热板法镇痛实验.doc

20092010学年 生理科学实验实验报告热板法镇痛实验 摘要 目的 掌握镇痛药的实验法。观察麻醉性镇痛药度冷丁（Dolantin）和非麻醉性镇痛药罗通定（Rotundine）的镇痛效应。 方法 将小鼠置于一定温度的热板上，热刺激小鼠足部产生痛反应，即舔足反应。以小鼠出现舔足的时间作用为痛反应指标，判断药物是否具有镇痛作用。结果 比较不同时间度冷丁、罗通定和对照组的痛阈提高百分率。度冷丁组、罗通定组、对照组的小鼠在注射药物前的痛阈值比较，没有显著性差异（p0.05）；15min时，度冷丁组的小鼠的痛阈提高百分率为163.1%,痛阈值为4714.39 s，罗通定组的小鼠的痛阈提高百分率为100%，痛阈值为3412.47s，两者的痛阈值比较有显著性差异（p0.05）；30min时，度冷丁组的小鼠的痛阈提高百分率为33.1%，痛阈值为249.72 s，罗通定组的小鼠的痛阈提高百分率为93.8%，痛阈值为3815.00 s，两者痛阈值比较有显著性差异（p0.05）,此时是罗通定的痛阈提高百分率较大；30min时，度冷丁组的小鼠的痛阈提高百分率为22.5%，痛阈值为2213.06 s，罗通定组的小鼠的痛阈提高百分率为70.2%，痛阈值为3517.64 s，两者的痛阈值比较没有显著性差异（p0.05）。 结论 注射度冷丁或罗通定后痛阈值均增加。1.材料和方法1.1 动物：2025克左右雌性小鼠1.2 器材：数控超级恒温槽，金属罐1.3 药品：0.25%度冷丁、0.25%罗通定、生理盐水1.4 热板温度：调节温度水浴恒定于550.1C1.5 动物筛选：筛选合格小鼠3只，30秒内有舔后足反应者，并各测定正常痛阈值一次，对逃避跳跃者弃之。1.6实验分组 甲鼠腹腔注射0.25%度冷丁0.1ml/10g 乙鼠腹腔注射0.25%罗通定0.1ml/10g 丙鼠腹腔注射生理盐水0.1ml/10g1.7 测痛阈值 分别在注射药后15、30、60min各测痛阈值一次，并记录痛阈值。1.8 数据统计 数据以xs表示，显著性差异采用t检验。 1.9痛阈提高百分率 按下式计算痛阈提高百分率痛阈提高百分率=用药后平均热痛阈值用药前平均痛阈值用药前平均痛阈值* 100%2.结果 见表1 ，图1。表1. 度冷丁、罗通定对小鼠痛阈的影响(n=9)样本生理盐水痛阈值(秒)度冷丁痛阈值(秒)罗通定痛阈值(秒)015306001530600153060118231421164814232860606022627272222603955143340353171714172326402520233228421211417102627142421352851516101413602018152419136201721182543181423455143718111513223821151530251481520182113601916193225229211511121660151620405860x191916171847242220343834s3.46 4.75 5.29 3.67 5.33 14.39 9.72 13.06 4.68 12.47 15.00 17.64 xs193.46194.75165.29173.67185.334714.39249.722213.06204.683412.473815.003517.64.痛阈提高百分率（%）0 -15.8 -9.4 /163.1 33.1 22.5 /10093.8 70.2 图1 度冷丁和罗通定药物对小鼠热痛阈值的影响*p0.05,* p0.05,*p0.05 vs control group*p0.05 vs rotundine group; #p0.05 vs Rotundine group分析：在度冷丁实验组中，15min时，该组小鼠的痛阈值是最高的，可是在30分钟时，其痛阈值迅速下降，可能和15min实验时，小鼠在热板上停留时间（4714.39 s）过久，导致足受伤；也有可能是实验提供的度冷丁试剂在小鼠体内发挥作用的时间过短。3.讨论3.1 在整个实验过程中，度冷丁组和罗通定组的小鼠与对照组的小鼠的痛阈值有显著性差异（p0.05）。在15min时，观察记录到度冷丁组小鼠的痛阈值与罗通定组小鼠的痛阈值有显著性差异（p0.05）,其中度冷丁小鼠的痛阈值高；30min时，观察记录到度冷丁组小鼠的痛阈值与罗通定组小鼠的痛阈值有显著性差异（p0.05）。在本次试验中，在15min之前，度冷丁的镇痛效果比较理想，15min30min左右，罗通定的镇痛作用比度冷丁有效；60min后，两者镇痛效果没有显著性差异。 原因分析：由于度冷丁的作用时间较短（吗啡皮下注射510mg，作用持续时间约为6小时1 ,而度冷丁的效价强度仅为吗啡的1/71/101，作用时间也较短），而罗通定的作用时间较长，一次口服60100mg，可维持作用25小时1，所以在试验中，开始时，度冷丁的作用强度比罗通定好；过了一段时间后度冷丁的作用强度比罗通定弱。3.2 度冷丁和罗通定的作用机制.3.2.1度冷丁作用机制：疼痛刺激使感觉神经末梢兴奋并释放兴奋性递质（可能为P物质），该递质与接收神经元上的受体结合，将痛觉冲动传入脑内。感觉神经元末梢上存在阿片肽受体，含脑啡肽的神经元释放脑啡肽，后者与阿片受体结合，减少感觉神经末梢P物质的释放，恻然防止痛觉冲动传入脑内。 Dolantin为作用于中枢神经系统的阿片受体而发挥作用的人工合成品，是吗啡的代用品。其作用机理为：Dolantin作用于中枢神经系统的阿片受体，抑制神经末梢释放P物质，细胞钙离子内流，钾离子外流，阻断神经冲动传递。度冷丁阿片受体Ca2+内流，K+外流后膜超极化兴奋传入3.2.2罗通定的作用机制：罗通定为四氢巴汀（左旋），具有良好的镇痛作用，并伴有镇静、安定和催眠作用，进入中枢后优先阻滞脑内DA受体最丰富的脑区的D2受体亚型，然后通过这些神经核与下丘脑弓状核发生神经连接，由此与内啡肽中央导水管灰质内源性抗痛系统相联系，加强脑干部位的抗痛功能，并抑制脊髓背角水平的致痛信息进人脑内，增强阿片肽的功能，最终达到镇痛目的。罗通定阻断脑内DA受体，抑制痛觉传入和痛反应，增加与痛觉有关的特定脑区域脑腓肽原和内腓肽原的mRNA的表达，促进脑腓肽、内腓肽的释放。 参考资料：1 陈季强 . 基础医学教程各论 上册 . 科学出版社 . 2004年版;351,356,357 .2 李秀芹 ，杨腾飞 ，张可璇 ，吕游 ，武静茹. 罗通定协同哌替啶镇痛作