人类染色体标本的制作及分析课件

人类染色体标本的制作与分析 遗传学实验三 染色体是遗传物质的载体 1 染色体标本及分析的应用 物种亲缘关系鉴定生物进化物种演化染色体变异临床医学诊断杂种分析新品系选育 问题1 染色体出现在什么时期 或者说 在什么细胞中可以观察到染色体 细胞分裂周期 间期前期中期后期末期间期 人类外周血淋巴细胞 人类外周血的淋巴细胞是一种已成熟的不具有进行有丝分裂能力的细胞 但淋巴细胞在植物凝集素 PHA 的刺激下 能转变为具有细胞分裂能力的母细胞 植物凝集素PHYTOHAEMAGGLUTININ具有凝集血红细胞 促进淋巴细胞的幼化和分裂的作用 微管抑制剂 秋水仙素破坏纺锤体阻断有丝分裂使分离周期停滞在中期 标本制作 分裂期细胞 化学试剂固定染色体 滴片 染色 动物 低渗 植物 解离 实验材料外周血预处理 抽取手臂静脉血接种4滴到6毫升DMEM 10 胎牛血清的培养基中 并向其中加入植物凝集素 PHA 37 恒温培养箱中静置培养72小时 每隔24小时摇晃一次 经预处理的外周血培养液 示例 图1 人类女性外周血淋巴细胞染色体 100倍 分裂期细胞 淋巴细胞 淋巴母细胞 图2 人类女性外周血淋巴细胞染色体 400倍 染色体 淋巴母细胞 淋巴细胞 图2 人类女性外周血淋巴细胞染色体 1000倍 染色体 淋巴细胞 淋巴母细胞 淋巴母细胞细胞分裂 增殖 收获细胞 低渗处理 转移培养液到离心管中 1000rpm离心6分钟 获得沉淀 弃上清 0 075mol LKCl与淋巴细胞的悬浮液 9毫升37 预温的0 075mol LKCl溶液 吸管吹打混匀 低渗处理 预固定 0 075mol LKCl与淋巴细胞的悬浮液 37 恒温水浴锅低渗处理15分钟 加入1mL新配制的固定剂 甲醇 冰乙酸 3 1 10ml棕红色悬浮液 预固定 固定 1000rpm离心6分钟 弃上清 加入10mL新配制的固定剂 甲醇 冰乙酸 3 1 吸管吹打重新悬浮细胞 固定30分钟 1500rpm离心6分钟 弃上清重复固定一次 重悬浮 滴片 1500rpm离心6分钟 弃上清液 根据细胞数量的多少适当加入数滴新配制的固定剂 吹打细胞制成悬液 吸取少量细胞悬液 滴2 3滴于冰冷干净的载玻片 冷冻于 20 上 吹散 气干 取3滴Giemsa原液加10滴磷酸缓冲液 混匀后滴在玻片标本上 染色6分钟 蒸馏水洗去染液气干镜检 注意事项 收获淋巴细胞时全部收获离心时注意配平使用油镜完毕用乙醇 擦镜纸清洁物镜镜头 1000rpm离心6分钟注意先配平 1000rpm离心6分钟 注意先配平 弃上清液 加入37 预温的0 075mol LKCl溶液9mL 用吸管轻轻吹打细胞团混匀后 置37 恒温水浴锅低渗处理10 15分钟 加入1mL新配制的固定剂 甲醇 冰乙酸 3 1 用吸管小心吹打 混匀 1000rpm离心6分钟 弃上清 加入10mL固定剂 吹打细胞团制成细胞悬液后 室温下固定30分钟 1500rpm离心6分钟 弃上清液 重复固定一次 弃上清液 根据细胞数量的多少适当加入数滴新配制的固定剂 吹打细胞制成悬液 吸取少量细胞悬液 滴2 3滴于冰冷干净的载玻片 冷冻于 20 上 吹散 气干 取3滴Giemsa原液加10滴磷酸缓冲液 混匀后滴在玻片标本上 染色6分钟 显微镜下观察染色体分裂相的多少及分散情况 DMEM培养基 10 胎牛血清 肝素 500微升 毫升 植物凝集素 PHA 40微克