玉容消痤颗粒12.doc

资料12. 玉容消痤颗粒制备工艺及其研究资料1. 处方丹参300g 葛根300g 白花蛇舌草300g 当归200g 蒲公英200 g 连翘150 g 桑白皮150g 枇杷叶150 g 浙贝母100g 制成1000g颗粒 2. 制法以上九味，丹参加7倍量90%乙醇回流1.5小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，备用。药渣加8倍量水煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至适量，真空干燥，粉碎。其余葛根等八味以8倍量水煎煮3次，每次1小时。水煎液浓缩至相对密度为1.08-1.12 (80)，加乙醇至含醇量为60%，静置12小时，吸取上清液，减压回收乙醇并浓缩至稠膏，真空干燥，粉碎，加入上述丹参醇提的稠膏及水提的细粉，加入糊精及蔗糖粉适量，混匀，以75%乙醇制粒，颗粒于60干燥，分装，即得。3工艺流程图：见下图。丹参葛根、白花蛇舌草、当归、蒲公英、连翘、桑白皮、枇杷叶、浙贝母8倍量水提取，提取3次，每次1小时，滤过，滤液浓缩滤液浓缩液合并，加入糊精、蔗糖粉，混匀，乙醇制粒，干燥，分装成品上清液7倍量90乙醇回流提取1.5小时，滤过加乙醇至含醇量为60%，静置12小时，吸取上清液药渣8倍量水提取1小时，滤过，滤液浓缩减压回收乙醇并浓缩至稠膏浸膏浸膏干膏粉浓缩，真空干燥，粉碎干膏粉图1 玉容消痤颗粒制备工艺流程图4. 研究资料：4.1玉容消痤颗粒的剂型选择与基本提取路线的拟定4.1.1剂型选择玉容消痤颗粒是基于海军总医院科研方“泻肺解毒平痤汤”的新药开发，原方出膏率较高，服用剂量较大，难以制成合适的胶囊剂和片剂。颗粒剂服用剂量比胶囊剂、片剂等大大增加，它既保持了汤剂吸收快、显效迅速等特点，又克服了汤剂服用前临时煎煮，久置易霉变的特点，并可掩盖中药的苦味。方中中药经过提取精制，体积缩小，运输、携带、服用方便，利于患者接受。因此，颗粒剂可作为本品之首选剂型。4.1.2 基本提取路线的拟定： 根据处方确定的功能主治以及处方中各单味药的主要化学成分及药理研究资料，对本品中各药物提取工艺进行设计。(1) 药材品种来源 丹参：本品来源于唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎。本品应符合中国药典2005年版一部第52页丹参项下各项规定。葛根：本品来源于豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd.）Ohwi的干燥根。本品应符合中国药典2005年版一部第234页葛根项下各项规定。白花蛇舌草：本品来源于茜草科植物白花蛇舌草Oldenlandia diffusa（willd.）Roxh的干燥全草。当归：本品来源于伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv,)Diels的干燥根。本品应符合中国药典2005年版一部第89页当归项下各项规定。蒲公英：本品来源于菊科植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.、碱地蒲公英Taraxacum sinicum Kitag.或同属数种植物的干燥全草。本品应符合中国药典2005年版一部第244页蒲公英项下各项规定。连翘：本品来源于木犀科植物连翘Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl.的干燥果实。（以成熟果实入药，即老翘）。本品应符合中国药典2005年版一部第118页连翘项下各项规定。桑白皮：本品来源于桑科植物桑Morus alba L.的干燥根皮。本品应符合中国药典2005年版一部第209页桑白皮项下各项规定。枇杷叶：本品来源于蔷薇科植物枇杷Eriobotrya japonica (Thunb.) Lindl.的干燥叶。本品应符合中国药典2005年版一部第142页枇杷叶项下各项规定。浙贝母：本品来源于百合科植物浙贝母Fritillaria thunbergii Miq.的干燥鳞茎。本品应符合中国药典2005年版一部第205页浙贝母项下各项规定。(2) 药材主要化学成分及理化性质：丹参：含多种脂溶性菲醌类成分，如丹参酮(tanshinone)、丹参酮A (tanshinoneA) 、丹参酮B(tanshinoneB) 、隐丹参酮(cryptotanshinone)、紫丹参甲素、乙素(przewatanshinquinoneA、B)、丹参新酮(miltirone)、二氢丹参酮(dihydrotanshinone)、丹参醇、(tanshinolA、B、C)等；此外，含有丹参素(3,4-二羟基苯基)乳酸、丹参酸甲、乙、丙(danshensuanA、B、C)、原儿茶酸(protocatechuic acid)、原儿茶醛(protocatechuic aldehyde)等水溶性成分。鉴于丹参中主要有效成分既有脂溶性成分又有水溶性成分，参考中国药典2005年版丹参片项下制剂工艺，拟用乙醇提取，然后药渣再用水提取，主要考察丹参酮A和出膏率的变化。 葛根：主要含黄酮类化合物，如大豆苷(daidzin)、大豆黄素(daidzein)、葛根黄苷(xylopuerarin)、葛根素(puerarin)等，其他成分有尿囊素(allantoin)、-谷甾醇(-sitosterol)、胡萝卜苷(daucosterol)、6，7-二甲氧基香豆素(6,7-dimethoxy coumarin)、1-廿四烷酸甘油脂(glycerol 1-monotetracosanoate)、腺嘌呤(adenine)、氨基酸及多量淀粉等。拟采取水煎煮方法提取。考虑到水煎液得膏率高，再用醇沉淀法精制，富集水煎液中黄酮类等成分。白花蛇舌草：全草含乌索酸(ursolic acid)、齐墩果酸(oleanolic acid)、对香豆酸、豆甾醇、-谷甾醇(-sitosterol)、土当归酸及三十一烷。可以采用水提醇沉法提取精制。当归：根中含有挥发油，以正丁烯酜内酯(n-butyl-phthalide)、蒿本内酯(ligustilide)为主，另含邻羧基苯正戊酮(n-valerophenone-o-carboxylic acid)，还含有阿魏酸(ferulic acid)、丁二酸(succinic)、棕榈酸(palmiitic acid)、烟酸(nicotinic acid)、尿嘧啶(uracil)、腺嘌呤(adenine)、蔗糖(sucrose)、维生素A、B12、E(vitamineA、B12、E)等。此外，还含有17种氨基酸和23种金属元素。参考中国药典2005年版一部七宝美髯丹和加味生化颗粒的提取工艺，拟采取水煎煮方法提取，考虑到水煎液得膏率高，再用醇沉淀法精制，富集水煎液中化学成分。蒲公英：根含多种三萜醇为蒲公英甾醇(taraxasterol)、蒲公英赛醇(ta raxerol)、蒲公英苦素(taraxacin)及咖啡酸。全草含肌醇、天冬酰胺、苦味质、皂苷、树脂、菊糖，此外尚含果胶、胆碱等。花含叶黄呋喃素(即毛茛黄素flavoxanthin)、维生素B2。可以采用水提醇沉法提取精制。连翘：种子中含挥发油。果实还含连翘酯苷（forsythoside）、连翘酚（forsythol）、连翘苷（phillyrin）、齐墩果酸（oleanolic acid）、白桦脂酸（betulinic acid）、熊果酸（ursolic acid）、连翘醇酯（rengy-olester）等。参考中国药典2005年版一部小儿肺热咳喘口服液、银翘解毒片、感冒退热颗粒、和清热解毒口服液等的提取工艺，拟采取水煎煮方法提取，考虑到水煎液得膏率高，再用醇沉淀法精制，富集水煎液中水溶性成分。桑白皮：含桦木酸(betulinic acid)及四种新的黄酮类衍生物：末尔贝林(mulberrin)、末尔贝洛色烯(mulberrochromene)、环末尔贝洛色烯(cyclomulberrochromene)及环末尔贝林(cyclomulberrin)。此外，尚含-及-香树精、挥发油、软脂酸、谷甾醇、葡萄糖、果胶、多缩戊糖、十一葵烯醇(undecaprenol)及十二葵烯醇(dodecaprenol)。可以采用水提醇沉法提取精制。枇杷叶：叶含皂苷、苦杏仁苷(amygdalin)、乌索酸(ursolic acid)、齐墩果酸(oleanolic acid)、丁香素(caryophyllin)、枸橼酸盐、鞣质、维生素B1、维生素C等。种仁含苦杏仁苷及脂肪油，此外尚含有蜡类物质：蜡醇(ceryl alcohol)、蜡基棕榈酸盐(ceryl palmitate)，尚含有4-亚甲基脯氨酸(4-methylene pyroline)。拟采取水煎煮方法提取。考虑到水煎液得膏率高，再用醇沉淀法精制，富集水煎液中水溶性成分。可以采用水提醇沉法提取精制。浙贝母：鳞茎含贝母辛(贝母甲素，浙贝碱peimine)，贝母乙素(peiminine)F3、F4、F5，浙贝宁(zhebeinine)，浙贝丙素(zhebeirine)，浙贝酮。另含四种微量生物碱：贝米新(peimisine)、贝米酚(peimiphine)、贝米定(peomidine)、贝米替定peimitidine。还含有原贝母素(propeimin)、浙贝碱葡萄糖苷(peiminoside)。此外，新鲜鳞茎中尚含对映-贝壳杉烷-16-17二醇(entkauran-16-17diol)、-谷甾醇(-sitosterol)、胡萝卜素及大量淀粉。参考中国药典2005年版一部宝咳宁颗粒和利咽解毒颗粒，拟采取水煎煮方法提取，考虑到水煎液得膏率高，再用醇沉淀法精制，富集水煎液中化学成分。(3) 基本提取路线的初拟 根据上述各药材所含化学成分或药材本身所具有的特性，决定将处方中的9味药材分成2组，丹参分乙醇提取和水煮两步处理，其余八位进行水煮醇沉处理。丹参：先用乙醇提取，再经水煮，主要考察丹参酮A含量和出膏率的变化。葛根、白花蛇舌草、当归、蒲公英、连翘、桑白皮、枇杷叶、浙贝母：文献报道，当归、连翘含挥发油，我们采用水蒸气蒸馏收集挥发油，1kg药材仅得挥发油0.5ml，由于采集季节、贮存等原因，含量太低，挥发油故未收集。拟选用水煮醇沉工艺，主要考察葛根中葛根素含量和出膏率的变化。(4) 基本提取路线的预试与确定： 考察服用剂量、成型工艺，初步工艺方案如下：丹参以90%乙醇提取，滤过，浓缩至稠膏。药渣再经水提取，滤过，浓缩干燥粉碎。葛根等其余八味药以水煎煮3次，水煎液经乙醇沉淀，取上清液浓缩干燥粉碎，合并上述干膏细粉加入一定辅料，混匀，制粒，考察颗粒的流动性，吸湿性。预试说明，按上述工艺路线提取，玉容消痤颗粒成型性较好，服用剂量每天约6 0 g（相当于原生药111g）。因此，从成型工艺看，上述玉容消痤颗粒各药味的基本提取工艺路线是合理可行的。4.2 各药物的提取纯化工艺条件考察4.2.1丹参提取工艺参照中国药典2005年版丹参片项下制剂工艺，丹参以90%乙醇提取1.5小时，滤过，浓缩至稠膏。药渣再用水提取1小时，滤过，滤液浓缩干燥。本实验考察了最佳溶媒用量，并进行三批验证试验，结果如下。(1) 乙醇用量考察： 取丹参粗粉500g，共3份，分别以5倍量、7倍量和9倍量的90%乙醇回流提取1.5小时，滤过，滤液回收乙醇，60真空干燥。表1 丹参乙醇提取用量的考察溶媒用量（相当于药材重量的倍数）5倍量7倍量9倍量醇浸膏得率(%)丹参酮A含量(mg/g生药) 10.421.31012.871.95313.161.929由表可见，以7倍量乙醇提取较好。（2）水溶媒用量的考察取丹参粗粉500g，共3份，分别以7倍量的90%乙醇回流提取1.5小时，滤过，药渣3份分别以6倍量、8倍量和10倍量水提取1小时，滤过，滤液浓缩干燥。表2 丹参水提取用量的考察溶媒用量（相当于药材重量的倍数）6倍量8倍量10倍量浸膏得率(%)23.7427.4628.10由表可见，以8倍量水提取较好。（3）制备工艺条件验证试验取丹参粗粉500g，共3份，分别以7倍量的90%乙醇回流提取1.5小时，回收乙醇，浓缩至稠膏。药渣以8倍量水煎煮1小时，滤过，滤液浓缩干燥。分别计算出膏率，同时，合并浸膏，测定丹参酮A含量并计算转移率。表3 丹参提取工艺条件的验证试验结果试 验 号123醇提浸膏得率(%)13.2413.1612.66水提浸膏得率(%)27.1228.7527.68丹参酮A含量(mg/g生药）1.6181.6671.587丹参酮A转移率（%）64.6866.6663.47验证结果表明，上述丹参提取工艺稳定、可行。4.2.2葛根等八味药水煮醇沉工艺考察4.2.2.1 葛根等八味药煎煮条件考察 本试验采用正交设计筛选葛根等八味药水煎醇沉最佳工艺，以葛根素为对照品，分别测定葛根药材中葛根素的含量，并以此作为葛根等八味药水煎煮和醇沉淀的主要考察指标，同时也参考浸膏得率的变化。因素水平设计见下表。（1）水煎煮条件的正交试验：表4 葛根等八味药水煎煮因素水平表 因 素水平A加水量（倍数）B煎煮时间（小时）C煎煮次数（次）18112102231233称取葛根等八味药共155g，共9份，按下表条件安排实验。煎煮后，浓缩、真空干燥，分别测定葛根素（mg/g生药）和浸膏得率。测定方法见中国药典2005版（一部）葛根项下含量测定。结果见下表。表5 葛根等八味药水煎煮正交设计及实验结果实验号因 素 水 平实 验 结 果ABC 葛根素含量(mg/g生药)浸膏得率（%）111114.0914.44212222.5817.25 313326.0823.33 421222.9616.02522325.6127.74 623113.7616.38731328.0823.12 832116.4417.29 933225.4119.99 葛根素含量K120.91721.71014.763K220.77721.54323.650K323.31021.75026.590R2.5330.20711.827浸得膏率K118.34017.86016.037K220.04720.76017.753K320.13319.90024.730R1.7932.9008.693表6 葛根素含量的方差分析方差来源偏差平方和自由度F比P*A12.16521.969P0.05B0.07220.012P0.05C227.486236.816P0.05 B13.3112 1.998P0.05C127.195 2 19.090P0.05误差6.66 2 方差分析结果表明，提取次数影响最大（P0.05）。根据正交试验结果并结合实际生产，提取工艺拟定为：葛根等八味药材以8倍量水煎煮3次，每次1小时。4.2.2.2 水煎液的醇沉条件的考察（1）乙醇沉淀条件的正交试验： 按L4（23）正交表设计水煎液醇沉淀试验。表8 葛根等八味药水煎液醇沉因素水平表 因素水平A B（药液含醇量） （药液相对密度） 1 60% 1.08-1.12（800C） 2 70% 1.18-1.22（800C）表9 水煎液醇沉正交设计与试验结果试验号试 验 因 素葛根素含量出膏率A B（mg/g生药）（%）11117.22912.62 21215.55310.2332114.12316.01 42218.2756.35 葛根素含量K116.39115.676 K216.19916.914 R0.1921.238得膏率K111.42514.315K211.1808.290R0.2456.025 表10 葛根素含量的方差分析方差来源偏差平方和自由度F值P*A0.0371 1.000P0.05B1.5331 41.432P0.05B36.3011 2.747P0.05误差13.21 1 方差分析结果表明，浸膏密度对葛根素含量影响最大（P0.05）。根据正交试验结果并结合实际生产，醇沉工艺拟定为：水煎液浓缩至相对密度为1.08-1.12 (80)，加乙醇至含醇量为60%，静置12小时，吸取上清液，减压回收乙醇并浓缩至稠膏。（2）水煮醇沉工艺的验证试验： 取葛根等八味药387.5g，按上述最佳工艺进行验证试验。结果表明，水煮醇沉工艺稳定、可行。表12 葛根等八味药水煮醇沉最佳工艺条件的验证试验试 验 号123浸膏得率(%)16.3817.9116.56葛根素含量（mg/g生药）20.0620.6920.11葛根素转移率（%）60.4962.4060.635. 成型工艺研究5.1 辅料的选择浸膏粉颗粒流动性较差，且有较强的吸湿性，口感不好。在研究中，选择常见的颗粒剂辅料糊精、蔗糖粉，分别以不同比例考察辅料用量，改善颗粒的流动性、吸湿性和口感。同时对颗粒的堆密度、休止角进行考察，以保证成品质量的一致性及稳定性。5.1.1辅料用量选择首先，将蔗糖粉的用量固定（浸膏:蔗糖粉（1:1），以吸湿性为指标，来确定糊精加入量。然后，将糊精用量固定（浸膏:糊精（1:1），以口感为指标，来确定蔗糖粉加入量。结果如下：表13 辅料用量选择辅料种类加入比例（浸膏:辅料）结果糊精蔗糖粉1:0.5 有一定的吸湿性1:1 抗湿性较好 1:1.5 抗湿性较好1:0.5 口感一般，略苦1:11:2 口感较好 很甜，口感较好综合考虑，以浸膏:糊精:蔗糖粉（1:1:1)，充分混匀，颗粒抗湿性及口感均较好。5. 2 填充物料堆密度、休止角测定为保证成品质量的一致性及稳定性，在制备过程中，须对半成品进行质控，为此测定了颗粒的休止角、堆密度。堆密度 称取3g颗粒，装入10ml量筒中，以一定高度落下5次（尽可能控制条件一致），使松紧适宜，以重量及容积计算其堆密度。休止角 取2只漏斗串联，最底端距水平放置坐标纸2.5cm处，称取30g颗粒，小心地将颗粒分别沿漏斗壁倒入最上的漏斗中，直到最下面漏斗形成的药粉圆锥体尖端接触到漏斗下口为止，由坐标纸测出圆锥底部的直径，计算出休止角（tg=H/R）。结果如