（江苏专用）2020版高考生物总复习第31讲基因工程教案（选修3）.docx

第31讲基因工程考纲考情知考向核心素养提考能最新考纲1.基因工程的诞生(A)2.基因工程的原理及技术(含PCR技术) (B)3.基因工程的应用(B) 4.蛋白质工程(A)5.(实验)DNA的粗提取与鉴定(b)生命观念基因结构决定其功能科学思维建立基因工程的操作流程模型近三年江苏考情2018年T32(8分)；2017年T15(2分)；2016年T16(2分)、T26(3分)；2015年T5(2分)、T28(4分)科学探究探究基因工程在生产上的应用和蛋白质工程的应用社会责任基因工程和蛋白质工程在生产实践上的应用考点一基因工程的基本工具及操作过程1.基因工程的基本工具(1)限制酶(2)DNA连接酶作用：将限制酶切割下来的DNA片段拼接成DNA分子。类型常用类型Ecoli DNA连接酶T4 DNA连接酶来源大肠杆菌T4噬菌体功能只“缝合”黏性末端“缝合”黏性末端和平末端结果恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键(3)载体其他载体：噬菌体衍生物、动植物病毒等。载体的作用：携带外源DNA片段进入受体细胞。2.基因工程的基本操作程序(2018全国卷，38)回答下列问题：(1)博耶(H.Boyer)和科恩(S.Cohen)将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达。该研究除证明了质粒可以作为载体外，还证明了_(答出两点即可)。(2)体外重组的质粒可通过Ca2参与的_方法导入大肠杆菌细胞；而体外重组的噬菌体DNA通常需与_组装成完整噬菌体后，才能通过侵染的方法将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞。在细菌、心肌细胞、叶肉细胞中，可作为重组噬菌体宿主细胞的是_。(3)真核生物基因(目的基因)在大肠杆菌细胞内表达时，表达出的蛋白质可能会被降解。为防止蛋白质被降解，在实验中应选用_的大肠杆菌作为受体细胞，在蛋白质纯化的过程中应添加_的抑制剂。解析(1)两位科学家将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中并进行了表达，因此，该研究可以证明：质粒可以作为载体，真核细胞的基因在原核细胞中也可以表达(不同生物共用一套密码子)、体外重组的质粒可以进入受体细胞等。(2)目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为转化，将质粒导入大肠杆菌时，常用的转化方法是：首先用Ca2处理大肠杆菌细胞，使其成为感受态细胞。噬菌体DNA没有侵染能力，体外重组的噬菌体DNA通常需与外壳蛋白组装成完整噬菌体才能完成侵染过程。噬菌体多寄生在细菌中，但不能寄生在心肌细胞和叶肉细胞中。(3)若要使蛋白质不被降解，则大肠杆菌体内不能存在蛋白酶，因此，实验中应选用蛋白酶缺陷型的大肠杆菌作为受体细胞。同理，在蛋白质纯化过程中，也不能使蛋白质降解，因此，应添加蛋白酶抑制剂。答案(1)体外重组的质粒可以进入受体细胞；真核生物基因可在原核细胞中表达(2)转化外壳蛋白(或答噬菌体蛋白)细菌(3)蛋白酶缺陷型蛋白酶(1)基因组文库与cDNA文库的比较文库类型cDNA文库基因组文库构建基因文库的过程文库大小小大基因中启动子无有基因中内含子无有基因多少某种生物的部分基因某种生物的全部基因物种间的基因交流可以部分基因可以说明基因文库的组建过程就应用了基因工程的基本操作步骤。从基因文库中获取目的基因的优点是操作简便，缺点是工作量大，具有一定的盲目性(2)农杆菌转化法原理植物受损伤时伤口处分泌物(酚类化合物)可吸引农杆菌农杆菌中Ti质粒上的TDNA可转移至受体细胞并整合到受体细胞染色体DNA上(若将目的基因插入到Ti质粒的TDNA上，则目的基因将被一起带入)。(3)受体细胞的选择受体细胞常用植物受精卵或体细胞(经组织培养)、动物受精卵(一般不用体细胞)、微生物(大肠杆菌、酵母菌)等。要合成糖蛋白、有生物活性的胰岛素则必须用真核生物酵母菌(需内质网、高尔基体的加工、分泌)；一般不用支原体，原因是它营寄生生活；一定不能用哺乳动物成熟的红细胞，原因是它无细胞核，也没有核糖体等细胞器，不能合成蛋白质。考点二基因工程的应用及蛋白质工程1.基因工程的应用(1)动物基因工程：用于提高动物生长速度从而提高产品产量；用于改善畜产品品质；用转基因动物生产药物；用转基因动物作器官移植的供体等。(2)植物基因工程：培育抗虫转基因植物(如抗虫棉)、抗病转基因植物(如转基因烟草)和抗逆转基因植物(如抗寒番茄)；利用转基因改良植物的品质(如新花色矮牵牛)。2.基因诊断与基因治疗(1)基因诊断：又称为DNA诊断，是采用基因检测的方法来判断患者是否出现了基因异常或携带病原体。(2)基因治疗概念：把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的。成果：将腺苷酸脱氨酶基因转入取自患者的淋巴细胞中，使淋巴细胞能产生腺苷酸脱氨酶，然后，再将这种淋巴细胞转入患者体内，从而治疗复合型免疫缺陷症。3.蛋白质工程(1)概念（2）基本流程1.（人教版选修三P21“内文”）科学家将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物的受精卵中，然后，将受精卵送入母体内，使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳斯后，可以通过分泌的乳汁来生产所需要的药品，因而称为乳腺生物反应器或乳房生物反应器。2.（人教版选修三P24“生物技术资料卡”）用于基因治疗的基因有三类。第一类是从健康人体上分离得到的功能正常的基因，用以取代病变基因，或依靠其表达产物，来弥补病变基因带来的生理缺陷，如对血友病和地中海贫血病的治疗。第二类是反义基因，即通过产生的mRNA分子，与病变基因产生的mRNA进行互补，来阻断非正常蛋白质合成。第三类是编码可以杀死癌变细胞的蛋白酶基因，又叫做自杀基因。（2018海南卷，31）甜蛋白是一种高甜度的特殊蛋白质。为了改善黄瓜的品质，科学家采用农杆菌转化法将一种甜蛋白基因成功导入黄瓜细胞，得到了转基因植株。回答下列问题：（1）用农杆菌感染时，应优先选用黄瓜（填“受伤的”或“完好的”）叶片与含重组质粒的农杆菌共培养，选用这种叶片的理由是_。（2）若在转基因黄瓜中检测到这种甜蛋白，则表明该重组质粒中已转移到植物细胞中且能够表达；用该转基因黄瓜的某一植株与一株非转基因植株杂交，发现子代中含甜蛋白个体数与不含甜蛋白个体数之比为11，则说明甜蛋白基因已经整合到（填“核基因组”“线粒体基因组”或“叶绿体基因组”）中。（3）假设某种转基因作物因为受到病毒感染而减产，若要以该转基因作物为材料获得脱毒苗，应选用作为外植体进行组织培养。（4）通常，基因工程操作主要有4个步骤，即目的基因获取、重组表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。因此，基因工程的含义可概括为_。解析（1）当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，因此用农杆菌感染时，优先选用黄瓜受伤的叶片。（2）若在转基因黄瓜中检测到这种甜蛋白，说明目的基因甜蛋白基因在受体细胞中已经完成表达；若甜蛋白基因整合到线粒体基因组或叶绿体基因组中，在遗传时遵循母系遗传，不会出现固定的分离比，所以子代中含甜蛋白个体数与不含甜蛋白个体数之比为11，则说明甜蛋白基因已经整合到核基因组。（4）基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，从而创造出符合人们需要的新生物类型和生物产品。答案（1）受伤的叶片伤口处的细胞释放出大量酚类物质，可吸引农杆菌移向这些细胞（2）甜蛋白基因核基因组（3）茎尖（4）按照人们的愿望进行设计，并通过体外重组和转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出符合人们需要的新生物类型蛋白质工程与基因工程的比较项目蛋白质工程基因工程实质定向改造或生产人类所需蛋白质定向改造生物的遗传特性，以获得人类所需的生物类型或生物产品结果生产自然界中没有的蛋白质生产自然界中已有的蛋白质联系蛋白质工程是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程，因为对现有蛋白质的改造或制造新的蛋白质，必须通过基因修饰或基因合成实现考点三PCR技术与DNA的粗提取与鉴定1.PCR技术（2）PCR反应过程过程说明图解变性当温度上升到90 以上时，双链DNA解旋为单链复性温度下降到50 左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合延伸72 左右时，TaqDNA聚合酶有最大活性，可使DNA新链由5端向3端延伸（3）结果： 上述三步反应完成后，一个DNA分子就变成了两个DNA分子 ，随着重复次数的增多，DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反应过程都是在PCR扩增仪中完成的。2.DNA的粗提取与鉴定（1）实验原理（2）操作流程（2018江苏卷，32）为生产具有特定性能的淀粉酶，研究人员从某种海洋细菌中克隆了淀粉酶基因（1 656个碱基对），利用基因工程大量制备淀粉酶，实验流程如图。请回答下列问题：（1）利用PCR技术扩增淀粉酶基因前，需先获得细菌的_。（2）为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接，需在引物的端加上限制性酶切位点，且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，主要目的是_。（3）进行扩增时，反应的温度和时间需根据具体情况进行设定，下列选项中的设定与引物有关，的设定与扩增片段的长度有关。（填序号）变性温度退火温度延伸温度变性时间退火时间延伸时间（4）如图表示筛选获得的工程菌中编码淀粉酶的mRNA的部分碱基序列：5U3图中虚线框内mRNA片段包含个密码子，如虚线框后的序列未知，预测虚线框后的第一个密码子最多有种。（5）获得工程菌表达的淀粉酶后，为探究影响酶活性的因素，以浓度为1%的可溶性淀粉为底物测定酶活性，结果如表所示：缓冲液50 （mmolL1）Na2HPO4KH2PO450 （mmolL1）TrisHCl50 （mmolL1）GlyNaOHpH6.06.57.07.57.58.08.59.09.09.510.010.5酶相对活性%25.440.249.863.270.195.599.585.368.163.741.520.8根据上述实验结果，初步判断该淀粉酶活性最高的条件为_。解析（1）利用PCR技术扩增淀粉酶基因前，需先获得细菌的基因组DNA。（2）构建重组DNA分子时，需用限制性核酸内切酶处理目的基因和载体，故需要在引物的5端添加限制性酶切位点，且常在两条引物上设计添加不同的限制性酶切位点，这样可以使DNA片段按照一定方向插入表达载体，防止目的基因或载体自身的黏性末端之间相互连接以及目的基因与载体反向连接。（3）利用PCR技术进行扩增时，退火温度的设定是成败的关键，退火温度过高会使引物无法与模板的碱基配对，所以退火温度的设定与引物有关；延伸时间的设定与扩增片段的长度有关。（4）密码子由mRNA上相邻的3个碱基组成，所以该片段的24个碱基包含8个密码子。该片段后面的第一个碱基为U，所以后面的密码子最多可能有4416（种），根据题干信息及题中给出的mRNA序列可知，虚线框后第一个密码子不可能是终止密码子，所以实际最多有13种密码子。（5）由表格数据可知，该淀粉酶活性最高的条件是pH为8.5，缓冲液为50 mmol/L TrisHCl。答案（1）基因组DNA（2）5使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连（3）（4）813（5）pH为8.5，缓冲液为50 mmoL/L TrisHCl澄清易错易混强化科学思维易错易混易错点1目的基因的插入不是“随意”的点拨目的基因的插入位点不是随意的：基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与终止子之间的部位，若目的基因插入到启动子内部，启动子将失去原功能。易错点2启动子起始密码子，终止子终止密码子，对标记基因的作用不明确点拨（1）启动子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端。它是RNA聚合酶识别、结合的部位。（2）终止子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。作用是使转录过程停止。（3）起始密码子和终止密码子位于mRNA上，分别控制翻译过程的启动和终止。（4）标记基因：一般为抗生素抗性基因或荧光基因等，其作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因（目的基因是否导入成功），从而将含目的基因的细胞筛选出来。易错点3切取目的基因与切取载体时并非“只能”使用“同一种酶”点拨（1）在获取目的基因和切割载体时通常用同种限制酶，以获得相同的黏性末端。但如果用两种不同限制酶切割后形成的黏性末端相同时，在DNA连接酶的作用下目的基因与载体也可以连接起来。（2）为了防止载体或目的基因的黏性末端自己连接即所谓“环化”，可用不同的限制酶分别处理目的基因和载体，使目的基因两侧及载体上具有两个不同的黏性末端。 规范答题下表中列出了几种限制性核酸内切酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制性核酸内切酶的酶切位点。请回答下列问题：（1）组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造，人工改造质粒时，要使目的基因能成功表达，还应插入。若对图中质粒进行改造，插入的Sma酶切位点越多，质粒的热稳定性越低还是越高？_。（2）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，能否使用Sma 切割？为什么？_（3）构建重组质粒时能否使用BamH和Hind 两种限制酶同时处理质粒、外源DNA？ ，理由是_。（4）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_。答卷采样错因分析考虑问题不全面，没有认真分析题中的图示质粒。正确答案：启动子和终止子。思维定势，理解错误，误认为构建重组质粒时只能使用同一种限制酶切割。正确答案：能，可以阻止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化。探索高考命题的奥秘（八）教材原型1（人教版选修三P3“内文”）博耶（H.Boyer）和科恩（S.Cohen）将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达。该研究除证明了质粒可以作为载体外，还证明了体外重组的质粒可以进入受体细胞；真核生物基因可在原核细胞中表达。转换视角12018全国卷，38（1）回答下列问题：博耶（H.Boyer）和科恩（S.Cohen）将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达。该研究除证明了质粒可以作为载体外，还证明了_（答出两点即可）。答案体外重组的质粒可以进入受体细胞；真核生物基因可在原核细胞中表达教材原型2（人教版选修三P2“内文”）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体。转换视角22017全国卷，38（5）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是_答案DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体教材原型3（人教版选修三P6“内文”）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有：能自主复制；具有标记基因；具有一个或多个限制酶切位点。转换视角32016全国卷，40（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有（答出两点即可）。答案能自我复制、具有标记基因教材原型4（人教版选修三P13“内文”）在基因工程中，常用Ca2处理大肠杆菌，其目的是使之成为感受态细胞，容易吸收周围环境中的DNA分子，进而使重组质粒导入细菌细胞内（或提高受体细胞的转化率）。转换视角42014海南卷，（4）下图是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图。据图回答：在基因工程中，常用Ca2处理D，其目的是_。答案使之成为感受态细胞，便于吸收周围环境中的重组DNA分子教材原型5（人教版选修三P12“内文”）在培育有些转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是农杆菌可感染植物，将目的基因转移到受体细胞中。转换视角52013全国卷，40（1）材料甲科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”；科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草。回答下列问题：材料甲属于基因工程的范畴。将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用法。构建基因表达载体常用的工具酶有和。在培育转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是。答案显微注射限制酶DNA连接酶农杆菌可感染植物，将目的基因转移到受体细胞中教材原型6（人教版选修三P13“内文第二自然段”）由于原核生物具有一些其他生物没有的特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等，因此，早期的基因工程操作都用原核生物作为受体细胞，其中以大肠杆菌应用最为广泛。转换视角62017全国卷，38（3）若要高效地获得蛋白A，可选用大肠杆菌作为受体，因为与家蚕相比，大肠杆菌具有（答出两点即可）等优点。答案繁殖快、容易培养教材原型7（人教版选修三P5“内文第二自然段”）DNA连接酶“分子缝合针”根据酶的来源不同，可以将DNA连接酶分为两类：一类是从大肠杆菌中分离得到的，称为Ecoli DNA连接酶；另一类是从T4噬菌体中分离出来的，称为T4DNA连接酶。这两类酶都是将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键（图14），但这两种酶的作用有所差别：EcoliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来，不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。而T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。转换视角72016全国卷，40（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是_。答案EcoliDNA连接酶T4DNA连接酶T4DNA连接酶教材原型8（人教版选修三P26“内文第四自然段”）我们知道，天然蛋白质合成的过程是按照中心法则进行的：基因表达（转录和翻译）形成氨基酸序列的多肽链形成具有高级结构的蛋白质行使生物功能；而蛋白质工程却与之相反，它的基本途径是：从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）（图129）。转换视角82015全国卷，40（3）蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从预期蛋白质功能出发，通过_和，进而确定相对应的脱氧核苷酸序列，据此获得基因，再经表达、纯化获得蛋白质，之后还需要对合成蛋白质的生物进行鉴定。答案设计蛋白质的结构推测氨基酸序列功能课后分层训练（时间：35分钟）1.（2018苏州一模）下列有关“花菜细胞中DNA的粗提取”实验的叙述，正确的是（）A.在研磨过程中加入洗涤剂的作用是为了瓦解细胞壁B.实验过程中两次加入蒸馏水的作用不同C.将滤液放在6075 下保温的作用主要是除去滤液中的杂质D.在滤液中加入冷却的等体积分数酒精的原理是DNA可溶于酒精解析洗涤剂的作用是为了瓦解细胞膜；以花菜为材料提取DNA时，只加入一次蒸馏水，以鸡血为实验材料时两次加入蒸馏水的作用不同；由于蛋白质和DNA对温度的耐受性不同，将滤液放在6075 下保温可以除去滤液中的杂质蛋白；在滤液中加入冷却的等体积分数酒精提纯的原理是DNA不溶于酒精。答案C2.（2018南京、盐城一模）下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（）A.鸡血细胞是较理想的实验材料B.NaCl溶液浓度越高，DNA的溶解度越大C.在用酒精析出DNA时，最好使用体积分数为95%的冷酒精D.DNA溶液中加入二苯胺试剂，沸水浴加热，检测结果呈蓝色解析鸡血细胞中DNA含量丰富，材料易得，是较理想的实验材料；随NaCl溶液浓度增大，DNA的溶解度先减小后增大，0.14 molL1时DNA溶解度最小；冷却的酒精的作用：一是抑制DNA水解酶的活性，防止DNA分子的降解；二是降低分子运动，有利于DNA沉淀析出；三是有利于增加DNA分子的柔韧性，减少DNA分子的断裂；四是将不溶于酒精的DNA与溶于酒精的杂质蛋白进一步分离。沸水浴条件下，DNA遇二苯胺试剂呈蓝色。答案B3.（2018扬州一模）下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（）A.向鸡血溶液中加蒸馏水搅拌，可见玻璃棒上有白色絮状物B.洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂C.DNA在2 molL1的NaCl溶液中溶解度较高D.DNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热后变蓝解析向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，可使细胞破裂，释放DNA，DNA溶于蒸馏水，观察不到白色絮状物。答案A4.（2014江苏卷，23）（多选）下列关于基因工程技术的叙述，错误的是（）A.切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6个核苷酸序列B.PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应C.载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因D.抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达解析不同的限制酶识别的核苷酸序列的数目不同，A错误；PCR中温度的周期性改变是不同反应步骤需要不同的温度，如高温解旋，低温复性，中温延伸，B错误；载体质粒通常采用抗生素抗性基因作为筛选标记基因，C错误；外源基因导入受体细胞染色体上后未必能正常表达，D正确。答案ABC5.（2013江苏卷，22）（多选）小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷，可选择性扩增抗体的可变区基因（目的基因）后再重组表达。下列相关叙述正确的是（）A.设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列B.用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列C.PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶D.一定要根据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞解析利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列设计引物，但不需知道目的基因的全部序列，需要考虑载体的序列；因PCR反应在高温条件下进行，故反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶；因某些目的基因编码的产物需经特殊的加工修饰过程，故一定要根据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞。答案BD6.（2015江苏卷，25）（多选）图1、图2分别为“DNA的粗提取与鉴定”实验中部分操作步骤示意图，下列叙述正确的是（）A.图1、图2中加入蒸馏水稀释的目的相同B.图1中完成过滤之后保留滤液C.图2中完成过滤之后弃去滤液D.在图1鸡血细胞液中加入少许嫩肉粉有助于去除杂质解析图1、图2 中加入蒸馏水稀释的目的分别是破碎细胞获取含DNA的滤液；稀释NaCl溶液，析出DNA，A错误；图1 过滤之后保留滤液，因滤液中含DNA，B正确；图2过滤之后弃去滤液，因DNA已析出，C正确；嫩肉粉中的蛋白酶可对蛋白质进行水解，D正确。答案BCD7.（2017江苏卷，33）金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：（1）从高表达MT 蛋白的生物组织中提取mRNA，通过获得用于PCR扩增。（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物（引物1和引物2），为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的位点。设计引物时需要避免引物之间形成，而造成引物自连。（3）图中步骤1代表，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。（4）PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但的引物需要设定更高的退火温度。（5）如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有（填序号：升高退火温度降低退火温度重新设计引物）。解析（1）PCR扩增目的基因，首先要有目的基因作为模板，所以从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA，通过逆转录获得cDNA，从而用于PCR扩增。（2）构建重组质粒，首先用限制酶切割含目的基因的DNA片段和质粒，所以位于目的基因两端的引物中需要增加适量的限制酶位点。设计的引物之间不能有碱基互补配对，否则引物自连，不能与模板相连。（3）图中步骤1、2、3分别表示变性、退火、延伸，这三个步骤组成一轮循环。（4）退火表示引物与模板链相连，若温度过高会破坏引物与模板的碱基配对。由于GC间有三个氢键，AT间有两个键，所以GC含量越高的引物，退火温度越高。（5）PCR反应得不到任何扩增产物，可能是退火温度过高，导致引物与模板不能相连，或引物间相互配对，引物自连，不能与模板相连，可通过降低退火温度或重新设计引物进行改进。答案（1）逆转录cDNA（2）限制性核酸内切酶碱基互补配对（3）变性（4）引物与模板GC含量高（5）8.（2018常州一模）pET表达系统是原核蛋白表达引用最多的系统，其自身基础表达水平很低，并能实现目的基因的高效表达。pET载体上的目的基因被转移到大肠杆菌后，大肠杆菌RNA聚合酶不能直接与T7启动子结合，需通过T7 RNA聚合酶间接调控。另外IPTG（乳糖类似物）除可实现图1功能外，还可以使lac抑制子失活，激活lac启动子。请结合图示分析回答下列问题：图3（1）大肠杆菌时刻感知培养基的营养信息并传递到细胞内启动相应的应答机制，据图1分析，不含乳糖的条件下结构基因Z将。 （2）Z基因广泛用于基因表达调控的研究，当目的基因插入Z基因，用蓝白斑来筛选工程菌非常方便。Xgal（某种指示剂，无色）是半乳糖苷酶的底物，水解后呈蓝色，据此原理，应从图2的菌落中挑选工程菌。 （3）pET表达载体在构建时用限制酶EcoR和Sma同时切割，与单用限制酶EcoR相比，采用EcoR和Sma双酶切的优点能减少质粒自身环化的概率，并。（4）根据题干信息，大肠杆菌RNA聚合酶不能直接与T7启动子结合，说明酶具有。从图中可看出，基因能够抑制自身基因的基础表达水平，而可将更多的细胞资源用于目的基因表达，因此可以以控制靶基因的过度表达。 解析（1）据图1分析，不含乳糖的条件下不需要表达半乳糖苷酶，结构基因Z将停止表达。（2）工程菌中目的基因插入Z基因，导致Z基因不能表达半乳糖苷酶，不能水解Xgal（无色），菌落表现为白斑。（3）基因工程中双酶切能减少目的基因自身环化及质粒自身环化的概率，并能保证目的基因的正向连接。（4）根据题干信息，大肠杆菌RNA聚合酶不能直接与T7启动子结合，而T7RNA聚合酶可以与T7启动子结合，说明酶具有专一性。从图中可看出，lac基因能够表达lac抑制子，从而抑制自身基因的基础表达水平，而IPTG诱导可使lac抑制子失活，激活lac启动子，将更多的细胞资源用于目的基因表达，因此可以通过降低IPTG诱导浓度来控制靶基因的过度表达。答案（1）停止表达（不能转录）（2）白斑（3）保证目的基因的正向连接（4）专一性lacIPTG诱导降低IPTG诱导浓度9.（2018苏锡常镇二模）某植物蛋白酶抑制剂基因是重要的抗虫基因，该基因转录的mRNA下游序列已知，但其上游序列未知。现利用PCR等技术扩增该基因，具体原理如下图所示，其中表示有关过程，表示有关物质。请回答下列问题：（1）过程反应体系中，需要加入种引物，还需加入酶，生成杂合链物质。 （2）利用DNA末端转移酶催化过程，使cDNA单链左侧末端增加十多个腺嘌呤脱氧核苷酸序列AAA（A）n，其目的是，进而利于过程扩增获得目的基因序列，过程反应体系需要添加的新引物序列是。 （3）与物质相比，物质化学组成不同的是。与过程相比，过程中碱基配对方式的不同之处是。 （4）在物质的两端通常还需要增加序列，以便与相应的载体重组，再利用处理大肠杆菌等，以利于将重组质粒导入细胞，构建cDNA文库。 解析（1）过程是逆转录，反应体系中只需要加入1种引物和逆转录酶，生成杂合链物质。（2）由于mRNA上游序列未知，无法设计引物，所以在cDNA单链左侧末端增加十多个腺嘌呤脱氧核苷酸序列AAA（A）n，可以方便设计引物TTT（T）n，所以过程反应体系需要添加的新引物序列是TTT（T）n。（3） 物质是双链DNA，物质是RNADNA，化学组成不同的是物质含核糖和尿嘧啶。过程是DNA的扩增（DNADNA），过程是逆转录（RNADNA），其碱基配对方式的不同之处在于过程中有UA，过程中有TA。（4） 为