上海交大网络课程检验微生物讲义17(1).doc

检验专业必修课考试辅导丛书临床微生物学检验第25章 疱疹病毒一、教学大纲要求（1）疱疹病毒的种类和共同特点。单纯疱疹病毒的致病性和检测方法。（2）水痘-带状疱疹病毒的致病性。（3）巨细胞病毒的病毒特性、致病性和检测方法。（4）EB病毒的致病性和检测方法。（5）人疱疹病毒6型、7型和8型的致病性。二、教材内容精要疱疹病毒科是一组中等大小、有包膜的DNA病毒。分为、三个亚科：亚科疱疹病毒主要包括单纯疱疹病毒属的单纯疱疹病毒1型、单纯疱疹病毒2型和水痘-带状疱疹病毒；亚科疱疹病毒主要包括巨细胞病毒、人疱疹病毒6型和人疱疹病毒7型；亚科疱疹病毒主要包括淋巴滤泡病毒属的EB病毒和细长病毒属的人疱疹病毒8型。疱疹病毒具有以下共同特点：1）形态特点。病毒体呈球形，核衣壳是由162个壳粒组成的二十面体立体对称结构，核衣壳周围有一层厚薄不等的非对称性披膜，最外层是包膜、有糖蛋白刺突，基因组为线性双链DNA；2）培养特点。人疱疹病毒（EB病毒除外）均能在二倍体细胞核内复制，产生明显的CPE，核内出现嗜酸性包涵体，感染细胞同邻近未感染的细胞融合成多核巨细胞；3）感染特点。病毒可表现为增殖性感染和潜伏性感染，部分病毒还具有整合感染作用、与细胞转化和肿瘤的发生相关。 （一）单纯疱疹病毒1单纯疱疹病毒（herpes simplex virus，HSV）直径为120150nm，由核心、衣壳、被膜及包膜组成。包膜表面含gB、gC、gD、gE、gG、gH糖蛋白，参与病毒对细胞吸附/穿入（gB 、gC 、gD、gE）、控制病毒从细胞核膜出芽释放（gH）及诱导细胞融合（gB 、gC、 gD、 gH），并有诱生中和抗体(gD 最强)和细胞毒作用（HSV糖蛋白均可）。包含HSV-1和HSV-2二个血清型。2人类是HSV的惟一宿主，主要通过直接密切接触和性接触传播。HSV的致病性包括：1）原发感染。HSV-1 原发感染多发生在婴幼儿或儿童，常为隐性感染；感染部位主要在口咽部，还可引起唇疱疹、湿疹样疱疹、疱疹性角膜炎、疱疹性脑炎等疾病；原发感染后HSV-1常在三叉神经节内终身潜伏，可被激活而引起复发性唇疱疹。HSV-2原发感染多发生在青少年以后，主要引起生殖器疱疹；原发感染后HSV-2在骶神经节或脊髓中潜伏，可被激活而引起复发性生殖器疱疹。2）潜伏感染和复发。HSV原发感染后部分病毒在神经细胞内潜伏并持续存在，当机体受到某些非特异因素刺激时潜伏的病毒即被激活而增殖，沿神经纤维索下行至感觉神经末梢，到达附近表皮细胞内继续增殖，引起复发性局部疱疹。3）先天性感染。HSV-2通过胎盘感染，易导致流产、胎儿畸形和智力低下等；新生儿疱疹是在母体分娩时接触HSV-2感染的产道所致或者出生后获得HSV感染，患儿病死亡率高达50%。4）HSV-2还与子宫颈癌关系密切。3HSV感染的检测。病变处组织细胞涂片后Wright-Giemsa染色镜检，如发现核内包涵体及多核巨细胞可考虑HSV感染；用特异性抗体可检测病毒抗原；病毒分离培养是确诊HSV感染的“金”标准，HSV引起的CPE常在23d后出现，细胞出现肿胀、变圆、折光性增强和形成融合细胞等病变特征。（二）水痘-带状疱疹病毒1水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus, VZV）的生物学性状类似于HSV，只有一个血清型。2水痘-带状疱疹病毒在儿童初次感染后引起水痘，而潜伏体内的病毒复发后引起带状疱疹。水痘是VZV的一种原发性感染，传染性强，病毒经呼吸道或接触传播；潜伏期1415d，皮疹首先出现在躯干、然后离心性播散到头部和四肢，表现为红色斑疹、丘疹、水疱及结痂。病情一般较轻，但在免疫功能不足或无免疫力的儿童中可表现严重、甚至危及生命。儿童时期患过水痘，病毒可潜伏在脊髓后根神经节或者颅神经的感觉神经节等部位，当机体受到某些刺激或免疫功能低下时，活化的病毒经感觉神经纤维轴索下行至皮肤，在其支配皮区繁殖而引起带状疱疹；一般在躯干、呈单侧性、水疱集中在单一感觉神经支配区成带状。(三) 巨细胞病毒1巨细胞病毒（cytomegalovirus, CMV）具有典型的疱疹病毒形态，对宿主或培养细胞有高度的种属特异性。病毒在细胞培养中增殖缓慢，初次分离培养需3040d才出现CPE，其特点是细胞肿大变圆，核变大，核内出现周围绕有一轮“空晕”的大型包涵体，形似“猫头鹰眼”状。2人是人巨细胞病毒的唯一宿主。人类CMV感染非常普遍，并且其临床表现差异很大、从无症状感染到致命性感染。初次感染多在2岁以下，大多呈隐性或潜伏感染，但在一定条件下侵袭多个器官和系统可产生严重疾病；孕妇，CMV原发或复发感染均可引起胎儿先天性感染或围产期感染，导致胎儿畸形、智力低下或发育弛缓等，严重者可引起全身性感染综合征，称巨细胞包涵体病；CMV和其他疱疹病毒一样具有潜在的致癌作用，CMV DNA很可能整合于宿主细胞DNA，因而被认为在某种程度上与恶性肿瘤的发生有关，在某些肿瘤如宫颈癌、结肠癌、前列腺癌、Kaposis肉瘤中CMV DNA检出率高、CMV抗体滴度亦高于正常人。3病毒分离是诊断CMV感染的有效方法，人胚肺成纤维细胞对CMV敏感，但病毒在培养细胞中生长很慢，需12周出现CPE、一般需观察28d，如有病变即可诊断。抗原检测可用特异性抗体直接检测临床标本，外周血白细胞中测出CMV抗原表明有病毒血症，该法敏感、快速、特异。抗体检测可明确急性或活动性CMV感染、了解机体的免疫状况及筛选献血员和器官移植供体，特异性IgG抗体需测双份血清以作临床诊断、同时了解人群感染状况，IgM抗体只需检测单份血清、用于活动性CMV感染的诊断。病毒核酸检测包括核酸杂交和PCR。（四）EB病毒1EB病毒系疱疹病毒科嗜淋巴病毒属，其抗原分为2类：病毒潜伏感染时表达的抗原，包括EBV核抗原(EB nuclear antigen,EBNA)和潜伏感染膜蛋白（latent membrane protein，LMP），这类抗原的存在表明有EBV基因组；病毒增殖性感染相关的抗原，包括EBV早期抗原(early antigen, EA)和晚期抗原，如EBV衣壳抗原(virual capsid antigen, VCA)和EBV膜抗原(membrane antigen, MA)，EA是病毒增殖早期诱导的非结构蛋白、标志着病毒增殖活跃和感染细胞进入溶解性周期，VCA是病毒增殖后期合成的结构蛋白，MA是病毒的中和性抗原、能诱导产生中和抗体。2EB病毒在人群中广泛感染，95%以上的成人存在该病毒的抗体。它主要通过唾液传播，也可经输血传染。幼儿感染后多数无明显症状，或引起轻症咽炎和上呼吸道感染；青年期发生原发感染，约有50%出现传染性单核细胞增多症。EB病毒在口咽部上皮细胞内增殖，然后感染B淋巴细胞，这些细胞大量进入血液循环而造成全身性感染；并且它可长期潜伏在人体淋巴组织中，当机体免疫功能低下时，潜伏的病毒活化形成复发感染。由EBV感染引起或与EBV感染有关的疾病主要有三种：传染性单核细胞增多症、Burkitt淋巴瘤和鼻咽癌。人体感染EBV后能诱生EBNA抗体、EA抗体、VCA抗体及MA抗体，体液免疫能阻止外源性病毒感染、却不能消灭病毒的潜伏感染。3病毒检测：1）病毒分离。采集唾液、咽漱液、外周血细胞和肿瘤组织等标本，接种人脐带血淋巴细胞，根据转化淋巴细胞的效率确定病毒的量。2）病毒抗原及核酸检测。多采用免疫荧光法检测病毒特异性蛋白质抗原；利用核酸杂交和PCR或RT-PCR，可在病变组织内检测病毒核酸和病毒基因转录产物。3）血清学诊断。用免疫荧光法或免疫酶法，检测病毒VCA-IgA抗体或EA-IgA抗体，滴度1:51:10或滴度持续上升者，对鼻咽癌有辅助诊断意义；传染性单核细胞增多症患者血清中VCA IgM抗体阳性率较高。（五）其它疱疹病毒1人疱疹病毒6型(human herpes virus-6,HHV-6)在人群中的感染十分普遍，6090%的儿童及成人血清中可查到HHV-6抗体，健康带毒者是主要的传染源，经唾液传播。HHV-6的原发感染多见于6个月至2岁的婴儿，感染后多无症状，少数可引起幼儿丘疹或婴儿玫瑰疹；免疫功能低下的病人，体内潜伏的HHV-6常可被激活而发展为持续的急性感染。病原体检查可采集早期原发感染病儿的唾液和外周血淋巴细胞标本，接种经PHA激活的人脐血或外周血淋巴细胞作HHV-6病毒分离；也可用原位杂交和PCR技术检测受感染细胞中的病毒DNA；间接免疫荧光法常用于测定病毒IgM和IgG类抗体，以确定是近期感染和既往感染。2人疱疹病毒7型(HHV-7)是一种普遍存在的人类疱疹病毒，75%健康人唾液可检出此病毒，从婴儿急性、慢性疲劳综合征和肾移植患者的外周血单核细胞中也分离出HHV-7。HHV-7主要潜伏在外周血单个核细