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中药专业大专毕业论文范文 中医药学是世界传统医学体系中最完整的传统医学其独到的学科理论和突出的临床疗效较符合当代社会和人们解决难治疾病不断增多、化学药品的毒副作用日益显现、日益沉重的医疗用度等困难的需要下面是CN小编为大家整理的中药专业大专毕业论文范文欢迎参考 摘要:目的:探讨桂枝茯苓丸诱导肿瘤细胞凋亡机制为桂枝茯苓丸(GFW)开发应用提供实验依据 方法:计算抑瘤率流式细胞仪测定细胞凋亡率电镜观察肿瘤细胞超微结构 原位杂交法检测SurvivinmRNA表达 结果:GFW抑瘤率为38.93%流式细胞仪检测GFW组凋亡率17.79%与模型组比较差异有统计学意义 GFW组镜下可见瘤细胞以凋亡变化为主 内膜结构完好核膜清晰细胞核固缩染色质团块状散布核内或边集核膜下并可见凋亡小体 GFW下调肿瘤细胞SurvivinmRNA表达与模型组比较差异有统计学意义 结论:GFW诱导肿瘤细胞凋亡其机制可能与下调SurvivinmRNA表达密切相关 关键词:桂枝茯苓丸,凋亡,SurvivinmRNA 中医认为血瘀是肿瘤的主要成因之一桂枝茯苓丸是一活血化瘀方剂广泛用于各种血瘀症的治疗临床实践证明具一定的抑瘤作用但对其抑瘤机理的研究并不深入 本文选用荷瘤小鼠作为研究对象观察桂枝茯苓丸(GFW)对肿瘤细胞的诱导凋亡作用以其从分子水平上探讨GFW抗肿瘤效应机理为GFW的临床应用提供理论依据 1材料与方法 1.1主要仪器和试剂原位杂交试剂盒购白天津灏洋生物技术有限公司 OLYMPUS显微镜(日本)、HITACHIH500型透射电镜(德国菲利蒲公司)、FACSCALIBUR流式细胞仪(美国BD公司)、SB651旋转蒸发仪(日本RIKAKI公司)、HIMAS2000多媒体彩色病理图文分析系统(同济医大) 1.2实验动物40只昆明小鼠体重(202)g雄性由齐齐哈尔医学院实验动物中心提供 1.3瘤株S180瘤株由黑龙江省肿瘤研究所提供 1.4药物桂枝茯苓丸:按金匮要略记载标准生药均购自齐齐哈尔市中医院 桂枝、茯苓、桃仁、牡丹皮、赤芍各药等量加适量水浸泡2h先文火后武火煎煮2次经过滤除渣后水浴浓缩配成1g/mL的水煎剂置4保存备用 环磷酰胺(CylophosphamideCY)山西普德药业有限公司出品批号H14023686 1.5动物模型取腹腔接种10天的荷瘤小鼠在无菌条件下抽取腹水(乳白色黏稠)放入无菌容器内置冰块保存 用0.4%台盼蓝生理盐水液计数(计活细胞大于95%)用生理盐水调细胞浓度至5106/mL 取KM小鼠30只每只鼠右侧腋下皮下注射0.2mL瘤细胞悬液 1.6动物分组及给药方法将荷瘤鼠随机分为3组每组10只分别为模型组、实验组、CY组另取10只未荷瘤小鼠作为正常对照 模型组(Modelgroup):生理盐水灌胃0.2mL/(10gd);中药组(GFWgroup):GFW灌胃0.2mL/(10gd);环磷酰胺组(CYgroup):腹腔注射CY20mg/(kgd) 接种后次日给药各组每天给药1次连续10天 1.7细胞凋亡的检测(流式细胞仪单激光单染色法)小鼠脱颈处死无菌取腋下实体瘤常规制备瘤细胞悬液调整浓度1106/mL1500r/min离心5min弃上清PBS洗1次加70%冷乙醇1mL,4固定30min 离心5min弃上清PBS洗2次 加50mg/mLPI染液600mL染色30min后上机测定 1.8透射电镜观察形态学改变每组随机取2块瘤组织将瘤组织快速投入2.5%戊二醛固定液固定2h以上磷酸缓冲液漂洗1%锇酸后固定12h缓冲液漂洗20min丙酮梯度脱水浸透、包埋、制备超薄切片醛酸双氧铀和柠檬酸铅染色电镜观察并拍片 1.9原位杂交瘤组织及时固定切片常规脱蜡至水 3%H2O2室温封闭10minPBS洗暴露mRNA核酸片段滴加预杂交液20L403h不洗Survivin探针杂交液20L滴加40杂交过夜杂交后洗涤滴加生物素化抗地高辛3760min原位杂交用PBS洗5min4次滴加高敏过氧化物酶链亲和索复合物工作液3760min原位杂交用PBS洗5min4次DAB显色苏木素复染常规酒精脱水二甲苯透明中性树胶封片 本实验设2张阴性对照片1张用PBS代替探针1张用PBS代替生物素化抗地高辛 1.10统计方法Survivin结果利用HIMAS2000多媒体全自动图像分析仪检测所得数据经SPSS11.0系统处理采用OneWayANOVA法两两比较用SNK法 结果用xs表示 2结果 2.1抑瘤率与模型组比较GFW组、CY组瘤重低于模型组瘤重差异有统计学意义(P0.05) GFW组抑瘤率为38.93% 2.2肿瘤细胞凋亡率GFW组肿瘤细胞凋亡率为17.79%与模型组比较差异有统计学意义(P0.01) 2.3肿瘤细胞电镜观察模型组瘤细胞的核浆比大双层核膜清晰核异形性明显瘤细胞表面可见丰富微绒毛胞质内线粒体轻度肿胀核周可见幼稚高尔基复合体及内质网游离核蛋白体丰富有少量的淋巴细胞浸润 中药组镜下可见瘤细胞以凋亡变化为主 瘤细胞体积明显变小细胞表面微绒毛减少甚至消失内膜结构完好核膜清晰细胞核固缩染色质团块状散布核内或边集核膜下并可见凋亡小体 游离核蛋白体减少非常明显线粒体嵴断裂空泡变性胞质内可见大量的脂肪堆积;同时可见大量粒细胞侵润并伴有坏死 2.4肿瘤细胞中Survivin基因mRNA表达原位杂交法对Survivin基因mRNA表达进行半定量检测 染色结果Survivin基因表达定位于胞质呈棕黄色弥漫性分布 在1040倍高倍镜下每张标本随机选择5个视野精确选取视野内所有的阳性颗粒利用HIMAS2000多媒体图像分析系统对Survivin各组原位杂交反应阳性细胞面密度值、阳性细胞平均灰度值进行分析 与模型组比较GFW组与CY组Survivin基因mRNA表达降低(P0.05) 提示GFW可下调肿瘤细胞内凋亡相关基因SurvivinmRNA量 3讨论 通过应用各种不同的药物影响信号传导途径从而触发或重建整个死亡程序使处于关闭状态的凋亡信号传导各效应环节迅速连通诱导程序化细胞死亡反应为肿瘤治疗开辟了新思路 细胞凋亡信号传导的大致过程是:细胞整合各种胞内外凋亡信号通过细胞凋亡信号与其受体形成的复合物经胞浆信号转导蛋白传递至一组细胞凋亡的执行者caspases再由激活的easpases对其特异性底物进行降解最终导致细胞凋亡 本实验经流式细胞仪检测表明GFW可促进荷瘤小鼠体内肿瘤细胞发生凋亡凋亡率为17.79% 透射电镜观察GFW组瘤细胞以凋亡变化为主 瘤细胞体积明显变小细胞表面微绒毛减少甚至消失内膜结构完好核膜清晰细胞核固缩染色质团块状散布核内或边集核膜下并可见凋亡小体 进一步证明了桂枝茯苓丸的抗肿瘤作用机理和诱导肿瘤细胞凋亡密切相关 Survivin是lAP(Inhibitorofapoptosls)家族的一个新成员是目前发现的最强的凋亡抑制因子广泛表达于各种肿瘤组织 Survlvin可直接作用于Caspase主要抑制Caspase3和Caspase7的活性阻断细胞凋亡 Survivin也可通过F21间接抑制easpaseSurvivin与细胞周期调控因子CDK4结合形成SurvivinCDK4复合体使p21从CDK4复合体中释放出来P21进而与线粒体easpase3结合抑制其活性阻断细胞的凋亡过程 Survivin还可通过促进细胞分裂而抑制细胞凋亡 本实验应用原位分子杂交技术检测SurvlvinmRNA结果显示SurvivinmRNA在模型组中高表达表明在肿瘤细胞中该基因转录功能增强基因蛋白生成后通过破坏凋亡平衡参与肿瘤细胞发生发展 与模型组比较GFW组Survixfin基因mRNA表达降低(P0.01)表明GFW组具有下调凋亡抑制基因Survi