细菌的分类与命名球菌课件

临床病原生物学教研室郭庆合 第五章细菌的分类与命名 第一节概述 微生物种类多 约20万种 估计总数约500万 600万 细菌分类学包括 分类 鉴定与命名 发展 传统分类学 系统分类学 细菌分类学 Bacterialtaxonomy 是微生物分类学的一个分支 是对细菌进行分类 classification 鉴定 identification 命名 nomenclature 的一门学科 一 基本概念 分类 细菌分类根据细菌各自的特征 并按照亲缘关系分类 以不同等级编排系统 人为分类法 以细菌形态和生理生化特征为依据 包括传统分类法和数值分类法 系统分类法 以核酸和蛋白质结构的同源性进行分类 一 基本概念 命名 鉴定 命名 在分类的基础上 给与每种细菌一个名称 便于交流 鉴定 对未知细菌按分类原则确定分类地位 二 分类等级 细菌的分类等级依次为界 门 纲 目 科 属 种 种是细菌分类的基本单位 将生物学性状基本相同的细菌群体归成一个菌种 性状相近 关系密切的若干菌种组成一个菌属 相近的属归为一科 依次类推 在两个等级之间 可添加次要的分类单位 如亚门 亚纲 亚属和亚种等 注 群和组不是正式分类等级 具有某种共同特性的某个集体 任何等级都可借用 三 命名法 细菌的命名依据 国际细菌命名法规 的规定 学名用拉丁文 遵循 双名法 所谓 双名法 就是每一种细菌的拉丁文名称由属名和种名两部分构成 属名第一个字母必须大写 其余均应小写 整个属名及种名在出版物中应排成斜体 如 Escherichiacoli属名 种名Salmonellapullorum S pullorum 属名可缩写如 E coli 大肠杆菌 S pullorum 鸡白痢沙门氏菌 只确定属名 未确定种名的某一株细菌Salmonellasp 只确定属名 未确定种名的若干菌株Salmonellaspp 亚种用subsp 表示Pasteurellamultocidasubsp septica 几种不同的书写情况 第二节细菌的分类方法 生物学特性分类法1 传统分类法2 数值分类法遗传学分类法1 DNA碱基比例的测定 2 核酸分子杂交法 3 rRNA寡核苷酸分析 对细菌的 种 有较为一致的概念 使分类不会出现根本性的变化 可制定可靠的细菌鉴定方案 有利于了解进化和亲缘关系 遗传学分类法的优点 第三节细菌分类命名系统 目前公认的细菌分类体系是 伯吉氏系统细菌学手册 描述了各个属的性状及属内各种的简明比较 国际系统细菌学杂志 IJSB 是细菌分类命名的世界公认的权威期刊 细菌的分类方法主要有两类 人为分类法和系统分类法 系统分类法以细菌的核酸 蛋白质等组成的同源程度进行分类 更具科学性和稳定性 其中16SrRNA寡核苷酸分析 由于其核苷酸数目适中 信息量大 具有高度稳定性 易于提取和分析 成为理想的研究工具 小结 革兰阳性球菌 掌握 病原性球菌的种类 葡萄球菌 链球菌与奈瑟菌的生物学性状 微生物学检验 目的要求 革兰氏阳性球菌 革兰氏阴性球菌 根据革兰染色的结果 病原性球菌 pathogeniccoccus 又称化脓性球菌 pyogeniccoccus 主要包括葡萄球菌 链球菌 肺炎链球菌 脑膜炎球菌 淋球菌等 葡萄球菌 链球菌 四联球菌 八叠球菌等 奈瑟球菌 布兰汉球菌等 病原性球菌的种类 葡萄球菌属 staphylococcus 概述 分布广泛 葡萄球菌在人体上的分布 医务人员鼻咽部带菌率可高达70 或以上 是医院交叉感染的重要传染源 耐药菌株90 以上 由该菌所致的败血症或脓毒血症 仍占居首位 致病性 致病物质 毒素和侵袭性酶 所致疾病 化脓性炎症局部皮肤 疖 痈 毛囊炎 伤口化脓等脏器 心内膜炎 脑膜炎全身 败血症 脓毒血症毒素性疾病食物中毒烫伤样皮肤综合征毒性休克综合征葡萄球菌性肠炎 生物学性状 形态与染色培养特性生化反应分类抵抗力 1 葡萄球菌的形态与染色 镜下形态 形态 球形或略呈椭圆形大小 0 5 1 2 m 平均0 8 m排列 呈葡萄串状染色性 G 初接种时 Thereisnothingonit 2 葡萄球菌的培养特征 营养要求不高 18 24小时后 Icanseesomesmallthings Theyarecalledcolonies 细菌在常见培养基上的生长情况 肉汤培养基 均匀混浊生长 稍有沉淀 普通平板 形成圆形 隆起 表面光滑 湿润 边缘整齐 不透明的菌落 注意颜色 血平板 菌落和溶血情况 3 生化反应 触酶 可与链球菌鉴别葡萄糖 麦芽糖 蔗糖 致病株分解甘露醇 4 分类 1 依据菌落色素 凝固酶 A蛋白等不同性状将葡萄球菌分类 2 根据凝固酶阳性或阴性分类 凝固酶阳性的葡萄球菌致病性强 凝固酶阴性的葡萄球菌致病性弱 3 根据噬菌体分型 5群26型 引起人类疾病的重要菌种有金黄色葡萄球菌 S aureus 表皮葡萄球菌 S epidermidis 头状葡萄球菌 S capitis 人葡萄球菌 S hominis 腐生葡萄球菌 S saprophyticus 其余尚有一些能在人体中分离到溶血葡萄球菌 沃氏葡萄球菌 模仿葡萄球菌 里昂葡萄球菌 施氏葡萄球菌 巴氏葡萄球菌 耳葡萄球菌 孔氏葡萄球菌 木糖葡萄球菌 解糖葡萄球菌 山羊葡萄球菌 普氏葡萄球菌 中间葡萄球菌等 三种常见葡萄球菌的主要性状 性状金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌菌落色素金黄色白色白色或柠檬色凝固酶 分解葡萄糖 分解甘露醇 溶血素 耐热核酸酶 A蛋白 致病性强弱 无无 5 抵抗力 是所有无芽胞菌中抵抗力最强的 对青霉素 红霉素 庆大霉素敏感 近年来由于广泛应用抗生素 耐药菌株逐年增多尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 MRSA 已成为医院感染的重要病原菌 微生物学检验 标本采集 检验程序 检验方法 微生物学检查法 标本 不同病种采取不同标本 化脓病灶 脓液 渗出液疑为败血症 血液脑膜炎 脑脊液食物中毒 剩余食物 呕吐物和粪便 1 标本采集 2 检验程序 3 检验方法 球菌 0 8 m左右大小 葡萄串状排列 革兰氏阳性者可作初步诊断 革兰氏染色后镜检 细菌的形态 排列 染色性 1 直接涂片镜检 2 分离培养和鉴定 标本 鉴定 微生物学检查法 观察 涂片镜检 菌落色素 培养基上的溶血环 生化试验 凝固酶试验等 培养基 平板 菌落 3 鉴定试验 血浆凝固酶试验 甘露醇发酵试验 耐热核酸酶试验 肠毒素的测定 SPA检测 凝固酶 coagulase 是鉴定金黄色葡萄球菌的重要标志 当细菌混悬于人或兔血浆时 纤维蛋白原与菌体表面的相应受体结合 发生交联而使细菌凝聚 1 玻片法 测结合型凝固酶 2 试管法 测游离型凝固酶 37度水浴3 4h后凝固为阳性 24小时不凝固为阴性 4 药物敏感试验 药物选择A组 苯唑西林 头孢西丁 青霉素 阿齐霉素 克林霉素等 组万古霉素 利福平 利奈唑胺等 组环丙沙星 庆大霉素 氯霉素等 组诺氟沙星 呋喃妥因 药物敏感试验 MRS 耐甲氧西林葡萄球菌 筛选 纸片扩散法配制0 5麦氏单位菌液接种于普通M H平板 贴1 g 片苯唑西林药敏纸片 35 24h观察结果 CNS孵育48h 金黄色葡萄球菌抑菌圈 13为敏感 11 12为中介 10为耐药 凝固酶阴性葡萄球菌 18为敏感 17为耐药 48h观察结果 5 检验结果分析与报告 1 对MRS的药敏报告MRS不论体外药敏试验结果如何 耐所有 内酰胺类药物和 内酰胺 内酰胺抑制剂 其次对氨基糖苷类 大环内酯类 四环素类也多数耐药 Streptococcus 链球菌 copyright2002 概述 streptococcus分布广泛 我的鼻咽部就有 形态 球形或略呈椭圆形大小 0 6 1 0 m排列 呈链状排列染色性 G 一 形态与染色 二 培养特征 血平板 形成灰白色 圆形 隆起 表面光滑 半透明或不透明的细小菌落 注意溶血环 生物学性状 营养要求高 需用血平板 血清肉汤培养基 沉淀生长 甲型溶血性链球菌的溶血情况 生物学性状 乙型溶血性链球菌的溶血情况 生物学性状 丙型链球菌无溶血 生物学性状 三 生化反应 链球菌不产生触酶 链球菌不分解菊糖 不被胆汁溶解 可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎球菌 生物学性状 四 分类 1 根据溶血能力分类 甲 乙 丙型溶血性链球菌三类 2 根据抗原结构分类 根据细胞壁C抗原 多糖抗原 不同而分为20个群 A B C D U V 无I J 群 注 血清群与溶血特性没有相关性 对人类致病的主要是A群 传统的分类方法 溶血性链球菌A C G群抗原菌落直径大于0 5mmA群的化脓性链球菌 S pyogenes C群 G群的马链球菌 S equi 和似马链球菌 S equismilis 菌落直径小于0 5mm具A C G群抗原 统称米勒链球菌 S milleri 咽喉炎链球菌 中间型链球菌和星座链球菌还有 溶血和不溶血的细菌B群抗原无乳链球菌 S agalactiae 传统的分类方法 溶血性链球菌包括肺炎链球菌 S pneumoniae 草绿色链球菌群 Viridansstreptococci 不溶血D群链球菌牛链球菌 S bovis 五 抵抗力 不强 对青霉素 红霉素 四环素 磺胺敏感 但目前耐药情况日趋严重 微生物学检验 标本采集 直接涂片镜检 分离培养 检验程序 鉴定方法 检验方法 微生物学检查法 标本 不同病种采取不同标本 化脓病灶 脓液 渗出液疑为败血症 血液鼻咽部 拭子风湿热 血清抗链O检测 标本采集 检验方法 球菌 0 5 1 0 m左右大小 链状排列 革兰氏阳性者可作初步诊断 革兰氏染色后镜检 细菌的形态 排列 染色性 1 直接涂片镜检 2 分离培养和鉴定 标本 鉴定 是否是链球菌 是那种链球菌 微生物学检查法 观察 涂片镜检 菌落色素 培养基上的溶血环 生化试验 培养基 平板 菌落 初步分类 3 鉴定试验 溶血链球菌的鉴定 1 杆菌肽敏感试验 2 Lancefield群特异性抗原鉴定 3 试验 4 试验 5 试验 3 鉴定试验 非 溶血链球菌的鉴定 1 胆汁溶菌试验 2 Optochin敏感试验 3 胆盐七叶苷试验 3 鉴定试验 草绿色链球菌的鉴定草绿色链球菌是人体正常菌群一部分 通常不致病 目前借助于常规方法鉴定到种有一定困难 通常将其鉴定到群 检验程序 药物敏感试验 药物选择A组 红霉素 青霉素 SMZ 克林霉素等B组 头孢吡肟 头孢噻肟 万古霉素等C组 氯霉素 达托霉素 左氧氟沙星等 检验结果分析与报告 溶血链球菌为毒力强的致病菌应及时报告 2 咽部化脓性链球菌易引起并发症 及时报告尽早用药 3 注意其他链球菌的报告 肺炎链球菌 S pneumoniae 概述 一 临床意义 二 生物学性状 三 检验程序 四 药敏试验 五 检验结果的分析与报告 临床意义 以肺部感染为主 多引起大叶性肺炎 若治疗不及时可继发胸膜炎 脓胸 脑膜炎和败血症 生物学性状 形态与染色 G 球菌 矛头状 成双排列 宽端相对 尖端向外 有荚膜 生物学性状 培养特性 营养要求高 兼性厌氧 初次分离需提供5 10 的CO2 18 24h后血平板上形成灰白色 圆形 针尖样的菌落 菌落周围有草绿色溶血环 生物学性状 培养特性 培养48h后 菌落有自溶现象 菌落的中心会出现凹陷 像 肚脐 称脐状凹陷 生物学性状 主要生化反应optochin试验 含5 goptochin纸片贴于涂布有待测菌的平板上35 孵育过夜 抑菌圈大于14mm即为敏感 药敏试验 最后鉴定发出最终报告 初步鉴定菌落特征 菌体形态 直接涂片革兰染色 鉴定试验 检验程序 血平板 营养肉汤增菌 35 5 10 CO2 18 24h 35 18 24h 第一天 第二天 第三天 药物选择 A组青霉素 红霉素 SMZ等B组头孢吡肟 氧氟沙星 美罗培南 万古霉素等C组阿莫西林 头孢呋辛 氯霉素 利福平等 药敏试验 药敏试验 PRSP的筛选耐青霉素的肺炎链球菌 penicillinresistantstreptococouspneumonia PRSP 1 g苯唑西林抑菌圈 20mm或MIC 0 6 g ml为PRSP 检验结果分析与报告 1 PRSP对青霉素类和一 二代头孢菌素具有很强的耐药性 应检测三 四代头孢菌素和碳青酶烯类药物的抗菌活性 2 肺炎链球菌毒力较强 应及时报告给临床 肠球菌属 Enterococcus 肠球菌属归类链球菌科 有19种肠球菌分成5群 临床分离的肠球菌多属于2群 概述 临床意义 肠球菌所致感染最多见于泌尿道感染 是重要的医院感染病原菌多与泌尿道器械操作 留置导尿 尿路结构异常有关腹腔和盆腔创伤时也是常见的感染菌肠球菌引起的菌血症常发生于有严重基础疾患的老年人 长期住院接受抗菌药物治疗的免疫功能低下患者 临床意义 近年来不断上升的肠球菌感染率和广泛使用抗菌药物出现的耐药性有关在临床诊断前应认真评估分离菌的临床意义临床标本中分离的80 90 是粪肠球菌屎肠球菌约占5 10 很少分离到肠球菌属的其它种 形态与染色 形状 单个 成双或短链球菌染色 G 无荚膜 无芽孢 部分有鞭毛 培养特性兼性厌氧菌 最适生长温度35 大多数菌株在10 45 均能生长 在含6 5 NaCl肉汤中能生长 生化反应 在40 胆汁培养基中能分解七叶苷 多数菌种PYR试验阳性 不含细胞色素氧化酶和触酶 但粪肠球菌培养于血培养基中 可生成细胞色素或触酶 可表现为触酶阴性 标本采集 根据感染的部位 采集不同的标本 该属细菌广泛分布在人体皮肤和黏膜 采取时避免病灶周围正常菌群污染 检验程序 微生物检验 检验方法 1 PVR试验 2 胆汁七叶苷试验 3 盐耐受试验肠球菌属种的鉴定依赖于糖的代谢 微生物检验 药物敏感试验 药物选择A组 青霉素 氨苄青霉素B组 万古霉素 达托霉素 利奈唑胺等C组 庆大霉素 链霉素U组 环丙沙星 呋喃妥因 四环素 检验结果分析与报告 肠球菌一般鉴定到种 随着医院感染的增加 流行病学调查越来越重要 革兰氏阳性球菌鉴定流程 肠球菌属 肠球菌属 奈瑟菌属 Neisseria 淋球菌 脑膜炎球菌 干燥奈氏球菌 微黄奈氏球菌 浅黄奈氏球菌 耐瑟菌属 鼻咽部 鼻咽部 泌尿生殖道 淋球菌 N Gonorrhoeae 临床意义 淋病的病原菌主要通过性接触直接感染在分娩时通过产道感染新生儿临床表现为 单纯性淋病盆腔炎口咽部和肛门直肠淋病淋菌性结膜炎播散性淋病致病物质包括菌毛 外膜蛋白 蛋白水解酶 脂多糖和铁调节蛋白 新生儿可由母亲感染得淋菌性结膜炎 生物学性状 形态 呈肾形或豆形排列 成双排列 凹面相对染色性 G 1 形态与染色 体内和新分离的菌株有荚膜和菌毛 培养特性 营养要求高常用巧克力培养基 专性需氧 初次分离时须供给5 10 CO2 最适温度35 36 低于30 或高于38 5 不能生长 菌落 灰色 圆形 凸起 光滑 透明或半透明 似露滴状 直径0 5 1mm 血平板上不溶血 生化反应 氧化酶试验 葡萄糖 抵抗力 很弱 干燥 热 寒冷及阳光等均十分敏感 室温下三个小时死亡 对其他常用消毒剂极度敏感 体外很难存活 对青霉素 链霉素 金霉素 磺胺等均很敏感 微生物学检查法 检验程序 标本采集阴道和宫颈分泌物用无菌塑料棒涤纶拭子 伸入阴道后穹隆或宫颈内1cm处停留10 15秒时间 蘸取采集尿道分泌物弃去前段脓性分泌物 留取后段作为标本尿液直肠肛拭标本废弃第一根污染棉签 用第二根棉签醮取的分泌物新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物 微生物学检查法 标本的直接检查标本采集后应立即涂片 革兰染色 显微镜检查男性尿道分泌物标本中可见中性粒细胞内 外较多革兰阴性双球菌 有助于男性淋病早期诊断 女性宫颈或直肠拭子标本涂片中可见胞内 胞外大量革兰阴性双球菌 由于女性阴道和直肠有许多正常菌群寄居 故对涂片所见结果必须由培养结果得以证实方可报告 新生儿结膜分泌物可见胞内 胞外大量革兰阴性双球菌可初步诊断为淋球菌性结膜炎 微生物学检查法 分离培养与鉴定选择培养基如MTM Martin Lewis ML 等 置于5 CO2气体条件下35 37 孵育每隔24h观察平板培养需观察72h后无菌生长可报告为阴性 微生物学检查法 形态和生化学鉴定 微生物学检查法 可疑菌落直径0 5 1mm 灰褐色 光滑 半透明呈露滴状凸起的菌落确认将菌落涂片 革兰染色见革兰阴性双球菌氧化酶和触酶试验阳性葡萄糖发酵试验阳性 其它糖类阴性 检验结果分析与报告 早期快速诊断诊断报告要慎重 治疗 青霉素类 磺胺类药物等 但应注意耐药问题 脑膜炎球菌meningococcus 流行性脑脊髓膜