甲肝课件

1 甲肝减毒活疫苗保护剂和冻干疫苗研究 浙江普康生物技术股份有限公司浙江省医学科学院病毒病研究所 2 任务来源 九五 国家科技攻关03 01 01项目 3 前言 自1992年国产甲型肝炎减毒活疫苗批准生产并推广使用至今 累计接种达一亿多人 长期大规模的使用证明 该疫苗安全 有效 深受群众和疾病控制人员的欢迎 我国甲肝严重的流行得到有效的控制 年发病率以约20 的速度递减 4 但是 早期的甲肝减毒活疫苗4 8 保存有效期只有3个月 对边远地区 广大农村的推广使用造成一定困难 因此 研制效期长的甲肝减毒活疫苗是十分急需的事 5 1995年8月 卫生部在 95 卫药准字 浙医科院 S 01号批件中就提出 建议今后进行提高制品稳定性的研究 以延长效期 1996年提高甲肝疫苗的稳定性又被列入 九五 国家科技攻关03 01 01项目中 6 从时间上来说 我们从1993年就开始甲肝减毒活疫苗稳定剂的研究 在稳定剂研究获得可喜结果的基础上 开始冻干剂型的研究 7 经过长达八年的研究 我们已成功地制备出 1 4 8 保存有效期5个月的含有 普康四号 稳定剂的甲肝减毒活疫苗 H2株 2 有效期18个月以上的冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 该两项技术已获得国家发明专利 8 第一部份 含有稳定剂的甲肝减毒活疫苗 H2株 研究总结材料 9 1 含有稳定剂的甲肝减毒活疫苗 H2株 研究总结材料 1 1 甲肝减毒活疫苗 H2株 稳定剂筛选的基本原则1 2 甲肝减毒活疫苗 H2株 稳定剂的筛选1 3 普康四号稳定剂1 4 含普康四号稳定剂的甲肝减毒活疫苗 H2株 猴体接种观察1 5 含普康四号稳定剂的甲肝减毒活疫苗 H2株 人体接种观察 10 1 1 甲肝减毒活疫苗 H2株 稳定剂筛选的基本原则 1 对人体绝对安全 疫苗接种时不增加痛感 2 不能含有任何人血组份 如人血白蛋白类物质 3 对疫苗病毒有明显 有效的稳定和保护作用 4 保持或提高疫苗的免疫原性 11 表1 七种保护剂对甲肝减毒活疫苗病毒 H2株 保护效果的比较 12 表1结果表明 组份对甲肝病毒的冷冻保护效果最好 4 组份命名为 普康四号 用于液体苗的 普康四号 称为 普康四号稳定剂 13 普康四号稳定剂 14 1 3 1 普康四号稳定剂基本成份 含有氨基酸的平衡盐溶液中 加入 定浓度的明胶 乳糖 硫酸镁和氯化镁 15 1 3 2 普康四号稳定剂对甲肝病毒的保护作用 加普康四号稳定剂和未加稳定剂的甲肝减毒活疫苗 H2株 在4 8 条件保存 定时随机取样接种KMB17细胞 经培养增殖检测疫苗病毒CCID50 ml 见表2 16 表2 加稳定剂和未加稳定剂甲肝减毒活疫苗 H2株 保存后滴度比较 注 示加稳定剂 示未做 17 表2结果表明 1 加 普康四号稳定剂 的甲肝减毒活疫苗 H2株 4 8 保存27周 疫苗病毒细胞感染性滴度基本不变 2 未加稳定剂的对照组18周时即有一组滴度下降至不合格范围 普康四号稳定剂 对甲肝疫苗病毒的活力有良好的保护作用 18 1 4 含普康四号稳定剂的甲肝减毒活疫苗 H2株 猴体接种观察 40只恒河猴静脉接种8个不同批次的含有普康四号稳定剂的甲肝减毒活疫苗 H2株 分别于接种后0周 4周 8周肝脏穿刺病理切片镜检 8周静脉采血 血清检测ALT和甲肝IgG抗体 见表3 19 表3 含普康四号稳定剂的甲肝减毒活疫苗 H2株 猴体接种 20 表3结果证明 40只恒河猴静脉接种含有普康四号稳定剂的甲肝减毒活疫苗 H2株 接种后0周 4周 8周肝脏穿刺病理切片镜检无任何异常 8周血清检测ALT全部正常 8周甲肝抗体阳转率为95 含普康四号稳定剂的甲肝减毒活疫苗 H2株 是安全的 有效的 21 1 5 含普康四号稳定剂的甲肝减毒活疫苗 H2株 人体接种观察 个体随机安全性观察 群体接种安全性观察 22 1 5 1 个体随机安全性观察 十二名本所身体健康志愿者 上臂皮下接种1 0ml950503含普康四号稳定剂的甲肝减毒活疫苗 三天内密切观察局部反应和全身反应 结果表明 接种后30分钟内各自感觉疼痛程度为轻微 连续观察三天 十二名接种者皮肤局部无红晕 无肿胀 无其他可记录的全身异常反应 见表4 23 表4 含普康四号稳定剂的甲肝减毒活疫苗 H2株 人体接种安全性观察 注 1 局部反应中除红肿热痛外注射苗液不吸收属异常 2 接种疫苗后体温比接种疫苗前升高0 5 为异常 24 1 5 2 群体接种安全性观察 九五 国家科技攻关项目 规范化甲型肝炎减毒活疫苗保护效果和策略的研究 疫苗使用现场 九五课题协作组开展甲肝减毒活疫苗免疫接种任务 河北省 上海市两观察点接种含 普康四号稳定剂 的甲肝减毒活疫苗 H2株 共161131人份 未发现因接种疫苗而发生异常情况的报告 接种人群分组见表5 25 表5 含普康四号稳定剂的甲肝减毒活疫苗 H2株 接种人群分组 26 1 5 3 含普康四号稳定剂甲肝减毒活疫苗 H2株 免疫抗体反应 在 九五 国家科技攻关项目 规范化甲型肝炎减毒活疫苗保护效果和策略的研究 疫苗使用现场 接种含普康四号稳定剂的甲肝减毒活疫苗 H2株 抗体阳转率为94 87 疫苗保护效果为98 1 100 该结果表明 含有普康四号稳定剂的甲肝减毒活疫苗 H2株 安全性和免疫效果均十分良好 27 第二部分 冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 研究总结材料 28 冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 研究总结材料 2 1 冻干用甲肝减毒活疫苗 H2株 病毒2 2 甲肝减毒活疫苗 H2株 冷冻干燥保护剂2 3 冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 残留水分含量测定2 4 冷冻干燥对甲肝疫苗 H2株 病毒细胞感染性滴度影响2 5 冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 4 8 保存稳定性测定2 6 冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 37 保存热稳定性试验2 7 冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 小白鼠安全试验及猴体接种观察2 8 冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 人体接种 29 2 1 冻干用甲肝减毒活疫苗 H2株 病毒 用于制备冷冻干燥甲肝减毒活疫苗 H2株 甲肝病毒 是按照中华人民共和国卫生部新生物制品 95 卫药准字 浙医科院 S 01号制造规程生产的甲肝病毒液 30 2 2 甲肝减毒活疫苗 H2株 冷冻干燥保护剂 甲肝减毒活疫苗 H2株 冷冻干燥保护剂为 普康四号稳定剂 的改良 称为 普康四号保护剂 31 2 3 冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 残留水分含量测定 1 重量法和费休氏法测定方法均按 中国生物制品规程 有关条例进行 2 卡尔费休容量法水分测定仪器为METTLER TOLEDODL 38型 瑞士 自动水分测定仪 测定结果 见表6 32 表6 冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 残留水分含量测定 33 2 4 冷冻干燥对甲肝减毒活疫苗 H2株 疫苗病毒细胞感染性滴度影响 测定冻干前后疫苗病毒的CCID50 ml判断 1 普康四号保护剂对甲肝减毒活疫苗 H2株 病毒活性的保护作用 2 冻干工艺的可重复性 34 表7 甲肝减毒活疫苗 H2株 冻干前CCID50 ml测定 35 表7结果表明 8个不同批号甲肝减毒活疫苗 H2株 经冷冻干燥后疫苗病毒的细胞感染性滴度平均下降为0 19CCID50 ml 随着冻干工艺的改进 冻干前后细胞感染性滴度几乎不变 说明 1 普康四号保护剂 对甲肝减毒活疫苗 H2株 冷冻干燥保护效果十分良好 2 同时也表明 所建立的冻干工艺重复性良好 36 2 5 冻干甲肝减毒活疫苗4 8 保存稳定性测定 四个不同批号的冻干甲肝减毒活疫苗4 8 条件存放 定期随机取样测定疫苗病毒 结果证明 冻干甲肝减毒活疫苗 具有良好的稳定性 在4 8 条件下存放21个月疫苗病毒CCID50 ml不变 见表8 37 表8 四个批号冻干甲肝减毒活疫苗4 8 保存稳定性测定 38 2 6 冻干甲肝减毒活疫苗37 保存热稳定性试验 5个不同批号的冻干甲肝减毒活疫苗 放置37 恒温箱7天 4 冰箱存放苗作为原始滴度对照苗 检测甲肝病毒细胞感染性滴度 见表9 39 表9 冻干甲肝减毒活疫苗37 保存稳定性测定 结果表明 冷冻干燥甲肝减毒活疫苗37 放置7天 细胞感染性滴度平均下降为0 38CCID50 ml 国家标准 1 0CCID50 ml 40 2 7 冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 小白鼠安全试验及猴体接种观察 1 小白鼠安全试验按 中国生物制品规程 进行冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 批号96A1 96A2 96A3 97A1 98A1 990203 990204 990205共8个 每个批号疫苗用小白鼠5只 每只腹腔注射0 5ml 冻干苗临用前用1 0ml灭菌注射用水稀释 注射后30分钟内无不良反应 连续观察七天 体重未减 全部健存 41 2 猴体接种 体重2 1 3 0kg健康恒河猴10只 分二组 每组五只 分别静脉接种4 8 冰箱存放11个月和17个月的冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 批号为96A2 除常规观察恒河猴接种反应 并于接种后2 3 4 6 8周静脉血检测ALT 8周检测甲肝IgG抗体 见表10 42 表10 冻干甲肝活疫苗 H2株 猴体接种安全性观察 结果表明 含普康四号保护剂的冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 是安全的 有效的 43 2 8 冻干甲型肝炎减毒活疫苗 H2株 人体接种 44 2 8 1 接种对象 1 个体随机组203人 其中本所职工10人 以及一般体检正常 甲肝抗体 HAV IgG 阴性 血清ALT值正常的5 11岁儿童193人 2 整体随机组 共8000多人 45 2 8 2 接种方法 临用前用1 0ml灭菌注射用水溶解 上臂皮下一次注射 46 2 8 3 人体接种反应观察 1 个体随机组 注射疫苗后72小时内观察并记录疫苗接种反应 包括局部有红 肿 热 痛及其他主诉症状 每日测体温 注 1 体温比接种前升高不超过0 5 或比接种前有升高但低于37 5 称为弱反应 2 疫苗接种24小时后皮下疫苗液不吸收 或出现红 肿 热 痛为异常局部反应 免后定期采取静脉血 检测血清ALT以及甲肝总抗体 见表11和表12 2 整体随机组 根据卫生防疫部门异常接种反应报告为零 47 注 表11结果表明 含有普康四号保护剂的冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 不引起人体接种部位局部反应和其他不良的全身反应 表11 个体随机冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 人体接种反应观察 1 24 无 24 48 表12 个体随机冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 人体接种反应观察 2 表结果表明 含有普康四号保护剂的冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 免后二个月血清ALT无异常 抗体反应良好 49 表13 冻干甲肝减毒活疫苗 H2株 一针程序免后抗体水平测定 注 1 示数据引自中检所对批号G990225冻干苗 H2株 临床研究报告 2 示数据由中检所测定 3 计算平均抗体水平mIU ml时 去除 10000mIU ml数据 50 表13数据表明 1 冻干苗一针免疫程序 免后二个月抗体反应达到高峰值 免后13个月该高峰值仍然保持不变 2 与液体剂型苗对照组相比 冻干剂型苗抗体滴度高于液体剂型苗数倍 51 本研究已获得成果 52 一 1999年1月 国家药品监督管理局批准 甲肝减毒活疫苗4 8 保存有效期延长为五个月 53 二 2000年12月 冻干甲型肝炎减毒活疫苗 获国家药品监督管理局颁发的国药证字 2000 S 52号新药证书 54 三 2000年12月 冻干甲型肝炎减毒活疫苗 获国家药品监督管理局颁发的批准文号为国药准字S20000063生产批件 55 四 2001年10月 含有稳定剂的甲型肝炎减毒活疫苗及制备方法 获国家发明专利专利号 ZL98123772 X 56 五 2001年10月 冷冻干燥甲型肝炎减毒活疫苗及制备方法 获国家发