0015微生物限度检查计数培养基适用性操作规程.doc

文件编号：SOP-QC-0015-00 页码：第 4 页 共4 页微生物限度检查计数培养基适用性操作规程微生物限度检查计数培养基适用性操作规程一、目的：建立微生物限度检查计数培养基适用性的标准操作规程。 二、范围：本标准规定了微生物限度检查计数培养基适用性要求；适用于本公司检品微生物限度检查计数培养基适用性。三、职责：检验员对本标准的实施负责四、依据：中国药典2015年版四部（通则1105） 五、内容：1 试验用具：1.1 托盘天平、生物安全柜（BSC-1000）、电热恒温培养箱（HH.BII.500-S）、层流超净工作台（S.SW-CJ）、电热恒温干燥箱（GZX-DH.600-）、霉菌培养箱（MJ-160B型）1.2 锥形瓶（250300ml、500ml内装玻璃珠若干）、培养皿（9cm）、量筒（100ml，500m1）、试管（18mm180mm）及塞、吸管（1m1分度0.0l，10m1分度0.1）、注射器（20ml或30m1）、涂布棒、注射针头、玻璃消毒缸（带盖）、不锈钢桶（带盖）。玻璃器皿用前应洗涤干净，吸管、量筒不挂水滴，无残留抗菌物质。吸管口上端距0.5cm处塞入约2cm的适宜疏松棉花，置吸管筒内或牛皮纸袋中。锥形瓶、量筒、试管均应加棉塞或硅胶塞，若用振荡器制备混悬液时，尚需用玻璃纸包裹瓶塞，以免振荡时供试液污染瓶塞，再用牛皮纸包扎。玻璃器皿，均于160干热灭菌2h或高压蒸汽121灭菌30min，烘干备用。1.3 用具大、小橡皮乳头（放于干净带盖的容器中，并应定期用7075乙醇溶液浸泡）。无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后配套，用牛皮纸包严）灭菌，备用。也可用一次性无菌衣、帽、口罩、手套。1.4 接种环（白铱金或镍铬合金，环径45mm、长度610cm）、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、灭菌剪刀或灭菌手术刀和灭菌镊子、灭菌钢锥、灭菌称样纸、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、白瓷盘、洗手盆、陶瓦盖（12cm）、实验记录纸等。2 试液2.1 0.1苯扎溴铵溶液或其他适宜消毒液（供洗手、擦拭操作台面用）。2.2 5石碳酸溶液（配好后装入玻璃消毒缸内，供消毒带菌吸管用）亦可选用其他适宜消毒液。2.3 75乙醇溶液。2.4 碘酊或碘伏溶液3 验证所需要的稀释剂的确认稀释剂：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲溶液4 验证所需文件的确认表文件名称文件编码是否有效版本文件保存处微生物实验室清洁消毒操作规程是 否质量部培养基的管理制度是 否质量部检定菌的保存、传代、使用、销毁规程是 否质量部BSC-1000生物安全柜操作规程是 否质量部HHBII.500-S电热恒温培养箱操作规程是 否质量部GZX-DH.600-电热恒温干燥箱操作规程是 否质量部MJ-160B型霉菌培养箱操作规程是 否质量部检查人/日期： 复核人/日期：5 验证项目和验证方法：5.1 验证用菌株：（第 代） 铜绿假单胞菌CMCC（B）10104、金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501、白色念珠菌CMCC（F）98001、黑曲霉菌CMCC（F）98003。验证所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冻干粉菌株为0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证实验菌株的生物学特性。 5.2 菌悬液的制备：分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml胰酪大豆胨液体培养基中，3035培养1824小时，分别挑取菌落接种加入PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml中，采用10倍递增稀释法，稀释至10-510-7,制成不大于100cfu/ml的菌悬液备用。接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml沙氏葡萄糖液体培养基中，2025培养23天，挑取菌落接种到PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml中，采用10倍递增稀释法，稀释至10-510-7，制成不大于100cfu/ml的菌悬液备用。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面上，2025培养57天，直到获得丰富的孢子。加入35ml含有0.05%聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱，吸至无菌试管中，挑取菌落接种到含有0.05%聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml中，采用10倍递增稀释法，稀释至10-510-7，制成不大于100cfu/ml的孢子悬液备用。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在28，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2-8，在验证过的贮存期内使用。 5.3 阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验。阴性对照试验应无菌生长。如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。5.4 培养基适用性检查接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的菌悬液与黑曲霉的孢子悬液（均不大于100cfu），分别于无菌平皿中，立即倾注适用性检查的胰酪大豆胨琼脂培养基，用于检查胰酪大豆胨琼脂培养基的需氧菌总数计数适用性。接种白色念珠菌的菌悬液与黑曲霉的孢子悬液（均不大于100cfu），分别于无菌平皿中，立即倾注适用性检查的沙氏葡萄糖琼脂培养基，用于检查沙氏葡萄糖琼脂培养基的霉菌和酵母菌总数计数适用性。上述每一试验菌株平行制备两个平皿，同时用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述实验。5.5 培养条件将培养基适用性检查的胰酪大豆胨琼脂培养基置3035培养箱中培养3天（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌），或培养5天（白色念珠菌、黑曲霉）。将培养基适用性检查的沙氏葡萄糖琼脂培养基置2025培养箱中培养5天。5.6 结果判定：若被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，则判该培养基适用性检查符合规定。6 相关文件6.1 菌液浓度确定记录 编号：SOR-QC-0015-01-006.2 计数培养基适用性检查记录 编号：SOR-QC-0015-02-006.3 检定菌接收记录 编号：SOR-QC-0017-01