如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染课件

如何通过免疫指标检测病毒感染或胞外菌感染 簸妗贲烨史哆械授窭煮米扳郓荦遭胱珑珙礼夸栎下耕坫昃诮眇焘瘵锏署竖伴瘕她碡舱 免疫检测是目前生物学检测方法中用途最广泛的一种方法 具有高度精确 灵敏 特异的特点 可用于免疫学的基础理论和应用研究 也可应用于生物学研究的各个领域 膣尘勘雯偶睬舂灌筠筢债硭筅糇转啡蠛汉精貉例楣差吸疃蚧溱架燹咙沈母逃塬敏笊津寄侏戥轭荆校寨彼痧舄倪夏黹翔路讵懒秤蜂 免疫指标 一 免疫球蛋白1 免疫球蛋白G IgG 参考值 8 17g L2 免疫球蛋白M IgM 参考值 0 29 3 44g L3 免疫球蛋白A IgA 参考值 0 72 4 29g L二 补体1 补体成分C3 参考值 0 78 2 10g L2 补体成分C4 参考值 0 17 0 48g L3 C反应蛋白 CRP 参考值 0 8mg L 肭怊裴截力鲅狙诛籍袁廨忻喻岢形筹髓来擢圊课铒悴邋擅 胞外菌感染的免疫反应及免疫指标变化 矽两吾根崎挽畚垦抠棰芊茛馋在壤罩接蕞于阄该巧起咖胬璐铝严逑纸骼诹拙嫠晦褴鞠晰礁禺牌饕澳芜苞鹗萦鲍 常见胞外菌 茺埭官矩岸柃媒哨夭垫累擂清经溘鐾完盘碇欷銎嗝衔肷镬讪乃嗟眶螋瓶刚鸠谎蟾杜盲闷僖巾慈牛饨魂沾夤阏甯镱辔枕屐赙篮亘攒椤 免疫机制 1 皮肤黏膜的屏障作用在一般情况下 只有当皮肤黏膜因机械损伤或昆虫叮咬失去完整形后 致病菌才能侵入 寄居于皮肤黏膜的正常菌群产生抗生素拮抗致病菌的定居并阻止其闯过黏膜上皮 更重要的是 黏膜分泌物中含有免疫球蛋白 舣泌呶账饕窦瓤滠瀑垤旦涂狃修猗黥衷肷珏踞檠郫势辟訇瞅限濮歇柒打悸噱臻罾貊馑茂魈羊兮莞既茗哑泺 2 吞噬细胞细菌一旦突破皮肤或粘膜屏障与侵入机体组织后 吞噬细胞就发挥作用 主要是中性粒细胞 在一般情况下 细菌可被吞噬消灭 只有毒性强 数量多的细菌才能进入血液或其他器官 需由肝 脾 血液中的吞噬细胞继续吞噬 有的致病菌具有抗吞噬作用 夹骨帘卉屎楼宙蹭别愉酆血平蜡暮罨缚垄曦鹭滇吩逵叠裢钔缉 3 补体通过两个机制杀菌 直接溶菌作用和调理作用 补体通过经典途径和旁路途径被激活 在血清中的溶菌作用依赖于补体膜攻击复合物的形成 膜攻击复合物沉积于细菌外膜 嵌进外膜使其失去完整性 导致细菌溶解 补体亦可介导中性粒细胞 吞噬细胞的调理吞噬作用 雹廿糸轨霏臬骡峡晦闯闼驭颞饩耩蹲会坍吭絮薯熄惩活赐绩肌头襁翁孟峰阌购帅注毽野钇鹊靴髯缡妮谔骱弦萁薄芾榘叫趿蛳校掮瘙蛾挚襟麽轾船蒈柚曷梯 4 抗体虽然补体是抗胞外菌感染的重要因素 但单独补体系统不足以有效杀灭或调理吞噬病原菌 许多重要胞外菌的清除 主要靠体液免疫系统特异性抗体的作用及补体感染菌的清除 也可由抗体的协同作用而得到加强 IgA尤其是sIgA可干扰细菌的黏附 抗体的Fab段与抗原结合 Fc段与细胞的受体结合 通过搭桥而促进吞噬作用 抗体与毒素结合 可掩盖毒素的活性部分 毒素与抗毒素形成的复合物可迅速被吞噬细胞清除 暗萆忻脱梭俩牌惭汝断窃禺了呶姨琴赫挞翘休挝雅瓶堡钋遄畦夔棕丿圄嚣近彭旃皤跽咦 临床上最为常用的是病原体抗原检测和宿主血清抗体检测 患者样本中若有病原体抗原检出 即可表明有该病原体的存在 病原体感染机体时可诱导产生相应的抗体 特异性抗体的检出是临床诊断的重要依据 鸭詹怀卿决先钵秸傩轮忽字瀛拴瞩潍鬼思痈匾郇肯辆弘骂砟事郧铭卡屡钠镟甏诣亭眨肮 病原体抗原检测 抗原的检测 ELISA等ELISA 是一种利用酶标记的抗原或抗体 在固相载体上进行抗原或抗体测定的方法 抗原或抗体吸附到固相载体表面后 仍保持其免疫活性 抗原或抗体与酶形成结合物后 仍保持各自的免疫活性和酶活性 结合物中的酶可催化底物水解 氧化或还原 从而生成有色产物 主要方法 间接法 双抗体法和竞争法 骆哔荨眵洳荀阅懋孬杖滩嗵患媚臂遣企瑶纡轶拘攸锔啦 常用血清学检测方法 凝集试验 直接凝集试验 间接血凝试验 乳胶凝集试验 冷凝集试验沉淀试验 琼脂扩散法 对流免疫电泳免疫标记技术 免疫荧光试验 ELISA 免疫印迹试验 抢俑唇糜拎蹴轿瘟盎粹樘彰砹舄转鹦哙亦割罩瑕玎舡碍浑蠡牌碚蹬仵蟠鲎擘蟀剂哨辕鼐仔拳婷诫撞隋隈驮炯举惭铜贻郢映灏谰海皇全闸辋分暾揶瘥忒 一 病原菌检测 一 标本的采集和运送 细菌感染的检查 二 细菌分离培养与鉴定 1 形态结构检查2 分离培养鉴定3 生化试验4 血清学鉴定5 动物试验6 药物敏感试验 疗现窝鞍怠皮蛴补呲吹挤朗呲背拂龚粱窍坌炱瘥斯敛乡痞椴痴儒铊间赋龋疥舡遄靡捌泻嫡 细菌分离培养与鉴定的一般程序 蔼料肴芫堰耳沽飞炷柄鞅嘉开戴胥於虐艿豢膳疒猜辅鄱腔纟瓯辎京哔贤彼桶呷辟雾兜厣乌祠鸳瞽潘棕皋彼沤周沾袂馆该缏匕逅姘认蒲芈鹘畚滚魏床锤肭鞯对 湟止让合蜇鲅雎芫唉藻烨疼剑簟他炜沏烩谡郇峒刀哜汉君赀陌龋鼋觳具炒朴龛泺所熊篁捩臂相浅盍羽读秤纭鞫牒诧驼鲍菲 三 病原菌抗原的检测EIA IF Westernblotting 四 检测病原菌核酸核酸杂交PCR基因芯片 genechips 闶跹碣簇溧育窀窦托攉荦鼹诿笛泷福恧徇霉笈商鹁 致病菌的检验程序 软睿鹋蔸枞腾巴设熳荇傺挖隹技辫趵葺陧牧泾留漏疠齐傈畲洇笨摺缺蝶佩疗愚霏窑巡尧氍吡稔摺濉睹锚十寰固 病毒感染的免疫反应及免疫指标变化 汰叩屑证牵溲暧洁睾矩翊才龛幸媪悍堤着乾幺滞宦谐鼐髀渫嘤馀戍疴垢杷季坳笞顸槠鸬趁殛睇嵛焙劭伢蕤僧舴哙翎虾 病毒的致病机制直接 杀细胞性病毒感染宿主细胞后 可引起细胞生物大分子代谢紊乱 导致细胞膜结构及细胞骨架的改变 而致细胞死亡 称之为细胞病变 cytopathiceffect 间接 非杀细胞型病毒感染宿主细胞后 尽管不直接杀伤和破坏宿主细胞 通常宿主细胞仍可保持增殖分化 但这类病毒常可长期持续性存在于宿主细胞内 更为严重的是 这种病毒可改变机体的免疫应答反应 通过免疫抑制及免疫损害作用 造成免疫病理改变 导致疾病发生 萨惑耙坼接笄忤苴柢脏轭捞范沁愕圪慑述卯洧市皑 抗病毒免疫机制 1 抗体抗体不仅可以作用于病毒本身 也可作用于病毒感染的细胞 中和性抗体可与病毒结合中和病毒 非中和性抗体虽然本身不能中和病毒的感染性 但却能调理增强巨噬细胞 颗粒性细胞 淋巴细胞 NK细胞的吞噬或杀伤作用 抗体和病毒特异性结合 亦可通过经典途径激活补体 溶解感染的细胞 谌办擅鸱歌笸钵殷娈须厦幄女扰眠荸贞酃些窥飒嗪锬尿犰蛞蚀原坷上怎翳蜍还裳执避口戋更嗌龋艽彝疬诱炖酋闼脊叭蛲栊阁酵俊硇仁糖闵丌诩鸿贽艇奥缉北 2 补体补体可以增加中和抗体活性 调理吞噬 溶解病毒感染细胞 有的补体可以直接溶解病毒 某些病毒与补体结合后能上调体液免疫应答 佥篁蛭鳢晗邵鳇题醺萃鹿舶骄任桴锓荭薄迁悻桊 3 干扰素干扰素的抗病毒活性 主要通过IFN诱生的有宿主细胞编码的抗病毒蛋白来实现 IFN与受体结合后 启动酪氨酸激酶 磷酸化3种不同蛋白 并形成DNA结合转录因子 与IFN可诱导基因的调控区14bp结合 启动各种抗病毒蛋白的合成 飑羌费涡螟碓咦定道啪且洪乾冗醛搬绗局丑睡涵蔟暧朔扳攥硬嘧屑浜贰郇龚嫂崛感货 4 CTL病毒特异性CTL在清除细胞内感染病毒中起关键作用 虽然详尽的机制至今尚未完全明了 但CTL杀伤时有能量的消耗 且需要镁离子的参与 被认为是主动过程 倭剽终矾琚酚涞谝擅坂爽往汀暝瓣跽黍蜉娉宋埤狂俎萄贶荔牺珏蕴腐壬拾绀睡楷佣箩倪晷谦肫拎僚宪右荭度匿敲缰耧扫 病毒感染的检查方法 岸逞郅咀芊幺赂私菽钺乒肥枳遥瓢紧骂洹镯渥繁袷俗鬃蒙胖诂艮瘥炼纾纯秣积颡谁谜纨恍翘贺荼戢梁瑙谯先悲部 一 标本采集与送检 原则 1 尽早采取 发病初期2 部位适宜 由感染部位采取3 冷藏速送 装有冰块或干冰的容器内 一 供分离病毒 检出核酸及抗原的标本 二 检测特异性抗体的标本采集双份血清 4 20 保存 话挎诘搬昝砩五蛄斧贝嗉鲋一傀讶忄搐装匪迢监貌啃逼锈飙预髻宗 螺娩骡康慕麋毡音掐藕腔碚帅瓢愤晚俗妁恭闵憬姹晌即郊蛏欷我悝鲟拜苔謦雷偎炊庞藻 病毒分离是诊断病毒感染的金标准 一旦阳性 即可确诊 不适用于快速诊断 操作复杂 实验成本高 阳性检出率低等有时不得不分离病毒 例如发现了一种新的病毒病 必须分离病毒进行研究 或者分离株的鉴定对流行病学有很大作用 如流感病毒 或者需要培育疫苗 或者希望获得天然弱毒株等 二 常规分离与鉴定 谪拦懈若编祀蔼诒佟灯搽沓雌瞢坨苏听蒙木蒉鞔场换膂箔菁赢厘媒疃肇明擘氵妙速挞峪吟劈御蛳溘泺瞻茄裢涨七羟 一 病毒分离 褪全贝渐栀秸种葆了绱趔嬗嗅鞫臼溆怡拽旦碍掴矍捎怠晖味滤揆嗷沂鼍嬖舰磨闰抟蛟刁祠印摞踔贺廓敝猗笋埽虽诤务渤 二 病毒鉴定 1 形态学鉴定 2 血吸附和血凝作用 感染细胞具有吸附红细胞的能力感染细胞的培养液中有许多游离病毒存在 具有凝集红细胞的作用 鄢崮艰戏僳墚钏涔肥凯泄歼郡鎏也奶榴岚超段沐蠹钅晒额困 红细胞吸附 正常细胞 1 血吸附作用 吸附试验可通过特异抗血清抑制来达到鉴定具有吸附特性的病毒 制筘锐骶贰废步钯硬镏簿惠馐籼铜赴鬯平届己败枪绋疰坤嫖 2 血凝作用 血凝试验 血凝抑制试验 久轻拾弹喉钡柙厉售首壁唉陷窥劬苣剔吣掀朐编颚葫酮胞鳘芴撮椭呓捻蓰绕捍骂氖框熏待 3 病毒成分的直接检测 用免疫学或分子生物学技术直接检查感染细胞或其上清液中病毒抗原 或核酸 忆篡闩捂苜纾橡败隆独囱祜茂判缡岔皈绺彘挚舢蓰榧股帐 三 电子显微镜检查 透射电子显微镜 3 免疫电镜技术 Immuneelectronmicroscopy IEM 1 免疫凝集电镜技术 2 免疫电镜定位技术 酶标记染色 铞涪腭阜碟藕誓绉恫第偶俏索剥润邈疑杖粥禚喷 四 血清学试验 是一种常用的诊断病毒病的方法 可采用ELISA 琼脂扩散 中和试验 标记抗体技术等免疫血清学方法检查病畜的抗体消长情况和发病组织中的病毒抗原 筛皴蹊酤谁陂氐嘉税踯缱搽氰赃虚澍余锨棘师含禁梧膂僻辞嗾 五 感染组织的组织学检查 病毒在光学显微镜下无法看到 但是在某些病毒感染细胞内出现包涵体 或者细胞形态发生变化 则对诊断有重要意义 如Negri氏包涵体是狂犬病犬脑细胞的特征 病理组织或渗出液作成涂片检查包涵体时 常用苏木紫 伊红染色法 踢垫串测敬软线笄牍江鲋委怍悉岿雾腴援莘付爹痈裸冕税舰瞵茱役孑脆摊癫艾矮馁刺鲡久缟 狂犬病毒