使其他副反应充分进行 再加入 酮戊二酸以启动酶反应 监测光吸收的变化 可完全排除这种干扰 定时比色法 国内采用的比色测定法有三种 赖氏法 30min 金氏法 60min 改良穆氏法 30min 三种方法的原理 试剂 操作步骤和酶作用温度都相似 单位定义和标准曲线绘制方法有差异 国内较多采用赖氏法 其优点为 标准曲线中两种酮酸的量客观地反映了酶作用的实际情况 标准曲线上单位的数字准确地反映出酶活力的大小 测定结果可以直接与分光光度法相比较 赖氏法原理 丙酮酸和 酮戊二酸在血清ALT的作用下生成丙酮酸和谷氨酸 在酶反应到达规定时间内 加入溶于酸的2 4 二硝基苯肼终止酶反应 并分别与产物丙酮酸和剩余底物 酮戊二酸生成相应的二硝基苯腙 在碱性条件下均呈红棕色 二者吸收光谱在505nm处差异最大 丙酮酸苯腙的呈色强度约为 酮戊二酸苯腙的3倍 据此可算出丙酮酸的生成量 推算出ALT的酶活力 临床意义ALT常作为判断肝细胞损伤的灵敏指标 1 急性病毒性肝炎 可观察病情发展 作预后判断 2 慢性病毒性肝炎或脂肪肝 正常或轻度增高 3 肝硬化 肝癌时 ALT轻度或中度增高 提示可能并发肝细胞坏死 4 其它原因引起的肝脏损害 骨骼肌损伤 多发性肌炎等亦可引起ALT增高 注意事项1 严重脂血症或黄疸血清可使测定管吸光度明显增加 检测此类标本时 应作血清对照管 2 加入2 4 二硝基苯肼溶液后应充分混匀 使反应完全 否则影响重复性 3 呈色物质配制必须
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