大肠杆菌和沙门氏菌的微生物检查.doc

青 岛 农 业 大 学实 验 论 文 题 目：大肠杆菌和沙门氏菌的微生物检查 姓 名： 学 院： 动物科技学院 专 业： 动物科学 班 级： 学 号： 指导教师： 任慧英 2014年 4 月 8 日大肠杆菌和沙门氏菌的微生物检查摘要：大肠杆菌是肠杆菌科中埃希氏菌属的代表种。大肠杆菌和沙门氏菌作为肠杆菌科的成员具有一些共同的特性，如形态、染色特性等。但一些培养特性和生化特性有差异，可作为鉴别诊断的依据，有时还需要依靠血清学方法。关键词：生化特性、埃希氏菌、共同特性、鉴别诊断引言：根据O、H、K抗原的不同，可将大肠杆菌菌株分为不同的血清型。沙门氏菌属是由一大群血清学相关的革兰氏阴性、兼性厌氧的无芽孢杆菌组成，系肠杆菌科中重要的病原菌属之一，对人和多种动物均有致病性，对动物能致多种临床表现的沙门氏菌病，亦能以继发菌出现在其他疾病中。1. 材料与方法1.1材料菌种：大肠杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌与沙门氏菌的混合菌液。增菌液：亚硒酸盐亮绿增菌液、四硒酸钠增菌液。普通培养基：肉汤、普通琼脂、沙门试液诊断学清：AE群多价O血清及单半固体培养基。鉴别培养基：SS琼脂、麦康凯琼脂、三糖铁琼脂。生化培养基：糖发酵管、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、尿素琼脂、醋酸铅琼脂。1.1.2 试剂生化试剂：MR试剂、VP试剂、吲哚试剂、乙醚、硝酸盐还原剂等、革兰氏染液。1.1.3 器材显微镜、吸管等。1.2 方法1.2.1 直接分离培养：将A菌种与B菌种的混合菌液用常规划线方法，接种麦康凯琼脂平板和SS琼脂平板各一个，置37温箱内培养24h后取出，观察每种平板上两种菌的生长情况。形态观察：以无菌接种环分别挑取麦康凯琼脂平板或SS琼脂平板上新鲜培养的A菌种和B菌种的单个菌落，在载玻片上制成涂片，待自然干燥后，以火焰固定，进行革兰氏染色，镜检。观察两种菌的形态、大小与排列方式，并作比较。这两种菌都是革兰氏阴性、两端钝圆的球杆菌，菌体大多单个存在，大小差异不明显。培养特性观察：将A菌种和B菌种的纯培养物分别接种肉汤、普通琼脂、三糖铁琼脂、SS琼脂和麦康凯琼脂。三糖铁琼脂接种时，先涂布斜面，后穿刺底层。置37温箱内培养24h后，取出观察两种细菌的培养特性并比较。 生化试验：生化试验前，须对菌种进行纯度检查，以保证不污染杂菌。检查方法同一般培养物的制片、染色、镜检。镜检时要适当多看几个视野，每个视野中细菌形态与染色特性均须符合该菌种的特性。凡污染杂菌者，此菌种不可使用。糖发酵管接种：每种菌纯培养物分别接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、卫矛醇微量生化反应管，每种糖一管，穿刺接种。蛋白胨水接种：每种菌纯培养物接种一管，培养后作吲哚试验。葡萄糖蛋白胨水接种：每种菌纯培养物接种两管，培养后作MR试验，另一管作VP试验。尿素琼脂接种：每种菌纯培养物接种一管，接种量要大。 枸橼酸琼脂接种：每种菌纯培养物接种一管，接种量要少。 醋酸铅琼脂接种：每种菌纯培养物接种一管，接种时应靠近管壁穿刺，以便于观察结果。半固体琼脂接种：每种菌纯培养物各穿刺接种一管，穿刺线应在培养基中央，一直刺到管底，拔出穿刺针时应顺原穿刺线取出，切不可左右滑动，以免影响观察结果。1.2.5 生化试验糖酵解试验：取经23d培养后的两种细菌的糖发酵管一一观察，凡培养基变成黄色者，表示该菌发酵此糖产酸（以+表示）；凡培养基变黄并含气泡者，表示该菌发酵此糖产酸产气（以表示）；凡培养基不变色者，表示该菌不发酵此糖（以-表示）。 MR试验：取一支经23d培养的葡萄糖蛋白胨水培养管，加入MR试剂数滴（5滴左右），凡液体呈红色者为阳性反应（+），呈黄色者为阴性反应（），橙黄色者为可以反应（） VP试验：取另一只葡萄糖蛋白胨水培养管，先加入VP试剂甲液（6%甲萘酚酒精溶液）3mL，再加VP试剂乙液（40%KOH溶液）1mL，充分摇匀后静置于试管架上，在数分钟内出现红色者为阳性反应，不出现红色者应放在37继续观察12h，仍然不变色者判为阴性。吲哚试验：取蛋白胨水培养管先加乙醚少量，塞紧棉塞摇震试管，使乙醚与培养液充分混合，静置片刻，使乙醚浮于液面上层时，沿管壁加入吲哚试剂23滴。凡在乙醚层内出现玫瑰红色者为阳性反应，不变色者为阴性反应。枸橼酸盐利用试验：观察经23d培养的枸橼酸盐琼脂管是否有细菌生长，并观察其颜色变化。凡有细菌生长，培养基变为天蓝色者，为该菌利用枸橼酸盐，否则为阴性反应。 硫化氢试验：观察经23h培养的醋酸铅琼脂管，凡沿穿刺线或其周围出现黑色沉淀者，为硫化氢阳性反应，无黑色者为阴性反应。3.1 结果讨论 大肠杆菌的生长表现在普通琼脂上形成圆形、光滑、湿润、半透明。而在麦康凯琼脂上形成红褐色菌落。沙门氏菌在普通琼脂上生长不良，而在麦