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文档简介

不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白 一 实验目的1 掌握凝胶电泳的三个效应 2 了解该电泳的特点及适用范围 二 基本原理 讲解聚丙烯酰胺凝胶电泳的三种效应 1 浓缩效应 2 电荷效应 3 分子筛效应 三 实验原理本实验利用聚丙烯酰胺凝胶作电泳支持物 电荷数和分子大小不一的各种血清蛋白质通过浓缩效应 电荷效应 分子筛效应而被精细地分离 由于具有以上三种效应 所以此方法分离效果好 分辨率高 血清蛋白在纸上电泳仅能分成5 7个组分 而在聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳中可分出12 30个组分 四 实验材料1 圆盘电泳槽 2 电泳仪 3 玻璃管 10 0 6cm 4 50 l微量注射器 5ml注射器 5 10cm长的局麻针头 10号针头 6 试剂 五 实验方法 一 凝胶柱的制备1 凝胶玻璃管的准备2 分离胶的制备3 浓缩胶的制备4 装柱 二 加样 三 电泳 四 剥胶 五 固定和染色 六 漂洗 六 注意事项1 丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺是神经毒性试剂 并对皮肤有刺激作用 注意避免直接接触 大量操作时应在通风橱中进行 2 丙稀酰胺和甲叉双丙烯酰胺溶液应装在棕色瓶中 置冰箱内 4 保存 可贮存1 2个月 测定pH 4 9 5 2 可检查其是否失效 失效不能聚合 3 TEMED要密封保存 过硫酸铵溶液最好当天配制 以防止氧化失效 4 凝胶的聚合速度与温度关系很大 温度低时 聚合速度减慢 必须根据实验时的温度调整3号 4号试剂的用量 以使凝胶在30min内聚合 实验思考1 解释聚丙烯酰胺凝胶电泳的三个
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