检测技术与应用河南省红十字血液中心

河南省红十字血液中心张伯伟2012年8月烟台 血型HLA概念检测方法HLA的应用HLA与临床输血 血型 血液中各种成分的遗传 表现 多态性标志血液成分 红细胞 白细胞 血小板 血清蛋白遗传多态性表现 细胞表面 血浆中的各种特异性蛋白多态性的遗传基础 基因 染色体上的核酸序列 输血治疗的需要促使 血型 发现15世纪后期开始输血1900年Landsteiner发现人类红细胞ABO血型1927年发现MN血型系统1940年发现Rh血型HLA1958年法国J 多赛发现 免疫血液学方法 抗原 抗体检测方法凝集实验 试管法 凝胶柱法 固相吸附 流式技术细胞生物学检测方法 混合淋巴细胞培养分子生物学检测方法 血型基因检测SSP SSO SBT 人类白细胞抗原 白细胞表面的一种糖蛋白 有非常复杂的生物学功能 非常复杂的多态性广范存在于除白细胞表面的其他组织 体液中 与组织相容性有关 又称为组织相容性抗原 HLA I类分子 HLA II类分子 参与内外抗原肽的处理 呈递 自我识别的信号某些病毒 细菌进入细胞的受体与某些疾病的发病有关 如 B27与强直性脊柱炎 AS 二 HLA复合体的遗传特征1 单元型遗传2 多态性现象 1 复等位基因 2 共显性表达3 连锁不平衡 HLA 类分子的分布1 存在于有核细胞 含血小板和网织红细胞 表面 淋巴细胞 肾 肝脏 心脏 神经组织 成熟的滋养细胞2 存在形式 1 膜结合 有核细胞表面 2 可溶性 存在于血清 初乳和尿液等体液中 HLA 类分子的分布1 APCB细胞 单核 巨噬细胞和树突状细胞 2 其他激活的T细胞 精子和血管内皮细胞 HLA分型法原理及应用 TERASAKI发明的微量淋巴细胞毒实验 当特异性抗体与HLA抗原结合 激活补体 使淋巴细胞溶解 显微镜下可见到被活性染料着色的淋巴细胞用于HLA I类抗原分型 基于PCR技术的分型方法PCR SSP方法操作简单 灵活适合少量样本临床病例分型检测通量较小 PCR SSO 序列特异性寡核苷酸探针 杂交条方法基因芯片方法流式荧光微珠 芯片的工作原理 HLA分型方法比较项目PCR SSPPCR SSO杂交条PCR SSO微珠法PCR SSO芯片法DNA测序方法技术要求低低较高高高分辨率中低中低中高中高高检测通量低一般较高高较高使用设备少少较多多较多环境污染EB致癌轻微轻微轻微轻操作步骤简单简单较复杂复杂较复杂检测成本低低较高高较高适用范围临床或小批量临床 较大批量中 大批量大批量临床 各种批量应用情况国内临床国内临床骨髓库国家芯片中心国外常规采用 高准确性 血清学 分子生物学高通量 SSP 基因芯片 流式高分辨 低分辨 中分辨 高分辨氨基酸残基配型 血型学 基因 AA残基 表位 免疫应答 T细胞分化器官移植与疾病关联肿瘤关联法医 个体识别 人类学研究 骨髓移植 造血干细胞移植 肾移植血小板输注其他血液成分输血 恶性肿瘤细胞HLA 类分子表达减少或缺乏 肿瘤细胞逃逸免疫监视 IFN 促进肿瘤细胞HLA 类分子表达增强CD8 CTL细胞的特异性杀伤 HLA可以作为亲子鉴定的一个指标刑侦研究种族人群的迁徙 溶血性输血反