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文档简介

环介导等温扩增技术 胡星星201505112015 10 20 主要内容 定义原理操作步骤优缺点及 定义 环介导等温扩增技术 loop mediatedisothermalamplification LAMP 是指在等温 60 65 条件下 利用链置换DNA聚合酶短时间 通常 1h 内进行核酸扩增 是一种 简便 快速 精确 低价 的基因扩增方法 其检测结果可直接肉眼观察白色沉淀或者绿色荧光 是一种适合现场 基层快速检测的方法 原理 扩增启动阶段 FIPF3 5 有1个环状构造 Fc1末端5 端游离 的单链 BIPB3 8 有2个环状构造 F1末端即3 端游离和Bc1末端即5 端游离 的单链 循环扩增阶段 FIPF1末端延伸至形成一个环状构造 B1末端即3 端游离 FIP退火到茎环结构 8 上 引导链置换DNA合成反应 产生结构 9 的产物 随后产物 9 的B1末端即3 端自动引导链置换DNA的合成 生成产物 10 和茎环结构 8 与开始的产物 8 序列互补的 BIPB1末端延伸至形成一个环状构造 F1末端即3 端游离 BIP退火到茎环结构 8 上 引导链置换DNA合成反应 产生结构 9 的产物 随后产物 9 的F1末端即3 端自动引导链置换DNA的合成 生成产物 10 和茎环结构 8 产物 8 开始新一轮的循环扩增 延伸循环步骤 产物 10 和 10 进入延伸循环步骤 分别形成 11 和 11 内部引物又可以 11 和 11 作为模板 引导链置换DNA的合成 使产物的序列不断延伸 环化 再延伸 最终的产物是一些具有不同茎长度茎环结构的DNA和带有许多环的折叠结构的DNA的混合物 LAMP法实验室常规操作步骤 优缺点 优点 灵敏度高 比传统的PCR方法高2 5个数量级 反应时间短 30 60分钟就能完成反应 临床使用不需要特殊的仪器 试剂盒研发阶段推荐用实时浊度仪 操作简单 不论是DNA还是RNA 检测步骤都是需将反应液 酶和模板混合于反应管中 置于水浴锅或恒温箱中63 左右保温30 60分钟 肉眼观察结果 缺点 灵敏度高 一旦开盖容易形成气溶胶污染 故在进行试剂盒的研发过程中可采用实时浊度仪 不要把反应后的反应管打开 引物设计要求比较高 有些疾病的基因可能不适合使用环介导等温扩增方法 应用 LAMP技术因其快速 高效 特异 灵敏和经济等优点 已经应用于病原菌 寄生虫 病毒 疾病和
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