质粒)∶一个在酵母中发现的质粒.doc

1、2 m plasmid （2 m 质粒）：一个在酵母中发现的质粒，被用作一系列克隆载体的基础。3、auxotroph（营养缺陷型）：指的是一种突变了的微生物，必须对它提供一些对野生型而言并不必需的营养成分才能生长。4、bioinformatics（生物信息学）：通过计算机的使用进行研究基因组、后基因组的方法。5、cell-free translation system（无细胞翻译系统）：包含蛋白质合成所需所有成分的细胞抽提物，能够使加入的mRNA分子被翻译。6、chromosome walking（染色体步查）：通过检测被克隆的DNA的重叠片段而构建一个克隆图谱的技术。10、cosmid（黏端质粒，黏粒）：通过把噬菌体的cos位点插入质粒构成的克隆载体，用来克隆长度超过40kb的DNA片段。11、disarmed plasmid（解除武装的质粒）：一个去掉部分或所有的T-DNA基因的Ti质粒，不在具有使植物细胞癌变的能力。12、DNA chip（DNA芯片）：一块硅质薄片，携带高密度的寡核苷酸矩阵，用于转录组或其他研究中。13、fluorescence in situ hybridization（FISH）(荧光原位杂交)：一种杂交技术，用不同颜色的荧光染料标出两个或更多个基因在由单个原位试验制备的 染色体上的位置。14、footprinting（足迹法）：使用DNase I 降解DNA，通过检测被保护的磷酸二酯键，来鉴定蛋白质结合在DNA上的位点。15、gel retardation（凝胶阻滞）：根据结合了蛋白质的DNA在凝胶电泳中行进较慢的特点，来检出它们的技术。17、genomic library（基因组文库）：大量的克隆的集合，包含了某个生物体的所有基因。18、heterologous probing（异种探针技术）：通过使用标记了的核酸分子探针检测相关分子的方法。19、hybrid-release translation（HRT）(杂交释放翻译)：一种识别由克隆基因编码的翻译产物的方法。20、immunological screening（免疫学筛查）：利用抗体检测由克隆基因编码的多肽。21、klenow fragment（of DNA polymerase I）（克列诺片段）：一种DNA聚合酶，它是通过化学修饰大肠杆菌DNA聚合酶I获得的，通常用于链终止法DNA测序。22、multigene family（多基因家族）：同一生物体内的大量相同或相关的基因，它们通常编码属于一个家族的相关多肽。23、nick translation（切口平移）：利用DNA聚合酶I修复缺口，通常为了向DNA分子导入标记的核苷酸。24、polymerase chain reaction（PCR）（聚合酶链式反应）：一项在特定酶的作用下，对目的DNA序列进行大量扩增以产生DNA分子的许多拷贝的技术。25、RACE（rapid amplification of cDNA ends）(cDNA末端快速扩增)：一项基于PCR技术，用于对RNA分子末端作图。26、reporter gene（报告基因）：一个表型能够在转化生物体中被检测出来的基因，经常用作调节区德删除分析。27、restriction fragment length polymorphism（RFLP）（限制性片段长度多态性）：突变导致限制性内切酶位点发生改变，继而导致DNA分子在限制性内切酶作用下酶切片段的改变。28、shotgun approach（鸟枪法）：一种基因组测序方法，是将要测序的分子随机切成多个片段分别进行测序的方法。29、shuttle vector（穿梭载体）：能够在多种生物体内进行复制的载体分子。30、transposon（转座子）：能够在基因组内从一个地方转移到另一个地方的DNA序列。1、1973年，Cohen和Boyer体外构建一个功能性质粒，标志着一个新的学科基因工程诞生，同时也标志着一个新的技术产生现代生物技术产业从这里萌发。4、按DNA来源将基因克隆载体分为：质粒载体；病毒或噬菌体载体；质粒DNA与病毒或噬菌体DNA组成的载体；按应用范围载体分为：表达型载体；启动子探针载体；互补DNA（cDNA）克隆载体；按应用对象载体分为：原核生物载体；植物载体；动物载体。5、噬菌体的生长途径有两种：裂解途径和溶源途径。6、DNA浓度测量时，通常吸收量在260 nm被测量，在该波长情况下，1.0的吸收值对应于每毫升中50 g双链DNA。7、附着在质粒DNA上的溴乙锭（EtBr）可以用正丁醇萃取出来，而氯化铯则可以用透析的方法除去。8、将黏末端加在平末端分子上的方法：DNA接头（linker）；寡核苷酸接头（adaptor）；加同聚物。【也作简答题】9、解决包装限制和多酶切位点的问题后，就可以着手开发各种基于噬菌体的克隆载体。最先缠上的两类载体是插入载体和置换载体。10、M13载体可以携带不超过3 kb的DNA片段，大多数质粒的携带量不超过8 kb。EMBL4置换载体能够达到20 kb，对某些黏性质粒而言是40 kb。11、开发出能够携带更长DNA片段的克隆载体:BAC，细菌人工染色体；PAC，P1衍生的人工染色体；YAC，酵母人工染色体。12、穿梭载体是在两种宿主细胞内都可以进行复制和筛选。13、两类用于感染植物的病毒克隆载体：caulimovirus载体，geminivirus载体。14、在哺乳动物中克隆基因的3个目的：做基因敲除；生产重组蛋白质；基因治疗。15、导入外源DNA分子后能稳定存在的受体细胞称为转化子；含有重组DNA分子的转化子称为重组子；重组子中含有外源目的基因的成为阳性重组子。18、酶法标记探针方法：缺口平移、末端填平、随机引物法。19、寡核苷酸链的合成方法：固相亚磷酸三酯法；磷酸二酯法；磷酸三酯法。20、DNA测序方法：链终止法和化学降解法。21、热循环测序反应和PCR反应的不同之处，第一个是在反应中只添加一个引物，这就意味着不会进行PCR扩增，相反只有DNA模板中的一条链被复制；第二个不同之处在于反应体系中使用不同的双脱氧核苷酸，因此新合成的分子是链终止性质的。22、第一个被完整测序的DNA分子是1975年完成的噬菌体174。23、克隆基因转录的研究方法:电子显微镜分析核酸分子；通过核酸酶处理来研究DNA-RNA杂交物；通过引物延伸反应来研究转录物；其他一些研究RNA转录的技术（Northern杂交、反转录PCR、cDNA末端快速扩增、RNA测序）。【也作简答题】24、基因表达调控的研究：识别DNA分子的蛋白结合区；通过缺失分析来识别控制序列；研究翻译产物。【也作简答题】25、1995年，第一个能够独立生存的生物体的基因组被完全测序出来，是流感嗜血杆菌。【也作选择题】26、转录物组，它是一个细胞中信使RNA（mRNA）的总称，反应了这个细胞中全面的基因表达模式。【也作判断题】28、蛋白与蛋白之间的 相互作用的 研究方法主要有噬菌体展示和酵母双杂交系统。3、（十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）能够和核酸一起形成不容的混合物。【也作选择题】5、用碱变性的方法提取质粒，苯酚提取和柱层析中的进一步处理机没有必要了。6、密度梯度离心能够分离DNA、RNA和蛋白质，并且能够代替苯酚提取和柱层析来对DNA进行纯化。7、密度梯度离心在溴乙锭存在下能够用来从非超螺旋分子中分离超螺旋DNA。10、pUC8载体中的限制性酶切位点与存在于M13mp系列载体中的限制性酶切位点一样。14、置换载体可携带的DNA片段长度通常超过了插入载体处理范围。16、营养缺陷筛选法技术并不局限于大肠杆菌，甚至不局限与细菌。在酵母和丝状真菌中同样可以筛选克隆基因。RT-PCR的全称为反转录聚合酶链式反应。RACE 的全称为互补DNA末端快速反应。17、PCR的双链产物非平末端，在两条链的3末端都悬挂着一个腺苷酸。18、自动DNA测序是基于链终止法。19、后基因组学或称功能基因组学将对基因组序列进行分析，然后定位基因、调控序列和其他感兴趣的特征。【也作选择题】20、生物信息学能够通过计算机的使用来帮助基因组学和后基因组学的研究。【也作选择题】32、（W. Arber），（H.O. Smith）和（D. Nathans）获得1978年诺贝尔奖，因他们发现限制性内切酶。33、（pGEM3Z）用于克隆DNA的体外转录。35、（Ri质粒）用作从转基因植物中获得大量蛋白。25、两类用于感染植物的病毒克隆载体：caulimovirus载体，geminivirus载体。PCR的双链产物非平末端，在两条链的3末端都悬挂着一个腺苷酸。营养缺陷筛选法技术并不局限于大肠杆菌，甚至不局限与细菌。在酵母和丝状真菌中同样可以筛选克隆基因。腺伴随病毒（AAV）总是插入到人类第19号染色体。PBR327对生物防范很重要。PBR322的优点：PBR322的大小小于10kb；PBR322拥有两套抗生素耐药性基因；PBR322有相当高的拷贝数。（EDTA）能够螯合钙离子，同时能够抑制降解DNA的酶。【也作选择题】pGEM3Z启动子有的被T7噬菌体编码的RNA聚合酶专一性识别。【也作选择题】M13mp8与M13mp9的多克隆位点顺序相反。【也作选择题】M13的优点:使人们可以获得单链的被克隆的DNA。【也作选择题】PCR的基本原理是DNA半保留复制噬菌体只能包装37-52kb的DNA分子。基因工程诞生的理论基础是：基因的载体是DNA，DNA分子的双螺旋结构和半保留复制机制，遗传信息的传递方式；基因工程诞生的技术上三大发明是：工具酶，DNA分子的核苷酸序列分析技术，基因工程载体。基因工程的基本实验步骤：51.产生重组DNA分子；2转化，用载体将目的基因转运到一个宿主细胞中；3.扩增，载体在宿主细胞内增殖；4.复制遗传；5.产生单一克隆群。PCR实验的基本步骤：41. DNA分子变性；2.DNA分子在特殊位点发生退火；3.Taq聚合酶在引物的引导下合成于模板DNA互补的新链；4.又开始第二轮的变性。“严紧型”质粒同“松弛型”质粒有何区别？“严紧型”质粒同“松弛型”质粒的区别：“严紧型”质粒指有些质粒处于细菌染色体复制所使用的酶系的严紧控制下，这时他们的复制与宿主的繁殖相结合，致使每个细菌细胞中只有1个或几个质粒，这种质粒即为“严紧型”质粒；“松弛型”质粒指有些质粒在细菌细胞中处于松弛控制状态，质粒在细胞中的拷贝数为10200个，更为重要的是松弛型质粒的拷贝数在宿主蛋白停止合成时，每个细胞中的质粒可以增加数千份，这种质粒即为“松弛型”质粒噬菌体的生长途径有：溶源途径，裂解途径。c I基因有何作用？ c I基因的作用：在c Its温度敏感突变中，c I基因在30时发挥作用，在该温度下正常的溶源性能够发生。但在42时，c Its温度敏感突变基因就不能够正常工作，溶源性也就不能够继续保持。简述Southern印迹杂交的原理和方法。（5分）1975年E.M. Southern首创的一种核酸分子杂交技术（1分），它是基于毛细现象和两条单链核酸间互补碱基能够专一配对的原理进行的，属于固相液相杂交（1分）。首先用合适的限制酶切割DNA，电泳分离后，将膜放置在凝胶上（1分），将吸水纸放在膜上，利用干燥的吸水纸产生的毛细作用使液流经过凝胶，从而将DNA片断由液流携带从凝胶转移并结合在固体支持物表面（1分），最后用相应的探针与之杂交（1分）。Northern印迹杂交法和Southern印迹杂交法有何不同？61)转移的对象不同，Northern印迹转移的是RNA，Southern印迹转移的是DNA。2)电泳前的处理不同，RNA在电泳前需要甲醛变性处理，DNA在电泳前不必变性处理。3)电泳后的处理不同，RNA在电泳后可直接转移到固相支持物上，DNA在电泳后需要经过碱变性处理及相应的中和处理。将黏末端加在平末端分子上的方法3：DNA接头（linker）；寡核苷酸接头（adaptor）；加同聚物。基因组文库的制备步骤5：纯化全细胞DNA；部分限制性酶切得到适当大小的片段；插入到合适的载体上；转化受体菌；无性繁殖获得一大群含不同外源DNA片段的克隆。酶法标记探针方法3：缺口平移、末端填平、随机引物法。克隆基因转录的研究方法4:电子显微镜分析核酸分子；通过核酸酶处理来研究DNA-RNA杂交物；通过引物延伸反应来研究转录物；其他一些研究RNA转录的技术（Northern杂交、反转录PCR、cDNA末端快速扩增、RNA测序）。基因表达调控的研究3：识别DNA分子的蛋白结合区；通过缺失分析来识别控制序列；研究翻译产物。从细菌细胞培养物中制备全细胞DNA的步骤可分为哪四个阶段。4 P251.培养细胞的生长和收集；2.细胞被破碎并释放出内含物；3.细胞抽提物被除去DNA外的所有成分；4.得到的DNA溶液被浓缩。异硫氰酸胍纯化DNA的作用 （2分）1.它能够使除了核酸以外的所有生化成分辨性和溶解；2.在异硫氰酸胍存在情况下，DNA会牢固的结合在二氧化硅颗粒上。碱变性提取质粒的原理 （5分）在一个窄的pH范围内非超螺旋DNA变性，而超螺旋质粒DNA不发生变性（1分）。如果氢氧化钠被加入细胞提取液或裂解上清液中，pH被调到12.012.5的范围内（1分），连接非超螺旋DNA分子的氢键被打破，导致双螺旋松解，两条核酸链相互分离（1分）。如果此时加入酸，这些变性DNA链会杂乱的聚集成一堆（1分）。这些不溶的交联网状物质会被离心除去，只剩下纯净的质粒DNA在悬液中（1分）。用一系列限制性核酸内切酶切割pPbS质粒实验结果见下表，可推断该质粒的酶切图谱为4限制性核酸内切酶切割片断大小/kbEcoREcoR1.5/0Hpa1.40.4 Alu0.7Alu1.5Hpa1.5Alu1.2 0.3EcoR+ Hpa1.4 0.1EcoR+ Alu0.8 0.4 0.3Hpa+ Alu0.7 0.5 0.3重组子的Lac基因筛选原理4 85大肠杆菌LacZ宿主菌缺少-半乳糖苷酶的-肽段（1分），载体pUC8等只含有LacZ基因 （1分），当pUC8等载体转化大肠杆菌LacZ宿主菌，可形成完整的-半乳糖苷酶分子，在IPTG的诱导下水解X-gal形成蓝色菌落（1分）。当外源目的基因插入载体pUC8等时，破坏了LacZ基因，使转化菌落保持白色（1分）。重组噬菌体的鉴别方法 10 881.噬菌体载体的LacZ基因插入失活：包含正常噬菌体的噬菌斑是蓝色，重组体噬菌斑是无色透明的；2.cI基因的插入失活：正常的噬菌斑显得混浊，cI基因被破坏的重组体形成的噬菌斑清澈；3.Spi表型筛选：Spi+噬菌体不能够侵染那些已整合了P2噬菌体的大肠杆菌细胞，外源基因的插入使表Spi+噬菌体变成了Spi-噬菌体，因此只有重组体才能产生噬菌斑。4.根据基因组大小的筛选：噬菌体只能包装37-52kb的DNA分子，噬菌体载体DNA分子小于37kb，因此只有插入外源目的基因的噬菌体载体才能够包装到成熟噬菌体颗粒中。重组DNA导入植物细胞的方法12分农杆菌的Ti质粒转化法：叶盘转化法；整体植株接种法；原生质体共培养法；悬浮细胞共培养法。DNA直接转移法：多聚物介导法；电穿孔法；激光微束穿孔法；显微注射法；超声波介导法；基因枪法；脂质体介导法；花粉管通道法pBR322这个名字的含义 3分1.“p”说明它是一个质粒；2.“BR”表示最初构建它的实验室；3.“322”把该质粒和该实验室构建的其它质粒区分开。M13mp7图谱如下图所示，如用EcoR、BamH、Sal中的一种去酶解M13mp7，会出现什么情况？再加入外源DNA酶连会出现什么情况？ 4 101M13mp7的多接头会被切下。再加入外源DNA会出现三种连接情况：1）插入了新的DNA；2）插入了多接头；3）载体自连。如何利用T-DNA将外源DNA转化到植物细胞中去 6 123双载体策略：构建一个双质粒系统，一个是除去T-DNA的Ti质粒A，另一个是与T-DNA