【医学ppt课件】组织培养药物敏感性检测技术

组织培养药物敏感性检测技术 HistocultureDrugResponseAssay HDRA HDRA技术介绍 HDRA技术由Hoffman等人于80年代末期建立 是一种基于非分散性组织的药物敏感性检测技术 该技术将微小组织培养于一种天然胶原海绵基质上 同时加入抗癌药物对其作用一定的时间 细胞活性终点评价采用MTT还原法 结果较为直观可靠 应用癌种 胃癌肠癌卵巢癌乳腺癌肉瘤肺癌泌尿系肿瘤头颈部肿瘤 HDRA技术流程 1 肿瘤组织预处理 去脂肪 纤维以及血污 2 肿瘤组织处理 清洗 眼科镊子和小剪刀进行剪切 使组织块大小约为1 2mm 3 将3块组织块放置于约1cm2的胶原海绵小块上 然后放置于预加有培养基的24孔板中 培养过夜 4 加入含药物的培养基 每个浓度2个平行孔 5 继续培养3天后 加入MTT 孵育4h 然后提取还原的MTT 测定570nm的OD值 6 药物处理组和对照组进行比较 计算抑制率 评价药物杀伤 肿瘤组织的处理 培养中的肿瘤组织 一 培养孔 培养基液面 肿瘤组织 胶原海绵 培养中的肿瘤组织 二 HDRA培养肿瘤组织形态结构 MTT还原法测定细胞活力 结果评价 加药处理组 T 空白对照组 C 抑制率 I T C敏感药物 I 50 HDRA技术特点 1 肿瘤组织不需要进行机械 酶学分散 保持其结构及形态 减少操作造成的细胞损失 2 模拟体内药物对癌组织的作用 评价客观 同时避免了仅进行癌细胞评价的片面性 3 该技术采用天然胶原海绵作为培养基质 同时培养的组织接近液面 促进气液交换 保证癌细胞的生长增殖 4 具有较高的标本可评价率 据报道为90 100 HDRA技术历史和现状 1 Hoffman等人于80年代末期建立基于胶原海绵的立体组织培养技术 后应用于原代瘤组织体外药敏检测 至今已有10余年的历史 2 目前该技术主要在日本和美国进行大量的临床应用研究 公开发表文献50余篇 3 2002年Singh等人在头颈部肿瘤中的研究表明 该技术能够评价患者预后 从而指导肿瘤化学治疗 HDRA临床相关性研究 HDRA临床应用研究 乳腺癌 小细胞肺癌 肠癌 肺癌 胰腺癌 HDRA与胃肠癌生存预后 Thesurvivalrateof10patientswhosetumorsweresensitivetoeithermitomycinCand or5 fluorouracilintheassaywassignificantly P 0 005 betterthanthatof22patientswhosetumorswereshowntobeinsensitivetobothdrugs Twenty ninepatientswithstageIIIandIVcolorectalcancerwithoutremainingmeasurabletumorlesionsaftersurgeryweretreatedwithfluoropyrimidinesadjuvantly Therecurrence freesurvivalrateof7patientswhosetumorsweresensitiveto5 fluorouracilintheassaywassignificantly P 0 05 betterthanthatof22patientswhosetumorswereinsensitive Kaplanmiere生存曲线 HDRA检测与头颈癌生存预后 Resistanceto5 fluorouracilwaspresentin13cases 32 tocisplatinumin13cases 32 andtobothagentsin11cases 27 The2 yearcause specificsurvivalwassignificantlygreaterforpatientssensitiveto5 fluorouracil 85 vs64 p 04 cisplatinum 86 vs64 p 05 orbothagents 85 vs63 p 01 Kaplanmiere生存曲线 结论 HDRA技术是一种基于非分散性组织的药物敏感性检测技术 该技术保持肿瘤组织基本形态结构 模拟药物对肿瘤组织的作用 同时避免了由于组织分散造成的