开题报告（石斛与端粒）ppt课件

端粒长度及端粒酶活性与石斛年龄关系的研究 报告人 吴劲松指导老师 丁小余教授 2012 12 26 一 论文选题的理由或意义 三 研究目标 研究内容和拟解决的关键问题 四 拟采取的研究方法 研究手段 技术路线 实验方案及可行性分析 主要内容 主要内容 年度研究计划 可能遇到的困难和问题及相应的解决办法 有关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩 已具备的研究条件 尚缺少的研究条件和拟解决的途径 一 论文选题的理由或意义 石斛 兰科植物之一 主要分布于亚洲热带和亚热带 对生长条件要求极其苛刻 分布在崇岭 悬崖峭壁之上 自然繁殖率极低 千百年来 铁皮枫斗一直作为 九大仙草 之首 和灵芝 人参 冬虫夏草等一并被列为上品中药 另外 其花也可作观赏之用 端粒系统 端粒是真核细胞线性染色体末端的一组重复DNA序列 通常由富含鸟嘌呤核苷酸 G 的短的串联重复序列组成 功能 1 维持染色体的稳定性2 起细胞分裂计时器的作用 端粒酶是一种RNA与蛋白的复合体 它以自身RNA上的一个片段为模板通过逆转录合成端粒重复序列 并通过一种RNA依赖性聚合酶 如逆转录酶 机制加到染色体3 末端以延伸端粒 三 研究目标 研究内容和拟解决的关键问题 研究目标 通过测定石斛属的不同种端粒长度和端粒酶活性来解决有关石斛年龄的问题 三 研究目标 研究内容和拟解决的关键问题 研究内容 一 如何快速建立组织培养快繁体系获得石斛原球茎 幼苗等材料 二 测定三种石斛的端粒酶活性及石斛端粒酶最佳反应体系的构建 三 测定三种石斛的端粒长度 四 建立石斛属的年龄与端粒长度 端粒酶活性的数学模型 分析其关系 三 研究目标 研究内容和拟解决的关键问题 拟解决的关键问题 1 应用TRAP法检测石斛属端粒酶活性 2 应用Southern杂交技术检测出石斛属端粒长度 四 拟采取的研究方法 研究手段 技术路线 实验方案及可行性分析 一 研究方法 实验方案 1 利用梯度分析建立有效的组织培养快繁体系 分别从基本培养基种类 光照周期 温度 光照强度等因素对组织培养体系进行优化 构建快速繁殖石斛的方法 2 利用CHAPS裂解液提取石斛的端粒酶并用改进TRAP法进行其活性检测 3 利用Southern杂交技术测量 分析石斛的端粒长度 4 根据不同年龄的石斛端粒酶活性和端粒长度建立起石斛属的年龄与端粒长度 端粒酶活性的数学模型 TRAP 端粒重复序列扩增法 法检测端粒酶活性 TRAP法是采用PCR技术放大端粒延伸产物这一原理而建立的方法 利用CHAPS裂解液从样品中提取端粒酶蛋白 前导引物TS在端粒酶自身逆转录酶的催化下合成端粒末端重复序列 然后将端粒酶灭活 在加入反向引物CX和Taq酶将反应产物进行PCR扩增 反应体系经过非变性聚丙稀酰胺电泳和显影检测 获得间隔6bp的梯状条带 技术路线图 石斛端粒长度检测 石斛端粒酶活性检测 1 试验材料俱全 2 试验器材和试验技术在本实验室已熟练掌握 Southern杂交现有文献指导 3 本人已联系到国内相关领域研究的知名教授 可行性分析 四 拟采取的研究方法 研究手段 技术路线 实验方案及可行性分析 五 本题目的创新之处和可预期的创造性成果 创新之处 运用与端粒有关的技术首次对石斛年龄进行探讨 首次运用石斛的端粒酶活性和端粒长度建立起石斛年龄预测的数学模型 可预期的创造性成果 以论文发表为主要成果形式 1 石斛的端粒酶分离及活性测定探究 论文1篇 2 端粒长度和端粒酶活性与石斛年龄关系的研究 论文1 2篇 六 年度研究计划 可能遇到的困难和问题及相应的解决办法 2011 09 2012 12 对有关石斛进行大量的组织培养及相关影响因素的探究 熟练掌握与实验有关的分子技术 2012 12 2012 09 提取不同年龄段石斛端粒酶活性和端粒长度 进行比较研究2013 09 2014 03 查阅资料 整理论文 六 可能遇到的困难和问题及相应的解决办法 由于本实验室没有进行过相关端粒 酶 研究 加之前人的可参考文献不多 所以 在遇到实验上的问题很难找到解答 本人拟想从以下几方面解决 一 多看相关文献二 多联系国内外相关导师或有相关研究经验的硕士生 针对端粒重复序列设计的引物和探针可能会要求不同的实验体系 需要进一步的摸索实验条件 尽可能的提高实验效率 七 与本题目有关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩 1 组织培养出大量铁皮石斛 细茎石斛等实验材料 各年龄段石斛材料已获得 2 已详细了解端粒酶提取和端粒长度测定的方法以及相应流程 3 已着手进行石斛属植物的端粒酶的提取及活性检测的实验 八 已具备的研究条件 尚缺少的研究条件和拟解决的途径 已具备植物总DNA提取 模板浓度检测