逆境对植物组织的伤害.doc

逆境对植物组织的伤害实验指导老师：叶庆生 姓名：闫红博 学号20122501108一 实验目的 1.初步了解植物在逆境下的相关生理生化变化; 2.学会使用DDS-11A型电导率仪，掌握绝对电导率 和相对电导率的概念； 3.熟悉植物组织过氧化物酶活性的测定方法，学会分光光度计的“动力学”测量程序.2、 实验材料绿豆幼苗3、 实验步骤1. 电导率法检测植物细胞质膜透性 材料处理:将绿豆幼苗各10株提前1晚用超纯水洗净根部，分别放在盛有100mL超纯水的2个一次性纸杯中，然后放置于45 和25 的人工气候箱里(处理1-3小时）。 (下午上课的班请于当天 上午8：15处理材料) 电导率的测定: A:第二天上午小心取出幼苗，冷却至室温后测定浸出液和纯水的电导率。 B:然后将材料放入烧杯中，沸水加热10min,冷却到室温，再次测定电导率值。 2.过氧化物酶（POD）活性测定 粗酶液的提取：取植物材料 0.5 g，加入 5 ml 磷酸缓冲液（100 mM,pH 6.0）冰浴研磨成匀浆，低温 5000 rpm 离心 10 min,收集上清液（粗酶液）。4oC 保存备用； POD的测定：先在分光光度计的“动力学”或“时间扫描”程序上设置好参数取比色杯2个，1个将对照液放入参比杯按照程序调零，另一个比色杯拉出加入100L酶液，最后加入3mL反应混合液，立即在分光光度计470 nm 测量光密度值的变化。 4、 实验结果及分析1、 电导率的测定处理电导率超纯水0.6m/cm2536.7m/cm4556.1m/cm2、 过氧化物酶（POD）的测定时间 吸光值25根（200L+2.8ml）45根（200L+2.8ml）10S0.0510.056200.0610.061300.0750.070400.0930.082500.1130.096600.1330.111700.1540.126800.1750.143900.1950.1591000.2150.1741100.2230.1891200.2510.2041300.2680.2191400.2850.2331500.3020.2451600.3180.2561700.3340.2681800.3490.28025处理下根吸收值45处理下根吸收值分析1、电导率法检测植物细胞质膜透性植物细胞膜起调节控制细胞内外物质交换的作用，它的选择透性是其最重要的功能之一。膜结构破坏的程度与逆境的强度、持续的时间、作物品种的抗性等因素有关。当植物受到逆境影响时，如高温或低温，干旱、盐渍、病原菌侵染后，细胞膜遭到破坏，膜的透性增加，选择透性丧失，细胞内部分电解质外渗，其中包括盐类、有机酸等，这 些物质进入环境介质中，如果环境介质是蒸馏水，那么这些物质的外渗会使蒸馏水的导电性增加，将植物组织浸入去离子水中，水的电导将因电解质的外渗而加大，伤害愈重，外渗愈多，电导率愈大。所以在电导率法检测植物细胞质膜透性的实验中，处理材料的温度越高，对植物组织的损害程度越大，其电导率和相对导电率应该是越高。而从实验结果得到的数据可知，经过45处理的绿豆根尖的电导率的确比经25处理的根尖电导率高出很多，可知高温对绿豆根尖的影响比较大。整个过程中，由于温度对溶液的电导影响很大，故必须在相同温度下测定；叶片接触的用具必须绝对洁净（全部器皿要洗净），不要用手直接接触叶片，以免污染；水浴加热隔几分钟摇一次，测量前也要摇匀；煮沸时单管要分开，防止沸水窜入试管；每次往待测液中插入电极时，都要首先用超纯水冲洗电极，并轻轻拭干。2、愈创木酚法测定过氧化物酶活性POD 在植物中以两种形式存在，游离态(可溶POD) 存在于细胞液中，结合态存在于细胞壁、细胞膜和细胞器上。在高温处理的过程中，植物的细胞结构会遭到破坏，细胞壁的断裂以及细胞膜和细胞器的破坏会使结合在上面的POD 释放出来,转化为游离的POD。正常情况下POD的活性应该是25的高于45，因为酶的活性受温度的影响，在一定的温度范围内，酶的活性随着时间的增大而增大，但并不是温度越高其活性就越大，高温会破坏酶的结构。根据折线图的比较，可以看出实验结果与预测结果相符，25的POD高于45，但是与绿豆叶子比较，可以看出25的与45的处理后的结果比较接近，几乎没有差异，原因可能是：处理