流式细胞仪SOP示例.doc

流式细胞仪操作规程目录1：淋巴细胞亚群测定2：HLA-B27测定淋巴细胞亚群测定 (CD系列)方法 流式细胞仪BD)原理：用已知总数的荧光微球Beads作标准内参，加入血中，再加入荧光抗体，应用流式细胞仪的获取和分析软件，就可以得出血中CD3、CD4，CD8、B、NK细胞的绝对数。标本采集与处理受检者的准备检查对象生活饮食处于日常状态，空腹采血。采集部位静脉采血抗凝剂EDTA抗凝血要求1样本量至少1ml。 2室温放置，24小时内处理，处理前充分混匀。3溶血样本不能用。试剂(1)质控品BEKAMANCOULTER产品，未开瓶的试剂于2-8保存，可在有效期内保持稳定，稀释的试剂于2-8可稳定2周；每天校准一次：遇特殊情况随时进行校准。仪器 BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra样本制备： 1)按照要求，分别向已编好号的试管中加入20 ul单克隆抗体和同型对照2)分别向试管中加入混匀的100u1抗凝血。3)混匀，避光，室温孵育20-30分钟4)溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血)b. 使用COULTER QPREP制备系统开机-显示READY灯亮-选择35SEC灯亮-开门-放入试管关门-自动进行溶血-显示READY灯亮-开门-取出试管-再进行下一个样品测定。（*溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体）5)上机测样（可根据样本情况选择洗或不洗上样）报告结果 报告百分数（和绝对值）操作性能 精密度批内五次重复CV10.0109/L，样本需要稀释，用PBS稀释；若4.0109/L，应分离单个核 细胞。4溶血样本不能用。试剂品牌 剂型规格贮存贝克曼库尔特成分1：单克隆抗体液体1ML282：全血溶血试剂液体A：甲酸液体70ML 室温B：碳酸钠等液体32ML 室温C：多聚甲醛液体14ML 室温3：鞘液液体20L室温4：清洗液液体5L 室温5：荧光微球液体10ML 2-8质控品BEKAMANCOULTER产品，未开瓶的试剂于2-8保存，可在有效期内保持稳定，稀释的试剂于2-8可稳定2周；每天校准一次：遇特殊情况随时进行校准。仪器 BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra样本制备： 1)按照要求，分别向已编好号的试管中加入20 ul单克隆抗体和同型对照(IgG2a-FITCIgG1-PE)2)分别向试管中加入混匀的100u1抗凝血。3)混匀，避光，室温孵育20-30分钟4)溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血)b. 使用COULTER QPREP制备系统开机-显示READY灯亮-选择35SEC灯亮-开门-放入试管关门-自动进行溶血-显示READY灯亮-开门-取出试管-再进行下一个样品测定。（*溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体）5)洗、离心、上机测样（备注： 测B27一定要至少洗一遍方可上机检测）报告结果 报告阴阳性操作性能 精密度批内五次重复CV2 灵敏度5001000个荧光素分子参考值阳性：HLA-B27阳性而HLA-B7阴性细胞的平均荧光强度在8.0以上。临床意义HLA复合体位于第6号染色体的短臂上，该区DNA片段长度约3000-4000KB，占人体整个基因