RNA凝胶电泳试验.doc

餐后高血糖大血管疾病。他汀完全阻滞TAGE引起的核因子活性上升、VEGF表达增加和随之的DNA合成增加，微血管，甲羟戊酸抑制他汀的生长阻滞作用，他汀可能阻TAGE-RAGE信号通路（血管高通透性和生成）。还剂量依赖性降低TAGE引起的超氧族产生。阿托伐他汀抑CRP表达TAGE(toxic),是否有非毒性AGE? AGE引起并发症的主要成分？甘油醛与蛋白的氨基快速反应后形成TAGE,导致血管炎症和氧化应激。TAGE形成可能较糖化血（glc-AGEs的前体）快。Cerivastainadvanced glycation end products &atherosclerosis糖基化终末产物对大鼠肾皮质基质金属蛋白酶-2活性的影响SD大鼠，100，40天，微血管病变（视网膜，肾脏），结果变化不明显。Wistar,100,一个月，肾脏病变，仅比较了肾功能，无结构变化的比较。胰高血糖素样肽-1（GLP-1），一种肠促胰岛素因子，空肠、回肠和盲肠的L细胞分泌促胰岛素释放，延缓胃排空，降低胰高血糖素和降低食欲等。可进一步水解，GLP-1(736)NH2是体内GLP-1的自然形式，其促胰岛素分泌的作用最强。GLP-1的生理功能：促葡萄糖依赖性促胰岛素的分泌，有效降低餐后血糖，抑制胰高血糖素分泌，避免低血糖；影响肠胃消化，GLP-1可能通过促进生长抑素的释放和抑制胃泌素的释放而抑制胃酸分泌，控制餐后血糖；GLP-1显著影响中枢神经系统，明显抑制食欲；GLP-1可促进B细胞增殖、再生，抑制其凋亡，GLP-1分泌减少被认为是B细胞功能衰退的重要因素；GLP-1血管内皮功能明显效果，对神经元具有保护作用。血糖正常时，GLP-1作用随之降低，治疗不会引起低血糖。最主要是降低餐后高血糖。160 0 240RNA凝胶电泳试验实验基本原理RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中，可以分离混合物中不同分子量的RNA分子，凡是无法确定分子量。只有在变性情况下，RNA分子完全伸展，其泳动率才与分子量成正比。判断RNA提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。完整的未降解的RNA制品的电泳图谱应可清晰看到18s rRNA、28s rRNA、5s rRNA的三条带，且28s rRNA的亮度应为18s rRNA的两倍。实验试剂1、0.1%DEPC水：200ml双蒸去离子水加0.2mlDEPC焦炭酸、二乙酯混匀，室温放置过夜，高压灭菌。2、10x电泳缓冲液：吗啉代丙烷磺酸（MOPS）0.4mol/L（pH 7.0）；NaAc 0.1mol/L；乙二胺四乙酸(EDTA) 10mmol/L；3、50mL变性琼脂糖凝胶（1%）：10x电泳缓冲液5 mL；琼脂糖0.5 g；0.1%DEPC水36.5 mL；加热溶解，稍冷却，加入8.5 ml 37%甲醛。4、上样缓冲液（染料）：50%甘油，1mmol/LEDTA，0.4% 溴酚兰，0.4%二甲苯蓝。5、甲酰胺（去离子）。v电泳槽清洗：去污剂洗干净（一般浸泡过夜）水冲洗乙醇干燥3%H2O2灌满室温放置10分钟0.1%DEPC水冲洗。操作步骤1、将制胶用具用70%乙醇冲洗一遍，晾干备用。2、制胶：称取0.5g琼脂糖粉末，加入放有36.5mL的DEPC水（蒸馏水40ml）的锥形瓶中，加热使琼脂糖完全溶解。稍冷（6070）却后加入5ml的10x电泳缓冲液、8.5（9）ml的甲醛（+0.5l溴化乙锭）。然后在胶槽中灌制凝胶，插好梳子，水平放置待凝固后使用。3、加样：在一个洁净的小离心管（DEPC处理过的500l的）中混合以下试剂：电泳缓冲液（10x）2l、甲醛3.5ml、甲酰胺10ml（l）、RNA样品3.5（4.5）l。混匀，置60保温10min，冰上速冷。加入3l的上样缓冲液（染料）混匀，取适量加样于凝胶点样孔内。同时点RNA标准样品。4、电泳：打开电泳仪(电泳槽内加入1XMOPS缓冲液)，稳压7.5V/cm（ml）电泳。5、电泳结束后通过紫外透视仪观察。注意事项本实验中必须保持RNase污染以免RNA降解。所有试剂用DEPC水配制，用具也用DEPC水冲洗，并灭菌。电泳RNA所用器械如制胶的模具、梳子、电泳槽等用肥皂粉洗干净后用双蒸水冲洗二遍后在室温晾干备用。用新的1XTBE配制1.2%琼脂糖凝胶，倒胶时溴化乙锭（EB）直接加入凝胶中。制备好的琼脂糖凝胶板放入电泳槽后再加入经高压灭菌过的1XTBE，液面只能刚好同胶面平齐，缓冲液不要淹过胶面。点样时，样品RNA每10l加入2l上样缓冲液，上样缓冲