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文档简介

病理组织切片制作技术 实验内容 掌握组织材料的取材 固定 脱水 透明 包埋 切片 烤片 脱蜡 染色及封固的基本操作 一 取材及固定 一 取材注意事项 1 材料新鲜2 组织块力求小而薄3 勿使组织块受挤压4 尽量保持组织的原有形态5 熟悉取材部位 一 取材注意事项 6 选好组织块的切面7 保持材料的清洁8 切除不需要的部位 二 固定及目的 应用化学试剂使组织或细胞中的无机成分和有机成分凝固或沉淀 以保持其生活状态的过程称为固定 固定液是10 福尔马林溶液 4 甲醛溶液 固定24小时以上 固定的目的 1 迅速阻止组织 细胞死后变化 防止自溶与腐败 使之尽量保持生前的状态与结构 2 使细胞内的蛋白质 脂肪 糖 酶等成分转变为不溶性物质 以保持其原有状态 3 使组织内各种物质成分产生不同的折光率 以便染色后易于鉴别和观察 4 使组织块硬化 便于制作薄片 固定的注意事项 1 组织块不宜大 厚度小于5mm 长宽也应小于15 15mm 2 固定液与组织块的比例应大于10 1 3 软组织或较大组织块可先经2 3小时固定后再修整成小块 重新投入新配制的固定液中继续固定 4 肠道可在浆膜面贴上一层厚纸 以防固定组织变形 二 固定后处理及切片 一 洗涤与修切 二 脱水与透明脱水 将组织块内水分置换的过程 透明 乙醇和石蜡不互溶 最常用的透明剂是二甲苯 既能溶于脱水剂又能溶于包埋剂 石蜡 透明必须适度 50 乙醇30 60min70 乙醇1 2小时或过夜80 乙醇1 2小时95 乙醇1 1 5小时100 乙醇30min100 乙醇20min1 1无水乙醇 二甲苯20min二甲苯10 30min 三 浸蜡与包埋 52 58 石蜡 浸蜡的全过程在60 的温箱中进行 1 1二甲苯 石蜡30min石蜡一30min石蜡二30min石蜡三30min 四 切片 粘片 1 切片前处理及切片2 载玻片处理3 粘片 展片 4 烤片 三 脱蜡和染色 一 脱蜡1 二甲苯 5 10min2 二甲苯 1 2min3 1 1二甲苯 乙醇 冬天20min 5min4 无水乙醇 95 80 70 50 梯度乙醇每级1 2min5 蒸馏水1 2min 二 染色 HE染色法 6 苏木素染液5 15min7 蒸馏水 洗去多余的染液 8 分色 1 盐酸 70 乙醇分色30 60sec8 蓝化 自来水冲洗 碱化 核蓝色 15 20min9 蒸馏水 洗去多余的碱 1 2min10 逐级入50 70 85 乙醇 每级1 2min11 伊红 95 乙醇染液15sec 2min12 95 无水乙醇 无水乙醇 逐级脱水 每级1 2min13 1 1无水乙醇 二甲苯 二甲苯 二甲苯 各5min 四 封固 滴加中性树胶 加盖玻片封片 五 光镜观察 放线菌病硫磺颗粒HE染色300倍 放线菌病硫磺颗粒HE染色300倍 肺毛

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