HIV实验室检测.pptx

HIV实验室检测 实习生 叶贝2017 4 28 目录 HIV病原学 HIV人类免疫缺陷病毒 由包膜及核心组成 为RNA病毒 HIV核心部分包括两条单股RNA链 核心结构蛋白及复制所需酶类 蛋白酶 逆转录酶 整合酶 HIV病毒逆转录酶无校对功能 故病毒变异性强 导致检测结果假阴性 HIV病原学 病毒识别易感细胞膜表面受体 在逆转录酶作用下由RNA逆转录为DNA 经DNA转录及翻译后形成蛋白外壳 将病毒RNA包裹其中 生成新的HIV 主要侵入T淋巴细胞及神经细胞 导致细胞免疫功能缺陷 增加机会性感染 HIV流行病学 全国呈低流行态势 部分地区疫情严重 HIV主要分为两种HIV 1和HIV 2两型 HIV 1类为全球主要流行类型 分为M O N三个亚型组 HIV传播途径 1 传染源 病人及无症状携带者血液 精子 子宫和阴道分泌物 唾液 眼泪和乳汁等传播 2 传播途径性传播 同行 异性 双性性接触母婴传播 经胎盘 分娩及哺乳时传播血液制品传播 共用针具静脉注射毒品 介入性医疗操作 纹身 耳洞等 HIV感染自然史 急性期 艾滋病期 无症状期 初次感染HIV2 4周 传染性最强主要以发热 关节痛 淋巴结肿大为特征可检出HIV及p24抗原 CD4 CD8 倒置 可持续6 8年 HIV在感染者体内不断复制 具有传染性可检测HIV及抗体 CD4 T淋巴续保逐渐下降 HIV感染最终阶段 HIV血浆病毒载量明显升高 CD4 T淋巴细胞 200个 ul主要表现为各种机会性感染及肿瘤 HIV实验室指标 初筛试验 确证试验 HIV检测流程 全国艾滋病检测技术规范 2015年修订版检测流程 初筛试验 筛查 复检 HIV检测流程 全国艾滋病检测技术规范 2015年修订版检测流程 确证试验 确证 仅能检测HIV 1 不能检测HIV 2和HIVAg 灵敏度有限 窗口期长 易错过早期感染样本试剂成本高 操作繁琐 结果判定主观 HIV检测流程 初始反应必须使用抗原和抗体联合检测的第四代免疫学方法 这类方法可以同时检测HIV 1抗体 HIV 2抗体和HIVp24抗原 检测出HIV 1 HIV 2感染和急性HIV 1感染 初始检测无反应性则无需进行进一步检测 初始反应阳性标本需经过FDA批准的抗体鉴别试剂进行HIV 1和HIV 2抗体鉴别试验 结果以HIV 1抗体阳性 HIV 2抗体阳性 HIV抗体阳性或无法鉴别来解释 初始检测有反应 抗体鉴别检测无反应性或不明确标本须经HIV 1核酸检测 HIV 1NAT有反应性而抗体鉴别无反应性为急性HIV 1感染 HIV 1NAT有反应性而抗体鉴别试验不明确为HIV 1感染 HIV 1NAT无反应性而抗体鉴别不明确为假阳性结果 联合试验 鉴别试验 核酸试验 美国CDC推荐HIV检测流程2014修订版 HIV检测 HIV感染后首先检测到HIVRNA 第四代HIV检测试剂检测到HIVp24抗原 为抗原抗体联合检测 第三代及其以前的试剂均为只检测HIV抗体 HIV 1 2 O抗体 HIV 1 2 O抗体 HIVp24抗原 3rd代抗体检测 核酸检测方法 4th代抗原抗体检测 周 年 从初始感染后的时间 无症状期 急性期 第一个血清转换窗口期 核酸检测方法 第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys HIVcombiPT 罗氏HIV试剂 艾滋病期 缩短检测窗口期 早期诊断 2nd代抗体检测 第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys HIVcombiPT 罗氏HIV试剂 缩短检测窗口期 早期诊断 ElecsysHIVCombiPT阳转时间较PCR方法平均晚2天 早于或等于其它方法与三种第三代检测方法相比 ElecsysCombiPT是1 2days 优于ElecsysHIVcombi 2 0days ZhuhaiLivzonanti HIV 6 2days andSerodia HIV1 2 7 8days 与ADVIACentaur相比 theElecsysHIVcombiPT s的检出时间是0days ADVIACentarur s 1 0days 与VIRONOSTIKA HIVUniv FormIIplusO相比 ElecsysHIVcombiPT s是1 5days VIRONOSTIKA HIVUniv FormIIplusO s 7 5days 罗氏HIV试剂 第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys HIVcombiPT 缩短检测窗口期 早期诊断 5 478days Roche dataonfile 罗氏HIV试剂 第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys HIVcombiPT gp120 gp41 gp36 p17 基质蛋白 RT 逆转录酶 RNA P24抗原是HIV病毒的核心蛋白 HIV Ag的检测 HIV Ab的检测 膜蛋白 罗氏HIV试剂 第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys HIVcombiPT 可识别所有亚型 罗氏HIV试剂 可识别所有亚型 第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys HIVcombiPT 619 8 472 罗氏HIV试剂 第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys HIVcombiPT 9min 9min 9min 预处理 裂解出p24抗原 Ag Ab复合物 磁珠加入 共27min孵育 测量池检测 夹心法形成免疫复合物 罗氏HIV试剂 第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys HIVcombiPT 早期感染血清转换期的检测 不同时期HIV感染病人的检测 高灵敏度 不同亚型的检测 罗氏HIV试剂 第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys HIVcombiPT 高特异性 罗氏HIV试剂 排除类风湿因子 自身抗体 单克隆丙种球蛋白 EB病毒抗体 巨细胞病毒抗体 单纯疱疹病毒抗体 流感疫苗等非特异性干扰 抗干扰能力强 高特异性 Case分享 罗氏HIVCombi试剂2次均出现阳性结果 P24抗原也均出现条带 但HIV RNA分析病毒为阴性 最终报告为阴性 该患者实为淋巴瘤 分析时注意干扰因素淋巴瘤患者 孕妇 肿瘤病人 透析患者4种病人都可能出现HIV初筛阳性 需特别对待 华西案例分析CASE1 Case分享 华西案例分析CASE2 该患者第1次检测罗氏HIVCombiPT和HIVCombi均为阳性 ELISA