细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证1份ok.doc

有限公司GMP管理文件题 目细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证制 定审 核批 准制定日期审核日期批准日期颁发部门GMP办颁发数量生效日期分发单位企管部、质保部、生产部、工程部文件编码共 14 页 第 1 页一、目 的：当建立微生物限度检查法时，应进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。二、适用范围：细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证。三、责 任 者：质量标准分析方法验证小组。四、正 文：1、验证申请2、验证立项申请表3、验证方案4、验证方案的批复5、验证报告6、验证报告的审批7、验证证书文件编码 第 2 页细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证申请细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证申请。我公司细菌、霉菌及酵母菌计数方法严格按照中华人民共和国兽药典2005年版质量标准分析方法验证指导原则进行，今拟对细菌、霉菌及酵母菌计数方法进行验证。请予以批准！附：细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证小组成员名单组长：成员： 申报单位： 质量标准分析方法验证小组 申报日期： 年 月 日 文件编码 第 3 页验证申请批复立项部门申请日期立项题目要求完成日期验证原因类 别验证要求及目的立项部门负责人签名： 主管部门意见 签名： 年 月 日验证部门意见 签名： 年 月 日总经理意见 签名： 年 月 日指定编制验证方案的部门：编制验证方案要求：验证完成要求及日期： 总经理签名： 年 月 日备注：文件编码 第 4 页细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证方案一、概述：1、名称：微生物限度检查法细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证报告。2、目的：当建立微生物限度检查法时，应进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。3、验证判断标准：中华人民共和国兽药典2005年版附录XIJ4、验证人员：质保部：负责对验证结果进行评价。化验室：负责验证情况的检测和监督。总经理：负责对验证结果进行评价。5、验证日期：二、验证1、验证依据：中华人民共和国兽药典2005年版附录XIJ微生物限度检查法。按供试液的制备和细菌霉菌及酵母菌计数所规定的薄膜过滤法及其有关要求进行。2、内容：（1）菌液所用的菌株传代次数为3 代，接种大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，培养24小时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，培养48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为60cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养7天，加入5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌沙布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数60cfu的孢子悬液。（2）验证方法 验证试验进行了3次独立的平行试验。A、试验组 供试液（）纯化水1ml（）药品名称（1：100）10g，取供试液1ml过滤冲洗，在最后一次冲洗液中加入60cfu试验菌。文件编码 第 5 页B、菌液组 测定所加试验菌数。C、供试品对照组 取相当于供试品1g（1ml），按菌落数据计数方法测定供试品本底菌数。D、稀释剂对照组 用相应稀释液0.9%无菌氯化钠，加入试验菌，使最终菌浓度为每1ml供试液60cfu，按薄膜过滤法制备计菌落数。（）纯化水项目菌株试验组A菌液组B供试品对照组C稀释剂对照组DD组菌回收率%D/BC组菌回收率%(A-C)/B大肠埃希菌1231231231237070平均：金黄色葡萄球菌7070平均：枯草芽孢杆菌7070平均：白色念珠菌7070平均：黑曲霉7070平均：文件编码 第 6 页（）产品名称项目菌株试验组A菌液组B供试品对照组C稀释剂对照组DD组菌回收率%D/BC组菌回收率%(A-C)/B大肠埃希菌7070平均：金黄色葡萄球菌7070平均：枯草芽孢杆菌7070平均：白色念珠菌7070平均：黑曲霉7070平均：以上试验同时取试验用稀释液0.9%无菌氯化钠1ml，依薄膜过滤法操作，作为阴性对照试验，均应无菌生长。（3）验证方案的实施情况，及偏差情况分析。对于细菌霉菌及酵母菌计数方法 验证方案应进行严格细致精密认真的实施，根据统计结果，数据基本上应在允许偏差范围。（4）培训：所有参与的人员在开始验证前应作充分的培训。（5）结果判断由上表可知，在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率，（稀释剂对文件编码 第 7 页照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）应均不低于70%，试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）应均大于70%，则按该验证供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌霉菌及酵母菌数。（6）再验证当建立药品的微生物限度检查法时，进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。若药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。文件编码 第 8 页验证方案批复验证方案名称验证方案起讫日期验证工作负责验证部门人员参加部门人员参加部门人员参加部门人员检验部门人员验证方案概要结论 验证小组负责人 年 月 日验证小组成员会签生产使用部门意见 负责人 年 月 日验证管理部门意见 负责人 年 月 日总经理意见 年 月 日备注文件编码 第 9 页细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证报告一、概述：1、名称：微生物限度检查法细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证报告。2、目的：当建立微生物限度检查法时，应进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。3、验证判断标准：中华人民共和国兽药典2005年版附录XIJ4、验证人员：质保部：负责对验证结果进行评价。化验室：负责验证情况的检测和监督。总经理：负责对验证结果进行评价。5、验证日期：二、验证1、验证依据：中华人民共和国兽药典2005年版附录XIJ微生物限度检查法。按供试液的制备和细菌霉菌及酵母菌计数所规定的薄膜过滤法及其有关要求进行。2、内容：（1）菌液所用的菌株传代次数为3 代，接种大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，培养24小时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，培养48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为60cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养7天，加入5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌沙布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数60cfu的孢子悬液。（2）验证方法 验证试验进行了3次独立的平行试验。A试验组 供试液（）纯化水1ml（）药品名称（1：100）10g，取供文件编码 第 10 页试液1ml过滤冲洗，在最后一次冲洗液中加入60cfu试验菌。B菌液组 测定所加试验菌数。C供试品对照组 取相当于供试品1g（1ml），按菌落数据计数方法测定供试品本底菌数。D稀释剂对照组 用相应稀释液0.9%无菌氯化钠，加入试验菌，使最终菌浓度为每1ml供试液60cfu，按薄膜过滤法制备计菌落数。项目菌株试验组A菌液组B供试品对照组C稀释剂对照组DD组菌回收率%D/BC组菌回收率%(A-C)/B大肠埃希菌12312312312383.3373.33969697606060525251505150平均96605250金黄色葡萄球菌97979660606053545452525280.6771.67平均97605452枯草芽孢杆菌96969660606051525250505083.3373.33平均96605250白色念珠菌95969560606052525251525286.6771.67平均95605252黑曲霉96969660606053535251505185.0071.67平均96605351（）纯化水文件编码 第 11 页项目菌株试验组A菌液组B供试品对照组C稀释剂对照组DD组菌回收率%D/BC组菌回收率%(A-C)/B大肠埃希菌12312312312386.6785.00898988606060383838525152平均89603852金黄色葡萄球菌91909160606040414150505083.3383.33平均91604150枯草芽孢杆菌89898960606038393951515085.0083.00平均89603951白色念珠菌88888860606038373852525286.6783.33平均88603852黑曲霉90898960606039403950515083.3383.33平均90604050（）药品名称以上试验同时取试验用稀释液0.9%无菌氯化钠1ml，依薄膜过滤法操作，作为阴性对照试验，均无菌生长。（3）验证方案的实施情况，及偏差情况分析。对于细菌霉菌及酵母菌计数方法 验证方案进行了严格细致精密认真的实施，根据统计结果，数据基本上在允许偏差范围。（4）结论：由上表可知，在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率，（稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）均不低于70%，试验组的菌回收率文件编码 第 12 页（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）均大于70%，则按该验证供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌霉菌及酵母菌数。 结论人： 日期： 批准人： 日期：（5）再验证当建立药品的微生物限度检查法时，进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。若药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。文件编码 第 13 页验证报告批复验证项目名称验证起讫日期验证工作负责验证部门人员参加部门人员参加部门人员参加部门人员检验部门人员验证结果报告概要结论 验证小组负责人 年 月 日验证