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哈茨木霉 不同 条件下 菌丝 生长 情况 研究

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22 Planting Technology种植技术 22 优化木霉 Trichoderum spp 被认为是 最有希望的生物防治因子 据统计全世界25 个国家和美国 43 个州的生物防治课题中 大约34 是有关木霉的研究 木霉属中应用 最多的为哈茨木霉 T harziarum 常用剂 型为麦麸制剂 哈茨木霉一般先通过PDA培 养基进行一级培养后 再将孢子洗脱后植入 麦麸中进行二级培养 因而其培养周期长 成本高 在一定程度上一级培养技术制约了 哈茨木霉的规模生产 近年来 液体培养技 术在微生物培养中应用较多 有关哈茨木霉 液体培养技术的文献对木霉液体培养技术作 了些探讨和实践 表明哈茨木霉液体培养技 术具有培养周期短 孢子产量大 工业化程 度高等优点 完全可以在一级培养中代替 PDA 固体培养 这为哈茨木霉进行大规模 工业化生产突破了关键的一环 同时也为冬 虫夏草头孢发酵过程中所排放的废液找到了 生物利用的出路 减少了对环境所产生的污 染 并为其他类似微生物培养废液的生物利 用提供了一条综合开发的思路 具有较强的 实用价值 1 试验材料和方法 1 1 菌种来源 哈茨木霉菌株是分离自实验室栽培食用 菌灰树花时染菌的菌袋 由于当时观察到该 菌株生长速度极快 很快覆盖了被污染的灰 树花菌丝 并迅速长满菌袋 因此判断可能 成为较好的生物防治菌剂来源 遂对其进行 了分离 1 2 主要试剂 PDB培养液 马铃薯 去皮200g 葡萄 糖20g 蒸馏水1000mL 1 3 主要仪器设备 医用型洁净工作台 DL CJ 1F 哈尔滨 市东联电子技术开发有限公司制造 人工气候箱 HPG 400H 哈尔滨东联 电子技术开发有限公司制造 智能气候培养箱 ZPQ 400 哈尔滨东 拓科技开发有限公司制造 微量移液器 Finnplpette Theron Electron 冰箱 NABILA INDESIT 微波炉 MZ 2270M 海尔 光学显微镜 Motic B1 SERIES SYSTEM MICROSCOPES 高压灭菌锅 SANYO Autoclave MLS 3020 SANYO Electric Co Ltd Made In Japan 架盘药物天平 HC TP11 5 上海精 科 摄影显微镜 Olympus BX51 1 4 试验方法 将在9cm PDA平板上生长7d的哈茨木霉 菌 2号菌株 孢子 用无菌水10mL洗 用 血球计数器调制成浓度为107cfu mL的孢子悬 浮液 PDB培养液的制备 马铃薯 去皮 200g 用纱布包裹加入盛有1000mL蒸馏水 的煮锅中 煮沸20分钟后加入20g葡萄糖 搅 拌至溶化 每250mL三角瓶中加入100mL PDB 培养液 接菌 将用高压灭菌锅灭菌的盛有PDB培 养液的三角瓶 移液枪枪头等物品放入操净工 作台 用移液枪吸取107个 mL浓度的孢子悬浮 液接菌至三角瓶 吸取量根据需求而定 1 4 1 不同温度对哈茨木霉生长的影响 每250mL三角瓶中加入100mL PDB培养 液 分别在8 16 21 25 30 恒温下静置 培养 每处理3瓶 7d镜检分生孢子的产生情 况 并称量菌丝干重 1 4 2 不同pH对哈茨木霉生长的影响 以1mol L HCl和1mol L NaOH的溶液分 别将三角瓶中的溶液pH调到2 4 6 8 10 12 接种后分别于25 恒温条件下静置 培养 每处理3瓶 7d镜检分生孢子的产生情 况 并称量菌丝干重 pH的调制 利用移液枪吸取一定量的HCl 或者NaOH加入盛有PDB培养液的三角瓶中 用玻璃棒蘸取少许培养液点加在pH试纸上比 对以确定配得所需pH值 2 试验结果与分析 2 1 不同温度对哈茨木霉生长的影响 由表1 图1和图2可见 哈茨木霉在温 度为25 时产生分生孢子量最大 菌丝干重 最小 而菌丝干重最大是在8 此时分生孢 子量最小 2 2 不同pH对哈茨木霉生长的影响 由表2 图3和图4可见 哈茨木霉在 pH 6时产生分生孢子量最大 菌丝干重最 小 而菌丝干重最大是在pH 12时 此时分 生孢子量最小 目前木霉菌剂的生产多为孢子制剂 为了今后大规模生产木霉菌剂 对哈茨木霉 菌的液体发酵条件进行了初步研究 研究发 现 哈茨木霉在温度为25 时产生分生孢子 量最大 而菌丝干重最大是在8 此情况 下分生孢子量最小 在pH 6时分生孢子量 最大 菌丝干重最小 而菌丝干重最大是在 pH 12 此情况下分生孢子量最小 虽然这只是实验室内的小规模实验 但 对大规模发酵生产具有一定的指导意义 作者单位 内蒙古扎兰屯林业学校 内蒙古兴安盟 162650 摘 要 关键词 哈茨木霉 液态发酵 产孢 本文以哈茨木霉为菌种 测定其在 不同温度 不同pH条件下菌丝生长 和产孢的情况 进而为大规模发酵 生产分生孢子提供前期基础 从而 为研制木霉生防菌剂做准备 哈茨木霉在不同条件下菌丝生长和产孢情况研究 文 周洪岩 图1 不同温度7d的分生孢子产生情况图2 不同温度7d的菌丝干重情况 图3 不同pH值7d时的产孢情况图4 初始pH值对菌丝干重的影响

内容简介：

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