2016HIV病毒与艾滋病实验室检测.ppt

HIV病毒与艾滋病实验室检测 生命的渴望 HIV病原学 中文名称 人类免疫缺陷病毒英文名称 humanimmunodeficiencyvirus HIV定义 引起获得性免疫缺陷综合征和相关疾病的RNA病毒 病毒主要侵犯CD4T细胞 CD4单核细胞和B淋巴细胞 Introduction HIV病毒结构模式图 HIV病原学 Structuralproteins 病毒基因组是两条相同的正股RNA 每条RNA长约9 2 9 8kb 编码了至少9个蛋白 可分为三类 结构蛋白 调控蛋白 辅助蛋白 结构蛋白Gaggag基因产生55kD的蛋白p55 p17基质 p24衣壳 p9核衣壳 p6 PolGag Pol融合蛋白 p10蛋白酶 p50逆转录酶 p15RNA酶H及p31整合酶 EnvEnv起先是160kD的蛋白 gp41与gp120 调控蛋白辅助蛋白 HIV病原学 HIVstructure lifecycle HIV病毒感染病程 现已证实HIV感染可分为4个阶段 但不是所有感染HIV的患者都一定经历这4个阶段 HIV感染的急性初期 HIV感染的慢性无症状期 HIV感染的症状期 晚期 称为AIDS 艾滋病实验室检测 目前检测HIV的方法有100多种 总体来说可以分为两大类 抗体检测病毒检测细胞培养 病毒分离 p24抗原检测病毒核酸检测早期对HIV的诊断主要是通过血清学试验检测抗HIV的抗体 间接地诊断HIV感染 血清学试验分为初筛和确认试验 最常用的初筛试验 酶联免疫吸附试验 ELISA 最常用的确认试验 免疫印迹试验 WB 艾滋病实验室检测 血清学试验 HIV病毒感染后血清学动态变化 HIV病毒感染窗口期 WindowPeriod 艾滋病窗口期是针对艾滋病检测的标志物而言 并非一个笼统的概念 人体感染HIV后 一般需要2 3周 最多6周左右血液中才可检测到HIV抗体或者HIV抗原 因为从感染HIV到机体产生抗体的这一段时间检测不到HIV抗体或者HIV抗原 故称之为窗口期 又叫做空窗期 是英文WindowPeriod的翻译 值得注意的是 感染艾滋病病毒的个体在窗口期内同样具有传染性 在病毒感染后3个月 大多数患者的血清学试验为阳性 尽管有报道有感染1年后才出现血清阳性化 但实际上 所有患者都是在6个月内出现血清的阳性转化 HIV病毒感染窗口期 WindowPeriod HIV病毒感染窗口期 WindowPeriod 艾滋病实验室检测 ELISA 试剂分代情况 第一代HIV诊断试剂原理为间接ELISA法 所用的包被抗原为体外培养的HIV裂解物 含有很多杂抗原 主要HIV结构和表达蛋白浓度不能保证 灵敏度和特异性不高 出现许多假阴性和假阳性 第二代使用基因重组或合成多肽抗原 利用间接ELISA原理 窗口期比第一代诊断试剂缩短了约20天 灵敏度和特异性也有所提高 在一次试验中可同时检测HIV 1和HIV 2抗体 第三代利用双抗原夹心法检测标本中的抗体 酶标记物改为特异性HIV抗原 检测HIV 1 HIV 2和HIV 10抗体 第四代HIV诊断试剂是一种HIV 1 HIV 2抗体与HIV 10亚群抗体及p24抗原的联合检测方法 艾滋病实验室检测 ELISA 艾滋病实验室检测 确证试验WB 结果判读 艾滋病实验室检测 病毒载量测定 病毒核酸提取逆转录PCR 病毒数量预测生存时间 艾滋病实验室检测 流式细胞术 CD4淋巴细胞计数不是诊断性检查 主要用于判断免疫抑制的程度 流式细胞仪 FCM 工作原理 艾滋病实验室检测 流式细胞术 用于HIV感染的疾病分期表 凡CD4 T淋巴细 2