动物实验技术课件

1 动物实验技术 2 医学实验动物学 前言 一个 两个 中心 主题 3 一个中心 标准化 4 标准化 动物标准化 实验标准化 5 实验动物 动物实验 两个主题 6 动物标准化 饲养管理 生产 营养基础 疾病预防根本 选种 育种关键 质量控制 遗传控制 微生物 寄生虫控制 环境控制 营养控制 7 实验标准化 实验条件 实验技术 8 动物实验通过生物学手段 研究动物实验过程中的反应 表现 发生 发展规律以及有关的技术问题 并将结果推论到人的过程 9 动物实验技术 研究动物实验所需的各种条件 方法 技术 以保证取得科学的 完整的 先进的实验结果 10 动物实验的要求 1 科学性 2 经济性 3 伦理性 11 科学性要求 标准化的动物 标准化的实验条件 标准化的操作规程 12 经济性要求 动物的选择 实验方法的选择 13 伦理性要求 动物福利 3R原则 14 第一讲实验前的准备内容 1 实验条件的准备 2 实验技术的准备 3 实验动物的准备 15 第一节动物实验条件的准备 一 动物饲养条件的准备动物实验过程中 需要一个观察动物反应的饲养场所 既动物观察室 不同等级的动物实验 需要不同环境条件的动物观察室 16 一 普通动物实验观察室环境设施条件要求环境特点 1 开放系统 2 环境和微生物控等级较低 3 不能完全控制传染因子 17 二 清洁动物实验观察室环境设施条件要求环境特点 1 屏障或半屏障系统 2 所有实验用品经灭菌处理 3 实验人员进出要严格按屏障系统操作规程操作 必需设备 超净工作台 18 三 SPF级以上动物实验观察室环境设施条件要求环境特点 1 屏障系统或隔离系统 2 所有实验用品经严格灭菌处理 3 实验人员要严格按隔离系统操作规程操作 19 清洁级和SPF级动物实验饲养设施 1 屏障系统饲养室 2 空气层流架和IVC系统 3 有过滤帽的饲养盒 20 二 实验场地的准备 实验操作室 动物手术室 细胞培养室 其他特殊观察室 21 三 实验药品 试剂的准备 22 四 实验器械的准备 实验器械准备得充分 适当 有助于实验的顺利完成 不同类型 部位的实验使用的实验器械种类 数量不尽一致 实验器械包括完成实验所需要的检测仪器 实验时动物的固定器械 动物外科手术器械 23 一 实验仪器设备根据实验的目的 要求 内容不同而不同 实验前应检查是否准备就绪 24 二 常用动物外科手术器械 三 手术器械的消毒1 煮沸灭菌法 2 高压蒸气灭菌法3 化学药品灭菌法 25 四 敷料 手术巾 手术衣 帽 口罩的消毒 26 五 手术人员的准备为了保证无菌手术的进行 手术人员应作一系列的无菌的准备 不管做什么等级动物的手术 都应该遵循无菌手术的基本原则 一 手术所需人数 二 更衣 三 手 臂的清洁和消毒 27 第二节动物实验技术的准备 一 动物实验理论知识的准备 一 了解实验用动物的基础知识实验用动物包括实验动物 家畜家禽及部分野生动物 特别是要熟悉动物的生物学特性 解剖生理结构 这对开展动物实验研究是十分有益的 28 二 掌握动物实验的基础知识和基本技能动物实验是一项系统的工作 涉及各种实验技术 实验方法 实验手段 以及相关的技术标准 29 二 实验技能的准备 全程预试验 演习整个实验过程 局部预试验 训练技术难点 预试验 30 第三节实验动物的选择实验动物的选择是医学研究中首要考虑的问题 选择恰当与否关系到课题的质量 经费开支 研究途径及方法的简繁 甚至影响到课题的成败及研究结果的正确性 31 一 选择原则 一 相似性原则在医学研究中选用那些生物学特性和解剖生理特点与人类相似的实验动物更具有实际意义 32 1 结构和功能的相似性在可能的情况下 尽量选用那些生物学特性和解剖生理特点与人类相似的实验动物 一般说来 实验动物愈高等 进化程度愈高 其机能 代谢 结构愈复杂 反应就愈接近人类 33 2 年龄状态的相似性实验动物的寿命与人具有很大的差异 但都可以找到与人的生长发育阶段相对应的时期 34 3 群体分布的相似性人类群体属于自然分布群体类型 在以群体为研究对象的课题中 要考虑选择与人类群体基因型及表现型分布类型相似的动物 35 生态或健康状况的相似性在动物的遗传 环境和营养控制相同的情况下 其微生物控制和健康状况对实验的影响就非常重要 一般无菌动物是饲养在超常生态环境条件的动物 用于一些特殊的研究 SPF动物和清洁动物是饲养在健康生态环境条件下的动物 用于多数科学研究 36 5 疾病特点的相似性实验动物有许多自发或诱发性疾病能局部或全部地反映与人类类似的疾病过程和特点 可用于研究相关的人类疾病 37 操作实感的相似性体型大的动物用于外科手术或教学示教中比体型小的动物在操作实感更接近人类 小香猪 38 二 特殊性原则1 动物解剖 生理的特殊性不同种系的动物的解剖生理特征既有共性又存在差异 充分利用这些共性和差异 并符合实验目的要求 是保证实验成功的关键 39 2 对刺激反应的特殊性不同种系的实验动物对相同因素的刺激反应既有共同性的一面 也存在一些特殊反应 同样的刺激对一些动物敏感 但对另外一些动物可能不敏感 因此在实验研究中选用那些有特殊反应 对实验研究敏感的动物作为实验对象 也是保证实验成功的重要因素 40 三 标准化原则标准化原则是指动物实验中选择与课题研究的目的 内容 水平相匹配的标准化的实验动物 只有选用经微生物 寄生虫学 遗传学 环境及营养控制的标准化实验动物 才能排除生物因素 遗传因素 环境及营养因素对实验结果的干扰 41 四 规格化原则规格化原则是指选择与实验要求一致的动物规格 动物的规格是指对动物在年龄 体重 性别 生理及健康状况等量和质的规定 同种动物不同的规格对外界刺激的反应存在差异 42 1 不同的动物年龄 有不同的生物学特性 对实验刺激的反应也随着年龄的不同而有明显变化 2 标准化的健康实验动物的体重与年龄一般呈正相关 选择动物时 可按体重选择 年龄 体重 43 3 同种动物不同性别对外界刺激的反应不一致 因此 一般而言 实验若对动物性别无特殊要求 则宜选用雌雄各半 以避免由性别差异造成的差异 4 动物不同的生理状态 机体对某些刺激的反应有较大的差异 性别 生理和健康状况 44 五 经济性原则经济原则是指在不影响实验质量的前提下 尽量选用容易获得 价格便宜和饲养经济的动物 45 二 常用试验中动物的选择 46 毒理学研究中的选择在试验品毒性试验研究中 选择何种实验动物取决于该动物对试验品的反应 以及试验品在该动物体内的吸收 分布 代谢和排泄与人类的异同程度 因此 作动物实验时 选择动物应当注意以下几个方面的问题 47 1 不同种属的动物对试验品的毒性反应有质与量的区别 同一试验品对不同种属动物的毒性反应是有差异的 甚至有本质的不同 因此在毒理研究中 选择动物时 应至少选择两种动物进行实验且种属差异越大越好 一般应选择一种啮齿类动物和一种大动物 48 2 通常情况下 动物的进化程度愈高 对试验品毒性反应愈敏感 49 3 在选择动物规格方面 选择未成年的动物 雌雄各半较为合适 对年龄有特殊要求的除外 生长期动物对毒性反应比老年动物敏感 动物的性别不同对试验品的毒性反应存在差异 50 二 实验动物的购入在动物实验的各项准备工作中 动物的购入是一个重要的环节 在购入动物前 应确定购入动物的种类 品系 规格 数量及动物微生物控制等级等 购入动物时应注意以下几个方面的问题 51 1 购入或领取动物前 应检查各项准备工作是否就绪 如饲养动物的器具 器材是否准备好 饲养室的卫生和消毒情况 此外 还应检查动物的笼卡 实验记录本 垫料 饲料 秤等实验必须品是否准备好 52 2 购入动物时 应向供应单位及时索取动物的遗传背景 微生物背景 质量合格证 动物的年龄 体重等资料 53 3 购入动物时 无论运输距离的远近 都应考虑运输环境的温度 湿度 饮食以及途中污染和窒息死亡等问题 54 4 购入清洁级以上的动物 应采用带有空气过滤膜的无菌运输罐或带过滤帽的笼盒运输 严格检查其密封状况 55 5 新购进的动物不能直接进入动物实验室 应将动物雌雄分开 并分笼在隔离区饲养一段时间 以便动物得以恢复体能并适应新的环境 56 6 无论购入何种实验动物 都应同时购入相应数量的饲料和垫料 57 三 动物模型准备 58 一 概念人类疾病动物模型是指医学研究中建立的具有人类疾病表现的动物实验对象和相关材料 使用动物模型是当代生物学 医学 药学研究中一种便于认识客观事物的实验方法和手段 通过模型的研究可以有意识地改变那些在自然条件下不可能或不容易排除的因素 以观察模型的反应 59 二 使用动物模型的意义1 避免在人身上进行实验所带来的风险 如 外伤 中毒 肿瘤和辐射病等 60 2 应用动物模型可以随时复制的特点 得到平时临床上不易见到的疾病 如 放射病 毒气中毒 烈性传染病 战伤等 61 3 用动物提供的模型可以克服人类某些疾病的潜伏期长 病程长和发病率低的缺点 潜伏期长的疾病 肿瘤 慢性气管炎 动脉粥样硬化 遗传病等 发病率低的疾病 免疫性 代谢性 内分泌和血液病等 62 4 可以严格控制实验条件 排除各种干扰 临床上疾病较复杂 影响因素多 如 身患多种疾病 病人的年龄 性别 体重 遗传 生活地区和规律 营养状况等各不相同 动物复制的疾病模型 可以选择相同品种 品系 性别 年龄 体重 以及相同的质量控制和饲养条件等 63 5 样品收集方便 收集动物疾病模型的样品不受时间和条件的限制 可根据实验需要随时采集 64 三 动物模型的分类1 按产生的原因分类 1 诱发性或实验性动物模型 ExperimentalAnimalModels 2 自发性动物模型 SpontaneousAnimalModels 3 转基因和基因敲除动物模型 Transgenicanimal geneknock outanimal 65 诱发性或实验性动物模型 是指实验者使用物理的 化学的和生物的致病因素作用于动物造成动物组织 器官或全身一定的损害 出现某些类似人类疾病时的功能 代谢障碍或形态结构方面的病变 机械损伤 放射线损伤 气压 手术等化学药致癌 化学毒物中毒 强酸强碱烧伤 某种有机成分的增加或减少导致营养性疾病等 细菌 病毒 寄生虫 生物毒素等 物理因素 化学因素 生物因素 复合因素 多种因素诱导 67 自发性动物模型 是指在自然情况下所形成的疾病模型或者经有意识的人工处置发生的疾病 并能稳定遗传给后代的疾病模型 包括人工培育的突变系和近交系的各种疾病模型 如 无胸腺裸鼠 高血压大鼠 肥胖症小鼠等 68 需要指出 1 以上两种动物模型各有其优缺点 其优缺点只是相对的 2 很多疾病模型可用不同方式获得 69 3 不同方法复制的动物模型在发病机理和疾病内在特征方面存在着各自的特点 4 大部分自发性动物模型是通过人为定向培育而成的 与人类自然发生的疾病在很多方面有差异 70 转基因和基因敲除动物模型 转基因动物 是指用基因工程技术将外源目的基因通过生殖细胞或早期胚胎导入胚胎染色体基因组内 使之稳定整合并能传给后代的一类动物 基因敲除动物 是指用相应的分子生物学技术将结构已知但功能未知的基因去除 或用其他序列相近的基因将其取代的一类动物 71 2 按实验所用对象分类 1 整体动物模型 2 离体器官 组织动物模型 3 细胞株动物模型 72 四 动物模型的设计原则1 相似形人类疾病动物模型应尽可能地相似于人类疾病 如 大鼠的自发性高血压 复制动物模型时 应注意动物的选择 73 2 重复性理想的动物模型应该是可以重复的 保证动物模型具有重复性的措施 1 选用标准化的实验动物 2 选用标准化的实验设施 3 保证复制因素的一致性 74 3 可靠性复制的动物模型应可靠地反映人类疾病 疾病的主要症状和体征明显 不能出现与实验无关的疾病 注意动物的选择和动物的质量 75 4 适用性和可控性疾病模型应尽量考虑在今后临床上的应用和便于控制其发展 以利于研究 如 雌激素终止大 小鼠早期妊娠的模型无实用性 动物 制模因子 结果散发或死亡无法控制模型的发展方向和速度 无价值 76 5 易行性和经济性复制动物模型应尽量做到方法简单 容易 合乎经济的原则 77 五 影响动物模型制作的因素 78 1 致模因素对动物模型复制的影响 致摸因素的剂量及在相关动物上的反应影响动物模型的复制 因此造模时应注意 1 致模因素的选择 2 致模因素的剂量 3 致模因素与模型的相关信息 79 2 动物因素对动物模型复制的影响 1 动物种类的影响 2 动物品系的影响 3 年龄和体重的影响 4 性别因素的影响 5 生理状态和健康因素影响 80 动物种类的影响 不同种的动物存在许多不同的特点 动物种类选择不当将影响动物模型的复制 81 动物品系的影响 同种不同品系的动物对致模因素的反应不一致 82 年龄和体重的影响 动物的寿命差异较大 解剖生理特征和反应随年龄而明显变化 一般幼龄动物比成年动物敏感 应根据实验要求 选择相应年龄的动物复制模型 健康动物年龄与体重有相关性 83 性别因素的影响 同种 同品系 不同性别的动物 对某些反应不一致 84 生理状态和健康因素影响 动物处在不同的生理状态和不同的健康状况对致模因素的反应差异很大 如 肝功能衰竭动物模型 不能选用患严重球虫病的家兔 因球虫病影响肝功能 85 3 实验技术因素对动物模型复制的影响 1 实验季节不同季节 动物对某些反应可能不一致 对跨季节的动物模型实验可能产生影响 86 2 昼夜不同的影响实验动物的体温 血糖 基础代谢的 内分泌等随昼夜的不同呈有节律的变化 在复制模型时要注意昼夜不同对模型的影响 87 3 麻醉深度的影响不同的麻醉药 剂量对动物麻醉效果有差异 这种差异会影响模型的复制 88 4 手术技巧的影响手术熟练 将减少对动物的刺激 损伤和出血能提高模型的成功率 89 5 实验给药的影响给药途径 剂量和熟练程度不同会对造模产生影响 90 6 对照组对造模的影响对照是检测模型是否成功的重要手段 91 4 环境 营养因素对复制动物模型的影响 环境因素是影响造模及其实验结果的重要因素 居住条件 光照 噪声 氨浓度 温度 湿度 气流速度等任何一项都不容忽视 营养因素对复制动物模型 特别是长期实验 影响显著 应予以重视 造模过程中应注意给水量充分和给予符合卫生标准的饮水 92 六 动物模型的制作1 制模前的准备工作 2 制模动物的选择 3 制模材料的选择 4 制模方法的确定 5 制模环境的确定 准备就绪 开始制模 93 实验准备工作就绪 接下来开始作动物实验 下堂课讲实验过程中的基本技术和方法 94 第三讲动物实验中的基本技术和方法 95 第一节实验动物的抓取与固定抓取与固定是动物实验的一项基本技术 其目的是使动物保持在安静的状态下 顺利地进行各项实验 不同种类的动物的抓取与固定方法不尽一致 同种动物不同实验目的 实验内容 抓取与固定方法也可以不同 不同实验者的操作习惯上也存在差异 96 一 小鼠 一 抓取用右手拇指和食指的指腹抓住尾部中央提起或用两手捧起 97 二 固定1 徒手固定 1 将小鼠提起放在饲养盒盖子上 轻轻向后拉住 2 用左手拇指和食指抓住颈 背部中央皮肤 98 3 翻转抓住颈背部的左手 右手拉住鼠尾再用左手的小指压住尾根部 使整个小鼠呈一条直线 99 2 固定板 器 固定 1 将小鼠麻醉后 用细绳捆住小鼠四肢 2 准备一个15 20cm 边缘钉有5个钉子的方木板 3 将四肢用细绳固定在木版两侧的钉子上 在上颚切齿处用细绳固定在木版前方的钉子上 100 固定板固定适用于大多数动物手术 小鼠固定器适用于尾静脉注射 101 二 大鼠和地鼠 一 抓取1 周龄较小的大鼠和地鼠 可以像小鼠一样抓住尾部提起 102 2 周龄较大的大鼠可张开左手虎口 迅速将拇 食指插入大鼠的腋下 虎口向前 其余三指及掌心握住大鼠身体中段 并将其保持仰卧位 然后调整左手拇指的位置 紧抵在下颌骨上即可进行实验操作 103 注意 操作者第一次抓取大鼠时 最好戴防护手套 不能捉提尾尖 也不能长时间将大鼠悬在空中 104 二 固定1 徒手固定 对体重较小的大鼠可用拇指 食指捏住大鼠耳部及颈部皮肤 余下三指紧捏住背部皮肤 置于掌心 调整好大鼠在手中的姿势即可进行实验操作 如 灌胃 腹腔注射 肌肉注射 皮下注射等实验 105 2 固定板固定 方法与小鼠固定板固定相同 只是需选择更大一些的固定板 3 固定器 盒 固定 方法与小鼠固定器 盒 固定相同 只是固定器较小鼠的大 同样适用于大鼠尾静脉注射 106 三 豚鼠 一 抓取抓取幼龄豚鼠时 用两手捧起 成熟豚鼠可以用左手大把抓起 107 注意 豚鼠性情温和 一般不伤人 但胆小易惊 易造成自伤 抓取时 不能太粗野 更不能抓腰腹部 在操作过程中 如果豚鼠挣扎 手不要越握越紧 否则会造成豚鼠呼吸困难 甚至死亡 108 二 固定1 徒手固定 用左手的食指和中指放在豚鼠颈背部两侧 拇指和无名指放在肋部 分别用手指挟住左右前肢抓起 然后反转左手 用右手的拇指和无名指挟住右后肢 用中指和无名指挟住左后肢 使鼠体成为一条直线 109 2 固定板 器 固定 与大 小鼠 豚鼠固定板固定基本一致 110 四 实验兔 一 抓取抓住颈背部皮肤及两耳提起 并用左手托住兔腹部或臀部 使其重量主要落在左手上 111 注意 家兔温顺 一般不会咬人 但脚爪较锐利 要防止被抓伤 另外抓取时不能只提兔耳或四肢 也不能用单手只抓颈背部皮肤 112 二 固定1 徒手固定 用一只手抓住兔的颈背部皮肤 另一只手抓住兔的两后肢 固定在实验台上 113 也可以坐在椅子上用一手抓住兔颈背皮肤和两耳 大腿挟住兔的后半身 用另一只手抓住两前肢将兔固定 此固定方法适用于腹腔 肌肉注射 及经口给药 114 2 固定盒固定 此固定方法适用于头 耳部位实验 115 3 固定板 台 固定 此固定方法可使兔俯卧 仰卧或侧卧固定 适宜于兔头 颈 躯干手术及其它实验操作 116 五 实验犬 一 抓取对未经驯服和调教的外购犬抓取时 可用特制的长柄铁钳夹住犬的颈部 由另一人用布带或粗绳缚其嘴 并将布带 绳固定在狗耳后颈部 防止脱落 注意 狗性情凶恶 咬人 特别是对陌生人有攻击性 对刚购入的狗要特别小心 避免被其咬伤 在缚嘴时 动作要迅速 捆绑松紧要适中 117 二 固定实验台固定 用特制的长柄铁钳夹住犬的颈部后 麻醉动物 将麻醉的犬放在实验台上 再用粗棉带 绳 固定四肢于实验台上 并将犬舌拉出 此固定方法仰卧位适用于口腔 颈 胸 腹 四肢等部位的实验 俯卧位适用于脑 背部位的实验 118 119 不管采用哪种抓取与固定方法 都应遵守的基本原则是 1 保证实验人员的安全 2 防止动物意外损伤 禁止采取粗暴的动作 因此在抓取与固定动物时 应了解动物的生活习性 生理解剖结构 体重 体型 实验内容确定动物的抓取与固定方法 120 第二节实验动物的编号与标记动物实验时 当使用的动物数或实验分组数大于1时 需要对动物个体间或组间区别开来 就需进行编号与标记 因此编号与标记的目的就是动物个体与组别的识别 SD大鼠 121 标记的方法很多 良好的标记方法应满足 号码清楚 持久 简便易认和适用 不影响实验结果 对动物的刺激小 标记物对动物无毒性 编号方法无定法 原则是使实验者能够识别动物个体和组别 现介绍几种常用的标记和编号方法 122 染色法 一 染色法 是用化学试剂在动物身体明显部位如被毛 四肢等处进行涂染 以涂染的部位或颜色来区别不同个体 组别 是动物实验中最常用 最容易掌握的方法 123 家兔针刺法 二 针刺法 用人工针刺的方法 在动物无体毛或明显部位 如耳 面鼻和四肢部位 拔去被毛 人工针刺号码 刺后涂以酒精黑墨即可 此方法适用于兔及大 中型动物 124 三 打耳孔法 用动物编号的耳孔机直接在动物耳朵上打孔或打成缺口编号 也可用剪刀将耳缘成缺口 根据孔或缺口的位置 数量来标记动物个体的方法 常用于实验猪的标记 125 四 标签号牌法 用塑料 金属或木等材料制成号牌固定在动物身体某一部位或饲养圈 笼上 以标识动物个体 组别的方法 如耳标签 戴项圈 戴脚圈等 常用于大动物的标记 126 第三节实验动物的给药途径与方法实验动物的给药方法主要有 注射法和胃肠给药法两种 此外还有用于皮肤的涂布给药法和用于呼吸道的吸入给药法 裸鼠 127 一 注射分为 皮内注射 皮下注射 肌肉注射 腹腔注射 静脉注射 脑膜下注射 脑内注射 胸腔内注射 腰椎内注射 关节腔注射和心内注射 在实验过程中 应根据实验目的 动物种类 药物类型选择给药途径和方法 若是临床前药物的动物实验 给药方法应与人的给药途径一致 128 129 130 131 二 胃肠给药法分为 自动口服给药灌胃给药直肠给药 132 表常用动物一次灌胃能耐受的最大容积 动物种类体重 g 最大容积小鼠 301 025 300 820 240 5大鼠 3008 0250 3006 0200 2494 0 5 0100 1993 0豚鼠 3006 0 250 3004 0 5 0家兔 35002002500 35001502000 2400100猫 3000100 1502500 300050 80犬10 000 15 000200 500 133 134 第四节实验动物血液和尿液的采集 一 动物血液的采集方法实验动物血液的采集方法有很多 一 按采血部位不同可分为 眼部采血 耳部采血 心脏采血 大血管采血及尾部采血等 小香猪 135 二 按采血使用的手段不同可分为 鼠尾刺血 剪尾采血 眼眶静脉丛采血 心脏采血 断头采血 颈静 动 脉采血 腹主动 静 脉采血 耳缘剪口采血 耳静脉采血 后肢外侧小隐静脉 前肢内侧皮下头静脉采血 翼下采血等 采血时 应根据动物的种类 检验项目 方法及需采血量确定采血的部位和方法 136 137 138 139 140 表常用动物的最大安全采血量动物种类最大安全采血量 ml 最小致死采血量 ml 小鼠0 10 3大鼠12豚鼠510家兔1040狗50300猴1560 141 二 尿液采集 一 代谢笼采集代谢笼的特点是能将动物排泄的大小便分开 达到采集尿液的目的 此法常用于大鼠 小鼠 豚鼠 兔等中小型动物的尿液采集 二 导尿法采集在动物的尿道或输尿管内插一根塑料导管采集尿液 此法适用于兔 犬 猫等 142 第五节实验动物的麻醉方法实验动物的麻醉就是用物理或化学的方法 使动物全身或局部暂时痛觉消失或迟钝 以利于实验操作 比格犬 143 一 全身麻醉 指麻醉药通过呼吸道吸入 静脉 肌肉或腹腔注射 使动物产生短时间的意识丧失 痛觉消失 肌肉松弛和反射抑制等中枢神经系统抑制现象 分为吸入麻醉和注射麻醉 1 吸入麻醉指挥发性麻醉剂经动物呼吸道吸入体内从而产生麻醉效果的方法 常见的吸入麻醉剂有乙醚 一 麻醉类型及方法实验动物的麻醉分为全身麻醉和局部麻醉两种类型 144 1 步骤与方法 1 准备容器 小型实验动物 5000ml标本瓶1个 10ml试管或离心管1个 如鼠类中型实验动物 适当大小的玻璃箱1个 试管或离心管1个如猫 兔大体形动物 麻醉口罩 如犬 145 2 操作步骤 放入挥发性麻醉剂 放入动物 密闭4 6分钟 麻醉 实验 小容器追加麻醉 146 2 吸入麻醉的注意事项 A 容器密封性 B 防止麻醉窒息和过量 C 适时追加麻醉 147 2 注射麻醉 通过注射的方法 将麻醉剂注入动物的体内 使动物进入麻醉状态的方法 常用的注射方法有静脉注射 肌肉注射和腹腔注射等 148 1 准备器械 注射器 1 步骤与方法 149 2 注射麻醉方法 腹腔注射 固定动物 头下位 腹部后1 3处靠外侧 静脉注射 固定动物 血管 注射肌肉注射 固定动物 肌肉发达 注射 150 2 注射麻醉的注意事项 A 腹腔注射时使动物的头处于低位 使内脏向上腹移动 可避免注射时伤及内脏 B 静脉注射必须缓慢 过快会引起麻醉意外 C 肌肉注射应在肌肉较发达的部位注射 有利于麻醉剂的吸收 腹腔注射 肌肉注射和静脉注射麻醉动物各有优缺点 应根据麻醉剂的特性 动物解剖特点选择方法简单 麻醉效果好的注射方法 151 常用实验动物全身麻醉药及用法和剂量 152 153 154 第六节动物实验外科操作技术 兔 155 一 术前准备术前准备是否充分 周到是手术是否能够顺利完成的关键 术前准备工作很多 但主要包括手术动物的准备 手术器械的准备 手术时所用药品的准备 手术室的准备 156 二 术中基本操作技术 一 术部被毛的去除在实验外科操作技术中 对已麻醉 固定就绪的动物首先要作的就是对术部被毛的去除 以免影响术部的消毒 手术操作和创口术后愈合 常用的被毛去除方法有剪毛法 剃毛法和脱毛法 157 常用的脱毛剂配方 配方1 硫化钠8g溶于100ml水中 配方2 硫化钠 肥皂粉 淀粉的比例为3 1 7 加水调成糊状 配方3 硫化钠10g加生石灰15g溶于100ml水中 配方4 硫化钠8g 淀粉7g 糖4g 甘油5g 硼纱1g 水75g 共100g 调成糊状 158 一 术后护理影响动物手术成败的因素很多 如动物的选择 动物的健康状况 麻醉 手术熟练程度 术后动物的护理等 其中术后护理至关重要 动物由于受到麻醉及手术的影响 使原来平衡的机体 机能状态发生一系列的变化 机体的一些功能可能受到不同程度的影响 因此 为确保动物手术达到预期的目的 应对手术动物施以良好的术后护理 并对术后动物发生的各种情况作及时处理 159 一 术后动物的特点1 体温下降 麻醉和手术都可使动物体温有不同程度的降低 麻醉时间越长 下降越明显 2 疼痛 动物苏醒够常见的问题是疼痛 动物因疼痛会出现行动异常 嘶叫 饮食异常 心率加快 循环衰竭等 160 3 食欲下降或丧失 大部分手术后的动物因疼痛而食欲下降 有的动物因手术使采食功能丧失 如口腔内手术 4 术部易感染 术后动物饲养在环境卫生恶劣的室内 极易引起术部感染 161 二 术后动物对环境的要求术后动物对的饲养环境温暖 清洁 安静 光线柔和 1 环境温暖 麻醉和手术的动物体温都有不同程度的下降 而低体温休克是动物实验后死亡的一个重要的原因 因此手术后动物饲养室温宜高些 以25 30 为佳 辅以清洁 柔软的铺垫物 也是手术后动物保温的较好办法 162 2 环境卫生 手术后动物饲养室的环境卫生应达到或超过手术前动物对环境卫生的要求标准 环境卫生差 易引起动物手术部位的感染 化脓 甚至死亡 普通动物环境要求无尘粒 无蚊蝇 对环境常消毒 经常更换动物的铺垫物 动物室的通风设备运转良好 室内氨浓度不宜过高 163 3 线柔和 无噪音 手术后动物室的光线宜暗淡些 切忌强光照明 若要观察动物可借助手电筒或局部光源 术后观察动物时 动作宜轻 严禁大声喧哗或出现尖锐的撞击声 164 三 术后动物的其它护理措施术后未苏醒的动物 1保持呼吸道的畅通 2 镇痛3 独笼饲养 165 第七节实验动物的处死方法 C57小鼠 166 处死实验动物应遵循动物安乐死的基本原则 安乐死是从人道主义和动物保护角度 在不影响实验结果的同时 尽快使动物无痛苦死去的方法 167 实验动物处死方法很多 常用的安乐死方法有 1 颈椎脱臼法2 空气栓塞法3 急性放血法4 断头法药物法等 168 1 颈椎脱臼法颈椎脱臼法常用于小鼠 大鼠 也用于沙鼠 豚鼠 兔 2 空气栓塞法主要用于大动物的处死 3 急性放血法常用于小鼠 大鼠 豚鼠 兔 猫 犬等 四 断头法主要适用于小鼠 大鼠等小动物 169 第八节动物实验意外的发生与对策 动物实验意外是指在动物实验过程中 因各种因素导致的非实验性动物损伤 如 动物质量等级下降 发病 机体损伤 死亡等 170 一 动物运输意外 实验动物在运输过程中发生的意外丢失 质量等级下降 感染病原微生物 死亡等 171 1 动物意外丢失 对策 运输动物时 认真检查动物运输过程中的每一个环节 精心准备运输笼具 避免笼具破损 2 动物质量等级意外下降 对策 运输清洁级以上的动物时 应采用带有空气过滤膜的无菌运输罐或带过滤帽的笼盒运输 4 动物死亡 发生与对策 172 3 意外感染病原微生物 对策 运输实验动物时 防止来源不明动物进入 并能有效防止外部微生物侵袭和污染 不从疫区引进动物 在非疫区引进动物时 动物不经过或在疫区停留 4 动物意外死亡 对策 尽量不在恶劣气候条件下引进动物 则应对实验动物采