实验室培养基制备规范 v1.doc

1 目的 Objective 规范实验室培养基制备、测试、储存和使用，使培养基质量得到控制。2 参考 ReferenceSN/T 1538.1-2005 培养基制备指南 第1部分：实验室培养基制备质量保证通则3 范围 Scope本程序适用于化验室微生物检测用商品化培养基的制备、测试、储存和使用。4 原理 Principle 根据每种培养基的不同的特性和使用方法，以及商品培养基标签说明。5 健康与安全 Health and Safety5.1 有良好的实验室操作规范5.2操作高压灭菌锅时按照实验室设备操作说明书使用（SOP-QA030）6 仪器 Laboratory apparatus6.1 电子天平d：0.01g6.2 1000mL烧杯6.3 量杯6.4 培养基瓶6.5 10mL移液管6.6 50mL 移液管6.7 高压灭菌锅HVE-506.8 数显pH计 精度0.017 试剂Reagent 蒸馏水（要求达到实验室二级水标准）8 程序 Procedure 8.1 培养基的验收、登记及贮存 每批培养基均须在保质期1/3日期内，外观标签完好，包装完好密封。摇动瓶体内容物流动性好，无结块；每批来货须有厂家提供的质控证书。每批来货后登记来货名称、数量、批号和接受日期并更新库存数量。按要求存储每种培养基，常温存储的有：计数琼脂、乳糖胆盐发酵管、孟加拉红琼脂、伊红美兰平板琼脂、结晶紫中性红胆盐琼脂、缓冲蛋白胨水等商品化脱水干粉培养基。须48冷藏的：卵磷脂干粉。每种培养基在开封后至少在3个月内用完。如未开封参考标签保质期。 8.2 培养基制备 8.2.1 首次开封培养基后在培养基瓶口出记录开封日期。每次使用时观察内容物流动性和均一性，如有受潮结块和不均匀情况应停止使用。 8.2.2 按标签配制质量/体积计算所需培养基量，例如：计数琼脂 称取23.5g于1L蒸馏水中，计算配制400mL琼脂量为23.5（400/1000）=9.4g，即称取9.4g于400mL水中。如所需培养基为双料则在原用基础上乘2。先加入所需水量，再加入所需培养基量，振摇或用玻璃棒搅拌至培养基充分散开。培养基加入水后如不能充分溶解，应适当加热。 8.2.3 对于9mL生理盐水稀释剂，应在灭菌后用无菌试管进行分装。乳糖胆盐发酵管、乳糖发酵管等液体培养基应分装后进行灭菌。琼脂类培养基装入蓝盖培养基瓶进行灭菌；生理盐水装入锥形瓶用稀薄纸封口。为防止溢出，液体内容物应不超过容器的3/4。 8.2.4 按照标签说明进行灭菌。计数琼脂、孟加拉红琼脂、生理盐水稀释剂为12115min灭菌；乳糖胆盐发酵管、伊红美兰平板琼脂、乳糖发酵管为11515min灭菌。结晶紫中性红胆盐琼脂为煮沸（进行煮沸时应佩戴防护眼镜和隔热手套，并时刻注意沸腾，沸腾时应立即转移停止加热）。进行高压灭菌时加贴热敏试纸和放置温度计，以确认灭菌效果。 8.2.5 灭菌后计数琼脂、结晶紫中性红胆盐琼脂放入461水浴锅中备用，水浴高度必须没过瓶内琼脂高度，水浴后4h内用完。乳糖胆盐发酵管、乳糖发酵管冷至室温后放入48冷藏柜冷藏一周内用完。伊红美兰平板琼脂水浴至55倾注无菌平板，每皿1520mL，待凝固后存储于灭菌密封袋中48冷藏备用，一周内用完。用于空气落菌数检测（平板暴露法）的计数琼脂平板和孟加拉红琼脂平板水浴至46倾注平板，每皿1520mL，待凝固后存储于密封的灭菌袋中48冷藏备用，一周内用完。培养基外袋、试管框或摆放处标识名称和配制日期。 8.2.6 培养基均须在使用前进行pH值测定。无菌操作取适量培养基凉至室温或恢复至室温，检测前pH计应先预热30min待其稳定后进行校正。如pH值范围不在规定范围内，则停止使用。 8.2.7 计数琼脂、结晶紫中性红胆盐琼脂在水浴至46倾注平板，此时应对水浴锅中水银温度计进行读数，温度应在45.546.5范围内。伊红美兰平板、空气检测用计数琼脂平板和孟加拉红琼脂平板，琼脂表面如有冷凝水，在使用前倒扣于2550烘箱/培养箱中进行干燥。平板培养时每垛不超过6个，平板间留有5cm间隙，以利于空气流通。 8.2.8 所有培养基废弃前均应进行安全处理，置于灭菌桶内12145min灭菌。 8.2.9 每种培养基的常用配制量配制方法、灭菌方式和pH范围：培养基名称配制方法灭菌方式pH范围计数琼脂称取9.4克计数琼脂于盛有400毫升蒸馏水的蓝盖培养基瓶中。振摇溶解。盖子不可拧紧。121；15min7.00.2结晶紫中性红胆盐琼脂称取16.64克结晶紫中性红胆盐琼脂于盛有400毫升蒸馏水锥形瓶中。振摇溶解。煮沸7.40.2乳糖胆盐发酵管（双料）称取70克乳糖胆盐发酵管于盛有1000毫升蒸馏水的烧杯中。玻璃棒搅拌溶解，分装18*180mm试管中，每管10mL，放入小导管，盖好试管盖。115；15min7.40.2乳糖胆盐发酵管（单料）称取35克乳糖胆盐发酵管于盛有1000毫升蒸馏水的烧杯中。玻璃棒搅拌溶解，分装18*180mm试管中，每管10mL，放入小导管，盖好试管盖。115；15min7.40.2伊红美兰平板琼脂称取14.8克伊红美兰平板琼脂于盛有400毫升蒸馏水的蓝盖培养基瓶中。振摇溶解。盖子不可拧紧。115；15min7.10.2乳糖发酵管称取3克乳糖发酵管于盛有100毫升蒸馏水的烧杯中。玻璃棒搅拌溶解，分装15*150mm试管中，每管3mL，放入小导管，盖好试管盖。115；15min7.40.1乳糖蛋白胨肉汤（双料）称取9.6克乳糖胆盐发酵管于盛有200毫升蒸馏水的烧杯中。玻璃棒搅拌溶解，分装18*180mm试管中，每管10mL，放入小导管，盖好试管盖。115；15min7.30.2孟加拉红琼脂称取12.64克孟加拉红琼脂于盛有400毫升蒸馏水的蓝盖培养基瓶中。振摇溶解。盖子不可拧紧。121；15min6.00.2BTL参见SOP-QA0419 负责任制 AccountabilityQA 课长： QA副课长：附件资料10.1 培养基配置记录（SOP-QA034-F01）10.2 高压灭菌记录（SOP-QA034-F02）10.3 pH值纠正记录（SOP-QA034-F03）10 相关规章 无修改历史版本号修改原因修改前内容修改后内容修改人修改日期1.1文件与实际不相符修改了部分术语及部门名称文件审批1、发放部门董 事 长 份 集团总部 份 总 经 理 份 管理代表 份文管中心 份 HR 份 财 务 课 份 外 贸 部 份QA 份 生 产 部 份 EHS 份