微生物实验室真菌检查质量控制流程.doc

微生物实验室真菌检查质量控制流程一、 目的规范微生物实验室管理程序，确保临床报告的质量。二、 适用范围微生物实验室的各类真菌检测。三、 职责实验室检验人员均必须熟知并遵守本程序。四、 程序(一) 临床样本的采集与处理1. 皮屑边缘、疱壁、脓液、深层趾（指）间皮屑或活动边缘皮屑，取材前75%酒精消毒，作KOH涂片。2. 甲屑用细挫或牙科磨钻取病甲与正常甲交界处并且贴近甲床部的甲屑，作KOH涂片。3. 毛发取病发（变色，无光泽，弯曲，脆易折断，松动易拔除）15根，75%酒精消毒，35根作直接镜检。4. 脓液无菌采集，注意颗粒，用无菌蒸馏水稀释后寻找。可作革兰染色，常规的KOH涂片。5. CSF采集于无菌试管35ml，立即送检。置冰箱不宜超过1h。离心后以无菌吸管吸取离心沉淀物1ml，作墨汁涂片镜检。6. 血液无菌抽血35ml立即于无菌抗凝管中，BHIB:血标本量为培养基量的1/10，3757d出现浑浊或菌团，挑取镜检同时移种SDA（注：每天检查完毕后需摇动培养基，37震荡培养可加速真菌的生长，提高检出率。不作直接检查，因其直接检查阳性率低。7. 体液、痰液、尿液、粪便体液标本量10ml离心沉淀取2ml沉淀液做直接镜检培养。晨痰35ml集于无菌瓶中(无菌生理盐水漱口数次后)，挑取黏液或脓性部分：KOH涂片培养。早晨中段尿或清洁尿10ml，离心取沉淀液1ml做KOH涂片培养（SDA每管种0.5ml）。拭子：一般尽量不用，缺点：A.不能得到足量的标本；B.采集的标本也不易从棉花纤维上分离下来;C.容易干竭。采集标本后应迅速放入内装12ml无菌蒸馏水的试管送检KOH涂片培养。纸盒送检，挑取黏液、脓血、乳酪样部分KOH涂片培养（加抗生素）注：单纯培养阳性，不一定有临床意义，KOH涂片发现菌丝，有诊断意义。8. 组织：标本置无菌平皿中立即送检，置无菌匀浆器加2ml蒸馏水，研磨成浆或12mm的小块，KOH涂片培养。(二) 涂片染色和直接镜检的质控1. 氢氧化钾/复方氢氧化钾法：标本置于载玻片上，加一滴浮载液，盖上盖玻片，放置片刻或微加热，即在火焰上快速通过23次，不应使其沸腾，以免结晶，然后轻压盖玻片，驱逐气泡并将标本压薄，用棉拭或吸水纸吸去周围溢液，置于显微镜下检查。检查时应遮去强光，先在低倍镜下检查有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态、特征、位置、大小和排列等。2. 胶纸粘贴法：用1cm1.5cm的透明双面胶带贴于取材部位数分钟后自取材部位揭下，撕去复带在上面的底板纸贴在载玻片上，使原贴在取材部位的一面暴露在上面，再进行革兰染色或过碘酸锡夫染色，在操作过程中应注意双向胶带粘贴在载玻片上时不可贴反，而且要充分展平，否则影响观察。革兰染色检查法：在载玻片上滴1滴生理盐水，将所采集的标本均匀涂在载玻片上，自然干燥后，火焰固定或甲醇固定。再选择革兰染色方法，染色后，以油镜观察。3. 染液的质量控制（1） 革兰染液每次新配置和使用中每周一次进行质控，并进行记录。（2） 氢氧化钾/复方氢氧化钾每周进行一次质控。(三) 真菌鉴定质量保证1. 对酵母样真菌如念珠菌或隐球菌在常规临床细菌室已有较成熟的方法学，可用显色培养基。2. 常规鉴定丝状真菌主要依赖于其生长过程中形态变化和特点，所以要求从事丝状真菌检测的检验人员应作专业短期培训；任何实验室都应建立规范的涂片鉴定方法，要正确区分酵母样真菌或丝状真菌、毛霉菌和曲霉（有顶囊），对不常见的真菌不要轻易作为污染菌报告。(四) 结果报告1. 药敏岗位检验人员综合真菌鉴定和药敏结果形成检验报告并签名，微生物实验室负责人或指定人按照相关抗菌药物试验标准操作规程核对药敏结果，尤其注意异常和少见结果。2. 告病人结果之前，应确定质控在可接受范围。3. 经双人双核后的报告单交报告发放员分发到各病房或门诊病人，注意签收并记录。缺乏审核者得报告结果，应由微生物实验室负责人或指定人在 24 小时内进行评估。4. 血培养阳性涂片为真菌和脑脊液墨汁染色发现隐球菌的初步报告经核实后，按三级报告程序报告。5. 完成分析后的微生物标本，检验人员应按照检验后标本