洁净区消毒效果验证报告.doc

洁净区消毒效果验证报告项目：洁净区域消毒剂消毒效果验证报告编制人时间审核人时间批准人时间u 验证目的：公司消毒剂使用1：50的84消毒液和75%酒精。验证使用的消毒剂对洁净区域的消毒效果，使用新的消毒剂或每次更换消毒剂前，需做此验证，确认消毒剂的消毒效果。u 验证依据：a) GB15981-1995消毒与灭菌效果的评价方法与标准b) GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准c) 生产管理规范d) 实验室手册u 范围：a) 生产洁净区与实验室洁净区表面。b) 生产人员手。u 基本条件：a) 试验设备：生化培养箱、灭菌锅、冰箱、电炉、玻璃仪器、超净工作台。b) 试剂条件：营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、纯化水、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠球菌。u 验证方案：a) 细菌总数检测：洁净区表面试验：l 经消毒剂擦拭后的区域，立即取样l 用浸有无菌生理盐水的棉拭子在25cm2的范围内涂抹2次（往返算1次）l 剪去操作者手接触部位，将棉拭子放入10mL灭菌生理盐水中，用力振荡80次l 分3个梯度稀释，各取1mL放于平板内，倾注营养琼脂培养基（每个稀释度倾注2块平板），在37培养24小时，观察结果，取菌落数为30300的平板计数菌数/cm2=平均菌数稀释倍数/采样面积（cm2）生产人员手试验：l 手消毒后，立即取样l 被检人五指并拢，用浸有无菌生理盐水的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦 2 次(一只手涂擦面积约 30cm2)，并随之转动采样棉拭子l 剪去操作者手接触部位，将棉拭子放入10mL灭菌生理盐水中，用力振荡80次l 分3个梯度稀释，各取1mL放于平板内，倾注营养琼脂培养基（每个稀释度倾注2块平板），在37培养24小时，观察结果，取菌落数为30300的平板计数菌数/每只手=平均菌数稀释倍数b) 致病菌检测：消毒剂定性消毒试验：l 将浓菌液稀释至51055106cfu/mL的菌悬液。l 将灭菌试管10支排列于试管架上，标记管号。l 每支试管加纯化水2.5mL，灭菌后待用。l 于第1管内加原浓度消毒液2.5mL，混匀后取2.5mL移入第2管，再次混匀，从第2管中取2.5mL移入第3管，以此类推至第9管，混匀后弃去2.5mL，第10管中不加消毒液做对照。l 加菌悬液2.5mL于各类管中，混匀。l 各试管内取出0.5mL加入4.5mL营养肉汤管内，37培养48h，观察初步结果，无菌生长管继续培养至第7天。l 试验重复5次。消毒剂定量消毒试验：l 取1mL菌液逐倍稀释至30300cfu的菌悬液，估算出每毫升的菌数。l 将消毒剂用灭菌后的纯化水稀释成3个不同浓度，各取4.5mL分别加入三个试管内。l 在三个试管中分别加入0.5mL菌悬液，混匀。l 各取1mL放于平板内，倾注营养琼脂培养基（每个稀释度倾注2块平板），在37培养24小时，观察结果，取菌落数为30300的平板计数l 推算出每个样本存活菌数（cfu/mL），按下列公式计算杀灭率： 杀灭率（%）=（对照组存活菌数-试验组存活菌数）/对照组存活菌数100%l 试验重复5次。u 结果判定：a) 细菌总数检测判定：l 物体表面细菌总数5cfu/cm2l 生产人员手150cfu/每只手b) 致病菌检测判定：消毒剂的定性判断：l 若营养肉汤浑浊，则表示有菌生长，记为阳性，以（+）表示。l 过培养至第7天，营养肉汤内澄清，则表示无菌生长，记为阴性，以（-）表示。l 对难以判定的，取0.1mL接种于营养琼脂平板，放37培养48h，观察菌落形态；判断是否有菌生长。l 5次试验，均无指示菌生长表示达到灭菌效果。消毒剂的定量判断:l 5次试验的杀灭率均99.9%判为消毒合格。u 验证结论：复核人员: 报告时间: 年 月 日u 验证记录：A1、洁净区表面试验：试验方法：用浸有无菌生理盐水的棉拭子在25cm2的范围内涂抹2次（往返算1次），剪去操作者手接触部位，将棉拭子放入10mL灭菌生理盐水中，用力振荡80次，分3个梯度稀释，各取1mL放于平板内，倾注营养琼脂培养基，在37培养24小时，观察结果检测部位：检测部位：工作台面稀释倍数平板1平板2平均菌数菌数/cm2=平均菌数稀释倍数/采样面积（cm2）=52.52/25=4.2检测部位：墙面稀释倍数平板1平板2平均菌数菌数/cm2=平均菌数稀释倍数/采样面积（cm2）=检测部位：生产设备直接接触零件的面稀释倍数平板1平板2平均菌数菌数/cm2=平均菌数稀释倍数/采样面积（cm2）=单项试验结论： 检验人员： 时间： A2、生产人员手试验：试验方法：被检人五指并拢，用浸有无菌生理盐水的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦 2 次(一只手涂擦面积约 30cm2)，并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子放入10mL灭菌生理盐水中，用力振荡80次，分3个梯度稀释，各取1mL放于平板内，倾注营养琼脂培养基，在37培养24小时，观察结果检测对象：生产人员手1稀释倍数平板1平板2平均菌数菌数/每只手=平均菌数稀释倍数=检测对象：生产人员手2稀释倍数平板1平板2平均菌数菌数/每只手=平均菌数稀释倍数=单项试验结论： 检验人员： 时间： B1、消毒剂定性消毒试验：试验方法：每支试管加纯化水2.5mL，于第1管内加原浓度消毒液2.5mL，混匀后取2.5mL移入第2管，再次混匀，从第2管中取2.5mL移入第3管，以此类推至第9管，混匀后弃去2.5mL，第10管中不加消毒液做对照。加菌悬液（51055106cfu/mL） 2.5mL于各类管中，混匀。各试管内取出0.5mL加入4.5mL营养肉汤管内，37培养48h，观察初步结果菌悬液：金黄色葡萄球菌试管管号试验1试验2试验3试验4试验5菌悬液：大肠杆菌试管管号试验1试验2试验3试验4试验5菌悬液：白色念珠球菌试管管号试验1试验2试验3试验4试验5单项试验结论： 检验人员： 时间： B2、消毒剂定量消毒试验：试验方法：将消毒剂用灭菌后的纯化水稀释成3个不同浓度，各取4.5mL分别加入三个试管内。在三个试管中分别加入0.5mL任意一种菌悬液，混匀。推算出每个样本存活菌数（cfu/mL），计算杀灭率所选对照组（金黄色葡萄球菌）菌落数计数：稀释倍数平板1平板2