液质联用技术的临床检验应用进展ppt课件

LC MS MS临床检验应用进展 上海市徐汇区中心医院李水军2013 10 29 报告提纲 液质联用技术原理国内外临床应用进展在我院的应用情况介绍同型半胱氨酸25 羟基维生素D1 5 脱水葡萄糖醇问题和展望 质谱技术发展历史 质谱仪组成 由离子源 真空接口 质量分析器和检测器组成 根据检测器类型可分为磁质谱 四级杆质谱 离子阱质谱 傅里叶回旋共振质谱 飞行时间质谱 LC MS MS仪 灵敏度 g mL 灵敏度ng mL或者pg mL HPLC MS API Highvacuum LC MS MS工作原理 Ionization MS1 MS2 Fragmentation Detection LC LC MS MS优势 特异性好 免疫分析对小分子化合物的检测缺陷比HPLC和GC MS的容易使用 通量更大 是免疫分析法的主要互补方法与其他技术相比 单个样本的测试成本更低建立和验证新方法比较容易 国外LC MS MS应用 2000年 LC MS MS开始应用于药物研发领域 逐步从标准技术成为国际通用技术2010年 LC MS MS广泛应用于欧美临检参考实验室 由于第三方检测机构的推动 从大型医院临检实验室向中小型 甚至社区医院扩展 Vogeser ClinChemLabMed2003 41 117 126 Dooley ClinBiochem2003 36 471 481 Vogeser ClinBiochem2008 41 649 662 LC MS在PubMed论文发表数量 临检主要应用领域 新生儿筛查 氨基酸 肉毒碱 脂肪酸 有机酸药物中毒 滥用药物分析 止痛药物分析治疗药物监测 免疫抑制剂 抗癫痫药物 抗心律失常药内分泌分析 肾上腺激素 性激素蛋白鉴定和定量 C肽 PTH 血管紧张素功能医学检测以美国MayoClinic为例 1998年没有LC MS MS 2010年 60台LC MS MS 200万个测试 GrebeSK SinghRJ ClinBiochemRev 2011Feb 32 1 5 31 LC MS MS国内应用现状 在各大医院已普及 主要用于临床药理但在临检领域尚处于起步阶段卫生部临检中心部分医院检验科第三方检验机构 质谱法常作为参考方法 用于参考测量程序和校准品定值 我院应用简介 2000年引进LC MS MS 主要用于临床药理和临床科研 2002年开始探索临检应用 同型半胱氨酸 TDM 生物标志物 心血管病 糖尿病 前列腺癌 内分泌 性激素 肾上腺激素 维生素 氨基酸等 同型半胱氨酸 Hcy 心血管疾病独立危险因子 H型高血压增加心脑血管事件30倍 RelativeRisk VascularDisease 流行病学研究证明 H型 高血压患者心血管事件发生率较单纯存在高血压的患者高出约5倍 较正常人高出约25 30倍 GrahamIM etal JAMA 1997 277 22 1775 81 Hcy代谢 Hcy Met AdoMet AdoHcy THF CH3THF CH2THF CHOTHF Cys B6 BHMT MTR B12 B2 蛋氨酸循环 叶酸循环 RefsumH etal ClinChem 2004 50 1 3 32 血中Hcy形式 Hcy Albumin Hcy Cys Hcy 80 bHcy 20 fHcy 正常tHcy5 15 mol L Hcy检测方法原理 检测分析流程 临床研究与应用 体检人群血浆 血清Hcy测定结果 住院病人血浆 血清Hcy测定结果 LiS etal JChromatogrB 2008 870 1 63 67 卫生部临床检验中心2011年全国同型半胱氨酸EQA 循环酶法和LC MS MS法结果差异明显 Bias从10 64 至21 80 循环酶法的室间差异较大 CV9 10 12 61 合作开发检测试剂盒 国内首个获得SFDA批准 具有自主知识产权的液相色谱串联质谱HCY体外诊断试剂盒 国食药监械 准 字2007第3401206号 与现有方法比较优势 LC MS MS技术已成为目前生物样品中小分子化合物定性定量测定的金标准方法高准确性和特异性 直接测定质量 专一 灵敏 通用高通量 超过400测试 天长期运行成本低 使用通用试剂 消耗品成本低廉 大批量测定有优势 25羟基维生素D 25OHD 维生素D营养状况的最佳指标 VITAMIND 据估计 全球有10亿人维生素D缺乏或者不足 骨质疏松症只是维生素D缺乏的冰山一角 对人体的健康的影响极为广泛 维生素D可降低慢性病 包括癌症 自身免疫性疾病 感染 心血管疾病等发病风险 维生素D缺乏相当普遍 HolickMF NEnglJMed 2007 357 3 266 281 上海的维生素D调查情况 25OHD16 4 5 3ng mL 2 5th 97 5th7 9 28 8ng mL 25OHD检测市场需求巨大 25OHD检测方法比较 LC MS MS与ECLIA方法比较 y 0 514x 1 269ng mL r 0 590 Sy x 11 9ng mL ECLIAfor25OHD3 LC MS MS与ECLIA总25OHD比较 y 1 364x 1 815ng mL r 0 834 Sy x 5 22ng mL ECLIAfor25OHDtotal LC MS MS与EIA总25OHD比较 y 1 120 x 7 274ng mL r 0 723 Sy x 9 06ng mL EIAfor25OHDtotal y 0 885x 1 672ng mL r 0 987 Sy x 1 88ng mL LC MS MSfor25OHD2and25OHD3 LC MS MS与美国CAP比较 LC MS MS与NIST的LC MS MS参考方法比较 y 0 9222x 0 045ng mL r 0 9971 Sy x 1 47ng mL LC MS MSfor25OHD2and25OHD3 方法不同导致完全不同的临床判断 1 5 脱水葡萄糖醇 1 5 AG 我国糖尿病现状 36 控制糖尿病并发症风险 糖尿病的并发症分为微血管并发症和大血管并发症 中华医学会糖尿病学分会慢性并发症调查组报告住院2型糖尿病并发症患病率分别为 高血压34 2 脑血管病12 6 心血管病17 1 下肢血管病5 2 防治心脑血管疾病所需的医疗支出 占糖尿病医疗费用的最主要部分 单纯餐后血糖升高者占近50 37 中国2型糖尿病防治指南 2010版 血糖控制不良人群占63 DatafromNHANESandDCCT 血糖监测指标 1 5AG 果糖胺 10 8 9 7 5 6 4 3 1 2 0 HbA1C 葡萄糖 Weeksbeforemeasurement 1 5 AG使血糖监控更加严密完整和科学 1 5 AG的生理特征 40 BuseJBetal DiabTech Ther2003 5 3 355 363 高血糖 尿排泄1 5 AG增加 1 5 AG重吸收 血1 5 AG下降 1 5 AG可监测到血糖的细微变化 YamanouchiTetal Lancet1996 2型糖尿病人治疗过程中考察1 5 AG的变化A组28例糖尿病人连续治疗6周B组28例糖尿病人连续治疗4周后终止治疗 方法验证 临床应用 LiSetal JChromatogr 2008 875 2 459 64 1 5 AG与其他指标的相关性 1 5 AG临床意义 1 5 AG与血糖控制关系 美国糖尿病协会指出预防糖尿病病并发症的重要性在于严格的血糖控制 间歇性的血糖波动比慢性高血糖对血管内皮细胞的损伤更大 1 5 AG测试结果2周内发生变化 医生可以利用检测结果及时了解患者血糖控制的改进效果或恶化程度 1 5 AG能更准确地反映餐后血糖变化情况 有利于监控糖尿病并发症的风险 优势和潜力 国际认可 国内尚未普及的临检新指标金标准方法 临床诊断的准确性优势明显高通量检测 连续测试可超过300个 天有效填补临床糖尿病管理的信息数据链缺口可客观评价病人住院期间的血糖控制情况其临床应用推广及相关科研价值凸显 质谱技术用于临床问题与瓶颈 技术操作政策 技术 方法重现性通量限制分析时间样品处理和信息系统的连接内源性物质 同分异构体 代谢物的干扰基质效应 离子抑制 增强 稳定同位素内标 ID MS Vogeser ClinChemLabMed2003 41 117 126 Dooley ClinBiochem2003 36 471 481 Voges