肝胆酸标准操作流程.doc

宁波美康生物科技股份有限公司美康试剂标准操作程序项目甘胆酸编号共6页方法胶乳增强免疫比浊法用途用于人血清中甘胆酸(CG)浓度的定量测定制定人审核人批准人批准日期发布日期生效日期目录1实验原理和检验目的2标本采集和处理2.1标本种类和采集方法2.2标本处理方法3试剂3.1试剂组成和包装3.2试剂准备3.3试剂稳定性4校准4.1校准品4.2校准品准备4.3校准品稳定性4.4试剂校准周期5质控5.1质控品5.2可接受性判断5.3质控操作6操作7.计算方法8参考值9操作性能10 结果处理11方法局限性12注意事项13参考文献14 技术服务1实验原理和检验目的包被有甘胆酸抗体的胶乳颗粒可与血清中的甘胆酸产生凝集反应，形成抗原抗体复合物，其浊度高低在一定量抗体存在时与血清中CG成正比。通过测定特定波长的吸光度值，参照校准曲线即可计算出血清中CG的浓度。甘胆酸(Cholyglycine, CG) 是胆酸与甘氨酸结合而成的结合型胆酸，是主要胆酸之一，在血清中主要以蛋白结合形式存在，分子量为465.6。甘胆酸在肝细胞合成，经胆管排入胆囊贮存，餐后胆囊收缩，随同胆汁排入小肠，参与脂肪的消化吸收。95%的胆酸在回肠末端重吸收，经门静脉输送至肝脏由肝细胞摄取后，再泌入胆汁。当肝细胞受损或胆汁郁滞时，肝细胞不能有效地摄取经肠肝循环达肝脏的甘胆酸，致使血中的CG含量增高；胆汁郁滞时，肝脏排泄胆酸发生障碍而返流入血循环中，亦可使血中CG含量增高。急性肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化及胆石症患者CG明显升高；梗阻性肝病和药物性胆汁郁积症患者CG也会升高1。2标本采集和处理2.1. 血清。样本采集后请尽快离心测定。2.2干扰物质：血红蛋白5g/L，非结合胆红素20mg/dL，结合胆红素28.8mg/dL，乳糜1450FTU，类风湿因子150IU/mL对检测结果无影响。3试剂3.1试剂组成试剂成 分浓度试剂1三羟甲基氨基甲烷缓冲液 12.1g/L氯化钠5.85g/L聚乙二醇600020g/L试剂2包被有鼠抗人甘胆酸抗体的胶乳颗粒4.5g/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液 12.1g/L牛血清白蛋白2g/L吐温202mL/L3.2试剂准备本试剂为液体，可直接使用3.3试剂稳定性试剂盒在28避光保存，可稳定1年，试剂不得冷冻。试剂开瓶后，28可稳定1个月。4校准4.1校准品准备建议使用本公司校准品。本产品使用时一般采用多点校准。4.3校准品稳定性校准品在28密封避光保存可稳定1年。4.4试剂校准周期 每2周或当发生以下情况时，建议重新校准：变更试剂批号；质控值发生显著偏移；生化分析仪进行了较大的维护。5质控5.1质控品按照质控品使用说明书操作。建议每天进行一次质控实验。5.2可接受性判断质控物的检测值应在给定质控范围，或可以通过参加卫生部室间质评对实验室的运作情况进行系统评估。5.3 质控操作 每日进行样本检测之前首先应进行质控操作，以考察系统的在控情况。如果检测结果符合质控要求则进行样本操作；如果不符合质控要求，则应重复质控操作，以排除可能发生的偶然误差；如果仍不符合质控要求，则应考虑质控品的重新准备、试剂的重新校准或更新、仪器的维护等。建议在样本的检测过程中和或结束后再次进行质控操作，以考察样本的检测全过程的在控情况。6操作6.1各机型参数设定罗氏P800生化分析仪检测参数:Test项目CGAssay Code/Time分析方法2PointRateWavelength（2nd/Primary）波长（副/主）415/340Assay Point测光点12/25ABS Limit吸光度界限/反应方向32000/ INCREASES.Vol标本量15Reagent T1试剂1200Reagent T2试剂250Reagent T3试剂3Reagent T4试剂4Calibration Type校准类型Logit(4P)K计算系数KSD Limit 标准差界限999Duplicate Limit离散度界限-3200032000S1 ABS Limit空白吸光度界限-3200032000Expected Value参考值范围Technical Limit线性范围Unit单位mg/LSTD(1)Conc校准品（1）#.#(混合血清)STD(2)Conc校准品（2）#STD(3)Conc校准品（3）#STD(4)Conc校准品（4）#STD(5)Conc校准品（5）#STD(6)Conc校准品（6）#7计算方法采用多点校准，多参数曲线方程（如logit/log）拟合。以A可求得CG浓度。8参考值小于2.7 mg/L此数据来源于120个健康个体的实验数据，仅供参考。建议各实验室建立自已的参考值范围。妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者CG会显著升高2。轻度：2.7-10mg/L；中度：10-30mg/L；重度30mg/L。一般情况下，随着孕龄的增加，孕妇血清体内甘胆酸逐步增高。在妊娠中晚期，孕妇患轻度肝内胆汁淤积症的比例超过百分之三十。轻度肝内胆汁淤积症一般只需临床观察饮食调节即可，故临床调整孕妇正常参考值为小于10.0 mg/L。9操作性能试剂空白吸光度：波长600nm，光径10mm，空白吸光度1.2000；分析灵敏度：样本浓度为10mg/L时，吸光度差值为0.08000.8000；精密度：批内CV10.0%；批间相对极差10.0%；线性范围：0.580 mg/L，判定依据：r0.995；准确度：回收率在（10020%）范围内(型式检验)，相对偏差15.0%(出厂检验)。10结果处理仪器加样针、比色杯、管路等未清洗干净时可能对试验结果产生影响。反应曲线异常时需进行确认。干扰物质超出限度时需进行确认。11 方法局限性MPO检测只是临床医师对患者进行诊断的指标之一，临床医师还要根据患者的体征、病史以及其它的诊断项目、诊断手段进行综合判断。12注意事项仪器加样针、比色杯、管路等未清洗干净时可能对试验结果产生影响。反应曲线异常时需进行确认。干扰物质超出限度时需进行确认。13参考文献（1）.尹伯元主编.放射免疫分析在医