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差异凝胶双向电泳 DIGE 技术原理及应用 主讲 胡水旺2008年10月10日广东省蛋白质组学重点实验室hushuiwang Phone2 DDIGE 1 Background2 Components3 Thebenefits4 Workflow5 Application6 Summary Background Background 蛋白质组学可分为三个领域 经典表达蛋白质组学 差异蛋白质组学 功能蛋白质组学 差异蛋白质组学 通过某种方法和技术对某些过程中的生物样品 细胞 组织或体液等 的蛋白质表达丰度进行比较分析 从而发现不同生理或病理条件下蛋白质表达水平的变化情况 Background Background Background DIGE Differencegelelectrophoresis 技术最早在1997年由JonMinden实验室的Unlu等提出 后来Amresham成为此技术的主要推动者 2002年Gharbis等巧妙的将所有实验组的样品等量混合为内标用在每块胶上 不久 Amerhsma公司便将内标作为DIGE实验设计核心原则之一 从而使DIGE发展成为更加趋于成熟的体系 ComponentsofDIGE 2 DEUnit CyDyeDIGE荧光标记物 DeCyder差异分析软件 TyphoonImagerorEDI 1 CyDyeDIGE荧光标记物 Twokindsofdyesproperties What stheinternalstandard Whyweusetheinternalstandard Benefitsoftheinternalstandard Increaseconfidenceoftheresults Benefitsoftheinternalstandard 2 2 DEUnite 3 Scanners 4 ThebenefitsofDIGE WorkflowofDIGE WorkflowofDIGE WorkflowofDIGE WorkflowofDIGE WorkflowofDIGE WorkflowofDIGE WorkflowofDIGE WorkflowofDIGE WorkflowofDIGE WorkflowofDIGE WorkflowofDIGE ApplicationsofDIGE ApplicationsofDIGE ApplicationsofDIGE ApplicationsofDIGE 所做DIGE图谱举例 Summary DIGE技术结合了蛋白质组学研究中经典的双向电泳技术和特有的多重荧光分析技术 不同样品分别由电荷和分子量匹配的CyDyeDIGE荧光标记物预标记 随后再混合并在同一块胶上跑电泳 并第一次引入了内标的概念 极大地提高了结果的准确性 可靠性和重复性 能检测到小于10 的蛋白表达差异而统计学可信度达到95 用
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