组方加减三黄汤对鼠生化指标的影响开题报告.doc

河北北方学院毕业论文（设计）开题报告题 目： 组方加减三黄汤对鼠生化指标的影响姓 名： 赵维姿 院 系： 动物科技学院 专 业： 动植物检疫专业 年 级： 07动检本 学 号： 20071040130 指导教师： 尹秀玲 开题时间： 2010.12.17 河北北方学院教务处制 论文题目组方加减三黄汤对鼠生化指标的影响课题来源省畜牧局课题，指导计划（2007-3-3）研究方向环境生理与毒理报告内容： 一、立题依据（研究的目的与意义）:大肠埃希氏菌(E. coli)通常称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的，在相当长的一段时间内，一直被当作正常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌。直到20世纪中叶，才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜（禽），常引起严重腹泻和败血症，它是一种普通的原核生物，是人类和大多数温血动物肠道中的正常茵群。但也有某些血清型的大肠杆菌可引起不同症状的腹泻，根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为5类：致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠出血性大肠杆菌(EHEC)、肠黏附性大肠杆菌(EAEC)。该病还可能与其它疾病并发或继发于其它疾病，这给养殖户临诊带来了困难，从而造成临床上用药混乱，极易产生耐药性，用药控制费用高但效率不佳，且会造成药残和降低产品品质，给养殖户造成很大经济损失1-2。E.coli之所以产生多重耐药性，可能与耐药性质粒3-4、菌体细胞膜通透性、菌体上存在的主动外排系统有关5 。在研究中发现菌体细胞膜通透性的改变不仅能引起低程度的耐药，而且与细胞膜上的主动外排系统有关，菌体细胞膜通透性的改变与主动外排系统的超量表达共同作用可引起细菌对多种抗菌药物高频率高水平耐药，耐药性质粒的存在可使多重耐药水平提高数倍。中药在临床治疗方面具有独特作用，据报道，中药的活性成分能够明显抑制耐药大肠杆菌的外输系统，对R质粒具有明显的消除作用6-8。通过对传统中药三黄汤加减配成不同组方，观察体内外抑菌效果，筛选出能够抑制大肠杆菌药物耐药性的抑制剂，来消除其多重耐药。本实验先通过在体外对人源大肠杆菌进行临床分离细菌鉴定、分离培养、血清型鉴定和耐药性检测，然后再将分离鉴定的菌株回归到动物体内，对鼠的免疫力进行检测，获取有效组方应用于临床，可为该病今后防治提供一定依据。二、研究内容(内容、结构框架或研究提纲以及要突破的难点)：通过制备组方三黄汤，培养大肠杆菌，对鼠进行攻毒与治疗，测定其免疫指数，检测生化指标，最后来判断组方的疗效。本实验主要研究组方加减三黄汤，来消除或抑制大肠杆菌的耐药性。三、研究方法与技术路线:1 经临床分离9生化鉴定的人源大肠杆菌进行血清型鉴定，获得致病性高度耐药的2751（O148+O1）、2952(O142+O26+O13)大肠杆菌10。（北京天坛生物制品检定所鉴定，本室保存）。接种于培养基上，37培养24h。中药组方：方一：加减三黄汤（Modified Three Yellow Soup, MTYS）黄芩12g、黄连12g、穿心莲9g、苦参9g、大青叶15g、厚朴9g、秦皮6g、金银花15g、木香6g、甘草9g、黄芪9g、黄柏12g、茯苓9g。方二：加减黄芩汤（Modified Scutellariae soup，MSS）：黄芩12g、黄连12g、黄柏9g、芍药9g、甘草6g、赤芍15g。3将70只小鼠分为健康组A组、攻毒2751组B组、攻毒2952组C组、攻毒2751+MSS组D组、攻毒2952+MSS组E组，攻毒2751+MTYS组F组、攻毒2952+MTYS组G组）。将大肠杆菌2751（O148+O1）2952(O142+O26+O13)感染小鼠，109CFU耐药大肠杆菌0.2mL感染小鼠，治疗组以相当于生药0.5ml灌服，连用7天，常规饲喂，检测鼠体免疫力。4 .检测指标4.1测定相应体重变化、肝肾功能的血常规检验指标来判定抑制耐药程度，获取有效组方。4.2分离肝、脾、法氏囊测定其免疫指数4.3分离血清、对小鼠进行药物作用前后的感染试验，检测生化指标，谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、-谷氨酰转移酶（GGT）、碱磷酶（ALP）采用速率法；尿素氮（BUN）、尿酸 （UA）采用酶法； IgG、IgA、IgM利用免疫比浊方法，在日立7150全自动生化分析仪上进行，试剂均购于上海长征公司。4.4中药组方疗效两种大肠杆菌的培养两种三黄汤的制备复方中药的制备动物分组、攻毒及治疗生化指标的检测免疫指数的测定观察结果及临床症状判定中药组方效果四、研究进度安排2010.11-2010.12 查阅文献2011.01-2011.02 简单复方中药对多重耐药大肠杆菌的体外抑制试验2011.01-2011.03 人源型大肠杆菌菌株回归试验1.对小鼠感染用药前后体重变化2.对小鼠感染用药前后免疫指数检测：血液采集与血清制备标号待测同时检测肝脾法氏囊免疫力。3.生化指标：检测肝、肾功能及免疫力的对比试验。4. 2011.04-2011.06 论文撰写。 五、预期研究结果通过加减三黄汤对多重耐药大肠杆菌感染小鼠的抑制作用研究，筛选出对耐药菌有抑制作用且能提高免疫力的中药组方。六、参考文献： 1WierupM. The control ofmicrobial diseases in animals: alternatives to the use of antibiotics. IntJ Antimicrob Agents, 2000, 14 (4): 315319.2Laval A. Veterinary use of antibiotics and resistance in man：what relationJ. Pathol Biol(Paris) , 2000, 48 (10) : 940944.3舒秀伟, 李子玉, 于连智等. 沈阳及周边地区鸡大肠杆菌的分离及对氟喹诺酮类药物的敏感性实验J. 中国兽医杂志, 2001, 35(3): 7104黄加权, 高美英. 大肠杆菌耐药现状与耐药质粒分析J. 中华传染病杂志, 1996, 14(2): 70735黄瑞, 穆容普. 多重耐药伤寒沙门氏耐药质粒的研究J. 中华传染病杂志, 1990, 8(3): 1391426孙晓明, 文宁, 张天霞. 胸腺肽的临床应用J.中国综合临床, 1995, (02)， 60627沈建忠, 李俊锁, 梁斌等. 沙拉沙星对大鼠生殖毒性和致畸性的研究J. 畜牧兽医学报, 2001, 32(4): 3753788邱明生.中草药在养殖业中的应用优势J.四川畜牧兽医, 2000, 27(2):429朱岩丽, 康丽, 杨其峰等. 泰安周边地区鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验J.山医.2007.15(2): 67-6810陈溥言. 兽医传染病学M. 北京: 中国农业出版社, 2006, 第二版, 11111811陆承平. 兽医微生物学M.北京: 中国农业出版社. 2001,第三版, 215-223指导教师意见：论文选题有实际意义，设计合理，技术路线可行，很大可能能达到预期结果，同意开题。指导教师（签名） 年 月 日专 家 组 成 员（不得少于三人）姓名职称所在教研室张海旺教授解剖生理教研室苏杰高级实验师临床卫检教研室崔平副教授病理寄生虫教研室梁俊荣教授生理生