瓦里安VARIAN LC Galaxie 中文操作手册.doc

Galaxie Workstation高效液相色谱仪操作手册第一章1.11.2仪器开关机开机步骤关机步骤 3 36第二章建立分析方法 9第三章 3.1 3.2进样分析单一样品进样分析多个样品进样分析 18 18 22第四章 4.1 4.2数据处理定性分析定量分析 27 27 32第五章报告制作 41第一章 仪器开关机 (210/325/410)1.1开机步骤步骤 1开机前请先确认下列几项状态:1. 确认流动相是否正确。2. 确认流动相是否充足。3. 确认流动相是否已经排除气泡。4. 确认色谱柱安装方向是否正确。仪器与计算机联机前请先确认下列几项状态:1、 将泵电源打开。2、 并将Purge阀打开，Prime泵使管路中无气泡。3、 当管路中无气泡时，stop泵，并记得要将Purge valve关闭。当以上步骤均已确定执行后，开启计算机，出现以下画面后，点击桌面上”Galaxie”快捷方式。请点击此图标步骤 2(i) User identification处输入用户名称。(ii) 选择所属的Group、Project。(iii) 输入password。(iv) 点击右方”OK”键。步骤 3 1. 点击ok后会出现以下画面。点击”System”。步骤 41. 点击小方格(软件与仪器联机)步骤 5 此时可由下方Status overview(按下左方overview选择”General”)可观察目前仪器各项参数之状态。步骤 6Status overview(按下左方overview选择”Not Ready”)可观察目前仪器还有那些参数未达设定值。注意:*此时已完成开机步骤，接下来就可以打开分析方法开始进样分析。2.2关机步骤步骤 11. 将一个装有洗针溶剂的样品瓶放在自动进样器上，并记住摆放位置。2. 执行原厂工程师所建立的清洗色谱柱及预柱的方法。(AcquisitionQuick Start找出Wash Column的method)步骤 21. 选择”Wash Column”方法并点击”OK”步骤 31. 在Vial处输入装洗针溶剂的样品瓶位置点击”Start”步骤 41. 确认Wash-Column方法已经执行并且Run完结束后。2. 将325的UV Lamp电源关闭。（见下图）再将仪器前方的开关扳至”O”地址即可。3. 再将410电源关闭，该开关在仪器右后方。4. 关闭泵（见下图）再将210电源关闭，该开关在仪器前方，扳至”O”地址即可。5. 再将Galaxie软件关闭，计算机关闭。完成关机程序。第二章 建立分析方法1. 在建立方法之前，必须了解目前仪器的参数设定:(1) Galaxie WS软件最多可控制四台仪器。因此在方法建立时务必确认该分析方法是针对哪一台机器设定的。2. 一个完整的分析方法包含下列几个部分:(1) LC 控制参数 (Control)：该部分包含了410 Autosampler、210 Pump、325 Detector等参数设定。(2) 数据处理部份：该部分包含了Integration events、Peak identification等参数设定。(3) 报告编辑：可按照使用者的需求编辑所需的报告格式。了解上述设定之后，便可以开始建立分析方法:以下便针对分析方法的建立及各项参数的意义作一简单示范步骤 11. 先点击Data页面步骤 21. 建立新方法，请选择FileNew Method步骤 3 点击后出现下面窗口，此时需要选择该新方法属于哪一个仪器使用。选好后点击”Next”继续。步骤 41. 输入 方法名称2. 输入 方法描述(可以不填写)3. 按OK键继续输入方法名称输入方法描述步骤 51. 出现方法文件。步骤 61. 点击method中的”control”选项。2. 点击右方210小图标。3. 210的各项控制参数即出现在右方画面，软件会自动将硬件组配抓取至method中。以下针对各项控制参数加以介绍：步骤 7Elution: 1. Solvent: A,B请在下拉菜单中选取正确的Mobile phase种类，如软件内置无所需溶剂，则此项不需设定。2. Compressibility：内建参数不需设定。3. Pressure constant：内建参数不需设定。4. Refill time：内建参数不需设定。5. Gradient：可由中间方格更改，按左方”键可以增加一行。A、 B的比例变化可通过调整B%的参数以改变A、B比例。6. Equilibrium time：使用梯度时，在最后一个溶剂比例结束后，泵将会在”几分钟”内到达初始比例。此为Equilibrium time的涵义。7. Hold time：泵在到达上述初始值后，停留”几分钟”后会将仪器状态由Hold转变成为Idle。此为Hold time之涵义。第6及第7点均是为了让泵更稳定，这样实验所得的结果也能更加稳定。8. 下方出现的图示，为梯度示意图。步骤 8 Misscellaneous：1. Start mode：请选择inject trigger on pumpA2. End of Sequence：请选择Leave pump on以上设定如无特别需要，建议不需要更改内容。步骤 9Pressure：保护系统及色谱柱的压力设定Min. Pressure ：请设定100psiMax. pressure：请设定4000psi210 pump设定结束。步骤 101. 以下为325 detector的设定：(i) 点击325 图标Signal：Detector Bunch Rate、Noise Monitor Length、Response time: 定义为检测取样的点数及噪声监控时间选取点数。Detector Bunch Rate：建议设定为2 (10Hz)。Noise Monitor Length：建议设定为64。Response time：建议设定为0.5。可以利用下方字段设定所需要的波长与开始变化波长时间。以图示为例：开始以254nm波长收集信号，第三分钟后将波长改为230nm。Time(min)：可以用来更改或新增设定。Wavelength：波长，可依user方法新增波长。325 UV波长设定完成，其余三项设定包括Peak sensor、Relay、Miscellaneous均无需设定。步骤 111. 点击”410 Autosampler410 Autosampler设定：1. Injection(i) Injection mode： None：不做任何方式注射。 Partial loopfill：使用用户设定的样品体积进样。 Full loop：使用全loop样品体积进样。2. Wash(i) Wash mode： None：不洗针。 After injection：单次进样后洗针。 After sequence：完成sequence序列后洗针。(ii) Wash volume：洗针体积。其余不需更改设定，使用默认值即可。步骤12此时分析方法已建立完成，点击File- Save - Save method将方法存盘。第三章 进样分析3.1 单一样品进样分析步骤 11. 请参考第一章开机步骤，将仪器开启并联机。步骤 2启动Monitor baseline，待pump压力稳定。1. System页面Acqusition Monitoring Baseline步骤 3选择要使用的分析方法OK步骤 41. 此时210与325会按照Method设定达到初始值。2. 观察210与325仪器状况： 210：压力不再变动 ； 325：读值稳定如果上述条件均成立，便可以中止monitor baseline，进行分析步骤。步骤 5点击Acquisition-Quick start也可点击上方注射针状小图标。步骤 61.上方字段请选择要使用的仪器名称（如果只有单一仪器，则无须选择）。2.下方字段请选择要使用的分析方法。（请使用下拉选单进行选择）3.选择完成后请按OK。步骤71. File prefix: 输入 Sample name 2. Run identifier: 流水编号3. Vial: 如有使用自动进样器时，需设定sample vial置于几号位置4. Acquisition length: 收集信号的时间。設定完成按下Start進行分析3.2 多个样品进样分析1. 多个样品进样分析与单一样品进样分析，不同处仅在于多个样品进样分析是使用Sequence工作窗来达成目的。2. 以下介绍Sequence的使用方法：步骤 11. 如果仪器处于关机状态，请先参考第一章的开机步骤，将仪器开启并联机。2. 于Data页面FileNewNew Sequence建立新的Sequence工作窗体步骤 2选择要使用哪个仪器进行分析（如只有单一仪器则无须设定）。选择完成后按Next继续步骤 3选择有多少样品需要分析（样品数目等于Sequence行数）。选择完成后按Next继续步骤 4输入Sequence保存的文件名及叙述（叙述可不输入）。选择完成后按OK继续。步骤 51. Method:在下拉菜单中选取所采用的分析方法。2. RunName（prefix）:输入样品名3. RunID（Suffix）: 输入流水号4. Run time: 输入采集数据的时间5. No. of injections: 单一样品进样几次6. Vial #:样品瓶位置7. Inj Vol: 进样体积（L）输入以上项目即可，输入完成后点击上方开始箭头图标便开始进样分析。下页图标即为范例。第四章 数据处理4.1 定性分析步骤 11. 打开数据文件在Data页面FileOpen Chromatogram 步骤 21. 选择要处理的数据后按Open打开图谱。步骤 31. 出现以下画面步骤 4点击Method中的integration events 请注意要标定的色谱峰是否有被积分（两侧波谷有三角形标记）。 若没被积分，请更改下方两参数值后，按快速键（Integrate）、或菜单中的ProcessingIntegrate，再确认peak是否被积分。 若没被积分，请重复上一流程继续测试。步骤 51. 接下来进行色谱峰的定性（即命名）。2. 请先点击Method中的peak identification。步骤 61. 在图谱下方的空白处按下鼠标右键选择Initialize from chromatogram选择Yes步骤 7再将Unknow_#改成化合物名称，此时色谱峰命名即完成。步骤 81. 若不继续作定量分析（只是定性而已），请按Method右键Save Chromato method。步骤 91. 点击ok即完成储存动作。步骤 101. 若需要作定量分析，请继续设定。2. 点击method中的Calibration步骤 111. 右方内容请设定以下几项： （i）Type：定量校正类型。 (ii) Standard unit:标准品单位。 （iii）Calibration curve File：校正曲线文件名。(iv) Response：要采用何种参数进行积分。(v) Level number：几个校正水平。步骤 12设定完成后按”Initialize from ID tables”，即可看到下方信息。步骤 13填写各项参数：1. ISTD：若为internal standard请打勾。2. ISTD name：与哪个internal standard比对。3. Model：校正曲线类型，通常选择Linear。4. (0,0)?：校正曲线是否通过原点。5. Weighting：通常选择none。6. Level 1：第一个校正水平中各个化合物的浓度。7. Level 2 ：同6，类推。步骤 141. 设定完成后保存文件 Method右键Save Chromato method。2. Method设定内容完成。步骤 151. 关闭method。步骤16新建一个Reprocessing List。步骤 171. 选择样品校正水平（有几点?）Next步骤 18输入Reprocessing List文件名OK步骤 19出现Reprocessing List。1. Enable：该数据要列入计算。2. Chromatogram name：按小方块可打开数据文件。3. Method：请选取要使用的method（按旁边按键可打开方法文件）。4. Sample type：Standard（作为校正曲线中的校正点）。5. Calibration：第一栏选择”Clear old points”，其余选择”Add”。6. Calibration level：输入校正水平的代号（1,2,3.）7. Istd values：输入 internal standard的浓度及单位。步骤 201. 参数设定完成后请按箭头符号执行计算