杨凡-T细胞及NK细胞肿瘤流式细胞分析.pdf

T NK 细胞肿瘤的流式细胞分析细胞肿瘤的流式细胞分析 T 细胞增生 多克隆T 细胞增生 Polyclonal T cell proliferation 寡克隆T 细胞增生 Oligoclonal T cell expansion 单克隆T 细胞增生 Monoclonal T cell predomination 恶性单克隆T 细胞增生 T cell lymphoma leukemia 惰性单克隆T 细胞增生 Indolent monoclonal expansion 侵袭性单克隆T 细胞增生 Rapid and persistent monoclonal expansion Flow Cytometry Features Comment 前向散射 Forward Scatter FS 正常T 细胞以小淋巴细胞为主 侧向散射 Side Scatter SS 约有25 的T 细胞肿瘤有侧向散射增高 丢失泛T 细胞抗原 CD2 CD3 CD5 CD7其中之一丢失强烈提示肿瘤 异常CD4 CD8比值 双阴 CD4 CD8 双阳 CD4 CD8 升高 CD4 CD8 倒置 CD4 CD8 异常抗原表达 CD10 AITL CD25 ATLL CD52 T PLL CD30 ALCL and etc T cell 的成熟分化与抗原表达的成熟分化与抗原表达 Pro T lymphoblasts cCD3 CD7 sCD3 CD34 CD4 CD8 Pre T lymphoblasts cCD3 CD7 CD2 sCD3 CD34 Cortical thymocytes cCD3 CD7 CD2 CD1a CD5 sCD3hetero CD4 CD8 Medullary thymocyte mature T cells cCD3 CD7 CD2 CD1a CD5 sCD3 homo CD4 CD8 CD4 CD8 T 细胞克隆性增生的流式细胞学特征细胞克隆性增生的流式细胞学特征 胸腺皮质胸腺皮质T 细胞细胞 胸腺皮质胸腺皮质T 细胞细胞 CD4 CD8 Double negative Mature T cell neoplasm g dg d T cell LGL 19 year old male with lymphocytosis and neutropenia peripheral blood sample CD4 CD8 双阴双阴 成熟成熟T 细胞肿瘤细胞肿瘤 CD4 CD8 Double negative Mature T cell neoplasm g dg d T cell LGL 19 year old male with lymphocytosis and neutropenia peripheral blood sample CD4 CD8 双阴双阴 成熟成熟T 细胞肿瘤细胞肿瘤 CD4 CD8 双阳双阳 成熟成熟T 细胞肿瘤细胞肿瘤 CD4 CD8 Double positive Mature T cell neoplasm 55 year old female with lymphocytosis peripheral blood sample CD4 CD8 Double positive Mature T cell neoplasm 55 year old female with lymphocytosis peripheral blood sample CD4 CD8 双阳双阳 成熟成熟T 细胞肿瘤细胞肿瘤 CD4 CD8 Mature T cell neoplasm ATLL 48 year old male with left axillary lymphadenopathy FNA CD4 CD8 CD4阳 成熟T 细胞肿瘤 CD4 CD8 Mature T cell neoplasm ATLL 48 year old male with left axillary lymphadenopathy FNA CD4 CD8 CD4阳阳 成熟成熟T 细胞肿瘤细胞肿瘤 CD4 CD8 Mature T cell neoplasm ATLL 48 year old male with left axillary lymphadenopathy FNA CD4 CD8 CD4阳阳 成熟成熟T 细胞肿瘤细胞肿瘤 CD4 CD8 Mature T cell neoplasm T LGL 37 year old male with Leukocytopenia Peripheral blood sample CD4 CD8 CD8阳阳 成熟成熟T 细胞肿瘤细胞肿瘤 CD4 CD8 Mature T cell neoplasm T LGL 37 year old male with Leukocytopenia Peripheral blood sample CD4 CD8 CD8阳阳 成熟成熟T 细胞肿瘤细胞肿瘤 Phenotype TCR Clinical conditions Additional feature CD4 CD8 双阴 TCRgd LGL 少见表型 Neutropenia 皮肤T 细胞淋巴瘤 CD56 肝脾肝脾T 细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤 主要表型 hepetosplenomegaly CD4 CD8 双阳 TCRab 良性胸腺皮质细胞增生 瘤 sCD3 heterogeneous 反应性增生 一过性 sCD3 homogeneous T PLL 25 特异表型特异表型 sCD3 homogeneous CD4 CD8 CD4阳 TCRab ATLL CD25 Loss of CD7 MF SS Skin lesion T PLL 60 常见表型 Circulating prolymphocytes CD4 CD8 CD8阳 TCRab LGL 常见表型常见表型 Neutropenia T PLL 15 Circulating prolymphocytes Paniculitis like most Skin lesion TCRgd LGL few Neutropenia Surface CD3 成熟成熟 T 细胞细胞 肿瘤肿瘤 sCD3 CD56 成熟成熟 NK 细胞细胞 肿瘤肿瘤 sCD3 CD56 Aggressive NK cell Leukemia 78 year old male with lymphocytosis and hypercalcemia peripheral blood sample sCD3 CD4 CD56 急性白血病急性白血病 sCD3 CD4 CD56 BPDC Neoplasm 79 year old male with anemia bone marrow aspirate sCD3 CD4 CD56 BPDC Neoplasm 79 year old male with anemia bone marrow aspirate 治疗前后治疗前后 sCD3 CD4 CD56 急性白血病急性白血病 Clinical conditions Phenotype Comment CLPD NK NK LGL 惰性NK 细胞增生 CD56 dim CD57 CD16 cCD3 CD5 CD8 Benign or indolent Aggressive NK cell leukemia 侵袭性NK 细胞白血病 CD56 CD16 CD57 cCD3 EBV aggressive Nasal NK T cell lymphoma 鼻NK T细胞淋巴瘤 CD56 CD2 cCD3 EBV lymphoma Differential BPDC neoplasm CD4 CD56 and negative for all lineage specific markers including cCD3 cCD22 cCD79a CD19 MPO CD14 CD16 CD64 Acute leukemia Surface CD3 CD56 NK 细胞细胞 肿瘤肿瘤 CD30 成熟成熟T 细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤 86 year old female with left posterior neck lymphadenopathy Lymph node biopsy submitted for flow cytometry 86 year old female with left posterior neck lymphadenopathy Lymph node biopsy submitted for flow cytometry CD30 成熟成熟T 细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤 86 year old female with left posterior neck lymphadenopathy Lymph node biopsy submitted for flow cytometry CD30 成熟成熟T 细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤 Clinical conditions Phenotype Comment ALCL ALK ALK 间变性大细胞淋巴瘤 CD30 cCD3 ALK EMA EBER may loss T cell antigens null cell ALK 2p23 break apart ALCL ALK ALK 间变性大细胞淋巴瘤 CD30 strong and homogenous ALK EMA min EBER TCR clonal maybe PTCL NOS Cutaneous ALCL 皮肤ALCL CD30 cCD3 CD4 maj variable loss of pan T markers ALK EMA CD30 cCD3 lymphadenopathy ALK EMA Good prognosis Lymphomatoid papulosis of skin 淋巴瘤样皮肤丘疹 The same as above Almost benign but may be TCR clonal Differential Classic Hodgkin Lymphoma 经典何杰金淋巴瘤 CD30 CD15 PAX 5 weak EBER Negative for T antigens PTCL NOS 非特异 外周T 细胞淋巴瘤 Similar to that of ALCL ALK Not always possible CD30 成熟成熟T 细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤 CD10 成熟成熟 T 细胞细胞 肿瘤肿瘤 77 year old male with splenomegaly eosinophilia and lymphadenopathy Lymph node biopsy submitted for flow cytometry CD10 follicular helper T cells 77 year old male with splenomegaly eosinophilia and lymphadenopathy Lymph node biopsy submitted for flow cytometry CD10 成熟成熟 T 细胞细胞 肿瘤肿瘤 CD10 follicular helper T cells Angioimmunoblastic T cell lymphoma AITL EBER ISH CD10 成熟成熟 T 细胞细胞 肿瘤肿瘤 CD10 CD23 CD3 CD20 CD4 CD10 成熟成熟 T 细胞细胞 肿瘤肿瘤 T 细胞克隆性鉴定 PCR法 针对基因 DNA TCR gamma 定性 PCR 无扩增 阴性 smear 扩增 单克隆 a band 寡克隆 1 band 不能做克隆定量 流式法 针对基因表达产物 Ag TCR beta V region 可同时做免疫分型辨别 多克隆Polylconal 寡克隆 免疫分型 单克隆 免疫分型 可以做克隆定量 跟踪 X lymphocyte X T lymphocyte X T lymphocyte subset B 细胞克隆性分析 细胞克隆性分析 Ig 轻链分析 轻链分析 2 个成员 个成员 kappa lambda T 细胞克隆性鉴定 T cell clonality evaluation TCR V beta family analysis 24 members Vb 1 Vb 5 3 Vb 17 Vb 12 Vb 4 Vb 5 1 Vb 3 Vb 2 Vb 5 2 Vb 7 1 Vb 7 2 Vb 8 Vb 9 Vb 11 Vb 13 2 Vb 13 1 Vb 13 6 Vb 14 Vb 16 Vb 18 Vb 20 Vb 23 Vb 22 Vb 21 3 T 细胞克隆性分析细胞克隆性分析 TCR V beta 分析分析 24 成员 成员 T 细胞克隆性鉴定 Vb 1 Vb 5 3 Vb 17 Vb 12 Vb 4 Vb 5 1 Vb 3 Vb 2 Vb 5 2 Vb 7 1 Vb 7 2 Vb 8 Vb 9 Vb 11 Vb 13 2 Vb 13 1 Vb 13 6 Vb 14 Vb 16 Vb 18 Vb 20 Vb 23 Vb 22 Vb 21 3 Normal 70 coverage 24个个 显显 成员可覆盖成员可覆盖70 的的T 细胞细胞v beta亚群亚群 其余为其余为 隐隐 成员成员 占占T 细胞细胞v beta亚群亚群 30 左右左右 T 细胞克隆性鉴定 V b 1 V b 5 3 V b 1 7 Vb 12 V b 4 V b 5 1 V b 3 V b 2 V b 5 2 V b 7 1 V b 7 2 V b 8 V b 9 V b 1 1 V b 1 3 2 V b 1 3 1 V b 1 3 6 V b 1 4 V b 1 6 V b 1 8 V b 2 0 V b 2 3 V b 2 2 V b 2 1 3 显 亚群扩增 显 亚群扩增 30 总覆盖率总覆盖率 70 单克隆单克隆T 细胞增生对细胞增生对T 细胞细胞v beta亚群的影响亚群的影响 1 单个 单个v beta亚群扩增亚群扩增 显 或 隐 亚群 显 或 隐 亚群 2 其余 其余v beta亚群缩减亚群缩减 T 细胞克隆性鉴定 V b 1 V b 5 3 V b 1 7 V b 1 2 V b 4 V b 5 1 V b 3 V b 2 V b 5 2 V b 7 1 V b 7 2 V b 8 V b 9 V b 1 1 V b 1 3 2 V b 1 3 1 V b 1 3 6 V b 1 4 V b 1 6 V b 1 8 V b 2 0 V b 2 3 V b 2 2 V b 2 1 3 单克隆单克隆T 细胞增生对细胞增生对T 细胞细胞v beta亚群的影响亚群的影响 1 单个 单个v beta亚群扩增亚群扩增 显 或 隐 亚群 显 或 隐 亚群 2 其余 其余v beta亚群缩减亚群缩减 显 亚群全面萎缩 显 亚群全