教案07五年生药学第二周.doc

授课时间第 2 周教学时数4章节名称第三章 生药的鉴定教学目的及要求1、 掌握生药学的基源鉴定、性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定方法2、 了解现代生药学鉴别方法：DNA分子遗传标记技术、指纹图谱质控技术等教学重点及难点重点：性状鉴定、理化鉴定、显微鉴定教具板书教学方法课堂讲授教学过程设计时间分配1、生药的鉴定（1）生药鉴定的意义（2）原植物鉴定（3）性状鉴定（4）显微鉴定（5）理化鉴定1515301515教学内容批注 生药的鉴定第三节 生药鉴定的方法常用的鉴定方法，以检品和标准品进行对照鉴定，所以要积累标准品、伪劣品实物标本及鉴定资料。常用的鉴定方法有：来源(原植、动、矿物)鉴定、性状鉴定、显微鉴定和理化鉴定等方法。1. 来源(原植、动、矿物)鉴定来源鉴定(origin identification)(基原鉴定)，是应用植(动、矿)物的分类学知识，对生药的来源进行鉴定研究，确定其正确的学名，以保证应用品种准确无误。观察植物形态：对形态较完整植物体的植物药检品，应注意对其根、茎、叶、花、果实等器官的观察，对花、果、孢子囊、子实体等繁殖器官应特别仔细，借助放大镜或解剖显微镜，观察微小的特征，如毛茸、腺点等的形态构造。检品形态不完整，要深入产地调查，采集实物，进行对照鉴定。核对文献： 根据已观察到的形态特征和检品的产地、别名、效用等线索，查阅、核对中国植物志、中国高等植物图鉴等有关植物分类学专著等文献。核对标本： 核对已定学名的植物标本。2. 性状鉴定性状鉴定(macroscopic identification)主要利用感观（眼看、手摸、鼻闻、口尝等）进行宏观鉴定（鉴别药材的外观性状）。是生药鉴定必备的基本功。一般包括七个方面：形状、大小、颜色、表面特征、质地、折断面、气味，还有水试、火试。（1）形状 形状与药用部位有关，每类药材的形状一般都有共同点，即具有一般形态规律。经验鉴别：党参根头多数疣状突起的茎痕和芽习称“狮子盘头”；防风的根茎部分称“蚯蚓头”；山参主要特征描述为“芦长碗密枣核艼，紧皮细纹珍珠须”；海马的外形为“马头蛇尾瓦楞身”；蕲蛇为“龙头虎口翘鼻头，方胜连珠指甲尾”。(2) 大小 药材的长短、粗细、厚薄。常有一定的幅度。(3) 颜色 药材颜色既反映了药材的特点，又能说明其质量。色泽变化与药材质量有关，如黄芩应是黄棕色，保管不当，其成分黄芩苷在酶作用下水解成苷元黄芩素，黄芩素具3个邻位酚羟基，易氧化成醌类而显绿色，黄芩变绿后质量降低。又如丹参色红，紫草色紫，乌梅色黑，黄连色黄。这些均说明药材的色泽是衡量药材质量好坏的重要因素。(4)表面特征 常是性状鉴别的主要依据，指药材表面光滑或粗糙；有无纹、皱、槽、沟、连珠；表面常可见节、根痕、叶痕、皮孔或毛茸等。如白花前胡根头部有叶鞘残存的纤维毛状物，是区别紫花前胡根的重要特征。暹罗角有“天沟”、“地岗”，而广角则无，是商品犀角的主要区别。(5)质地 指药材的软硬、坚韧、疏松、致密、轻重、弹柔以及粉性、黏性、绵性、柴性、角质、油润等特征。有时反映其显微特征及质量。经验鉴别：南沙参“松泡”（质轻松，断面多裂隙）；山药“粉性”（富含淀粉，折断时有粉尘散落）；当归“油润”（质地柔软，含油而润泽）；郁金“角质”（质地坚硬，断面半透明状或有光泽）。道地黄芪质柔韧、粉性质优，江苏引种品质坚硬、柴性质劣。(6)折断面 A.折断时的现象：易折断或不易折断，有无粉尘散落（甘草）、胶丝相连（杜仲）等。B.折断时的断面特征：平坦（牡丹皮），有亮星（厚朴），呈纤维性（黄柏）、颗粒性（肉桂）或裂片状（苦楝皮）。C.横断面特征：断面纹理；皮木比例；维管束的排列方式、射线的分布；棕色油点有无等。经验鉴别：黄芪“菊花心”；粉防已“车轮纹”；大黄“星点”、何首乌“云锦纹”、商陆“罗盘纹”（异常维管束）；茅苍术“朱砂点”（油室）、“起霜”(析出白毛状结晶)，白术不“起霜”；牡丹皮“亮星”（丹皮酚结晶）等。(7)气味 气味与药材所含成分及含量有关，不但是药材品种鉴别的重要依据，也是衡量药材质量的标准之一。如檀香、麝香（麝香酮）、肉桂、丁香（丁香酚）等有特殊的香气，阿魏有特异的臭气；乌梅、木瓜、山楂味酸，黄连、黄柏味极苦（小檗碱）；甘草味甜（甘草甜素）等等。若药材的气味改变，就要考虑其品质问题。（尝味时舌尖部只对甜味敏感，近舌根部对苦味敏感，所以口尝时要咀嚼片刻，使舌头的各部分都接触到药液。对剧毒药材，不宜口尝。）(8)水试 水试法是利用药材在水中或遇水发生沉浮、溶解、颜色变化及透明度、膨胀性、旋转性、黏性、酸碱性变化等特殊现象进行鉴别。如西红花水液染成金黄色；秦皮水浸液在日光下显碧蓝色荧光；苏木投热水中，水显鲜艳的桃红色。葶苈子、车前子等加水浸泡，种子变黏滑，体积膨胀；熊胆投入清水中即在水面旋转并呈现黄线下沉而不扩散。这些现象与内含成分或组织构造有关。(9)火试 用火烧之，能产生特殊的气味、颜色、烟雾、闪光和响声等现象，来鉴别药材。如降香微有香气，点燃则香气浓烈，有油流出，烧后留有白灰；麝香用火烧时有轻微爆鸣声，起油点如珠，似烧毛发但无臭气，灰为白色；海金沙易点燃而产生爆鸣声及闪光。3显微鉴定显微鉴定(microscopic identification)是借助显微镜观察药材的组织构造、细胞形态以及后含物的特征，用以鉴定生药品种和质量的重要手段之一。（1）显微鉴定的常用方法A显微制片方法：徒手、滑手或石蜡切片B对植物性生药，根、根茎、茎藤、皮、叶等类一般制作横切面观察，必要时制纵切片；果实、种子则要作横切片和纵切片；木类必须作横切、径向纵切和切向纵切。C观察粉末中的后含物：用蒸馏水或甘油醋酸装片观察淀粉粒；用甘油装片观察湖粉粒；用水合氯醛装片不加热立即观察菊糖；用水合氯醛装片加热透化，然后加甘油少许，观察其他组织及后含物。（2）显微鉴定要点根类生药A根类生药的组织构造：根据维管组织，区别双子叶植物根的初生构造、次生构造或单子叶植物根。a双子叶植物根多数为次生构造：表层为木栓组织；皮层一般不存在；有些根的栓内层发达呈皮层样，称次生皮层；韧皮部发达；形成层环明显；木质部发达；中央大多无髓。维管束为无限外韧型少数为初生构造：皮层宽；中柱小；木质部和韧皮部束少，相间排列；一般无髓。有些有异常构造：如何首乌形成层环外方有数个复合维管束；牛膝根有数轮同心排列的维管束（维管束环的束间形成层不明显）；商路根有数轮同心排列的形成层环及其所形成的三生构造；颠茄、华山参具内涵韧皮部等。 b单子叶植物具初生构造：表层无木栓组织，为表皮，少数表皮细胞分裂为多层细胞，细胞壁木栓化，形成根被，如百部、麦冬等；皮层宽广，占根大部分，内皮层凯氏点或凯氏带明显；中柱小；木质部束及韧皮部束数目少，相间排列，为辐射型维管束；中央有髓。B根类生药粉末的观察木栓细胞；导管；石细胞；纤维（晶纤维或嵌晶纤维）；分泌组织（分泌细胞、分泌腔、及乳汁管）；结晶；淀粉粒。根茎类生药A根茎类生药的组织构造根据中柱、维管束的类型，区别其为蕨类植物、双子叶植物或单子叶植物的根茎。a蕨类类植物根茎：最外层，多为厚壁性的表皮及下皮细胞，基本组织较发达；中柱为原生中柱、双韧管状中柱及网状中柱。b双子叶植物根茎：木栓层；皮层中可见根迹维管束；无限外韧型维管束；中心有髓。C单子叶植物根茎：表皮；皮层中可见叶迹维管束；内皮层明显；散在许多有限外韧型维管束（周韧型维管束）。多含草酸钙针晶束，多存于在黏液细胞中。B根茎类生药的粉末观察：与根类相似。茎藤类生药A组织构造：a双子叶植物茎：草质茎：表皮；皮层为初生皮层，外侧常分化为厚角组织；中柱鞘常分化为纤维或夹杂有石细胞；束中形成层明显；韧皮部大多呈束状或板状；髓射线较宽；髓较大。木质茎：木栓组织；皮层为次生皮层；中柱鞘厚壁组织多连续或断续；形成层环明显；次生韧皮部和次生木质部呈筒状；射线较窄；髓较小。B单子叶植物茎：表皮；散生有限外韧型维管束；中央无髓。C裸子植物茎：木质部主为管胞，无导管。皮类生药主要指裸子植物和双子叶植物的形成层以外的部分，包括木栓组织、皮层和韧皮部。主要有茎干皮、根皮和枝皮。A组织构造：木栓组织、皮层和韧皮部。B粉末观察：木栓细胞、纤维、石细胞、分泌组织及草酸钙结晶等。不应看到木质部的组织。叶类生药A组织构造横切面观察表皮、叶肉及叶脉的组织构造。B叶的表面制片观察表皮细胞、气孔及各种毛茸的形状和特征。可以测定栅表比、气孔指数及脉岛数等数据。C粉末观察 与表面制片相似。花类生药A组织构造：苞片、花萼、花冠、雄蕊或雌蕊等分别作表面制片，观察其组织构造。B粉末观察：花粉粒、花粉囊内壁、毛茸等。果实类生药A组织构造：果皮，分外果皮（1列表皮细胞）、中果皮（为多列薄壁细胞，有细小维管束散在）和内果皮（1层薄壁细胞，有的散在石细胞）B粉末观察；外果皮细胞的形状、垂周壁的增厚状况、角质纹理及非腺毛、腺毛的有无及中果皮、内果皮的细胞形态等特征。种子类生药A组织构造；种皮（多数由数种不同细胞组织构成，少数为1层细胞）、外胚乳、内胚乳或子叶B粉末观察：种皮表面观及断面观的形态特征。全草类生药多数为草本植物的地上部分。菌类生药多数以子实体或菌核入药。观察菌丝、团块、孢子、结晶（有、无）；无淀粉和高等植物显微特征。11动物类生药有动物体、分泌物、病理产物和角甲类之分。12矿物类生药晶体的大小；晶形；色泽等。13中成药显微鉴别A了解组方生药、剂型和制法B根据处方明确专属特征4.理化鉴定理化鉴定(physicochemical identification)是根据药材所含成分及其理化性质，利用某些物理的、化学的或仪器分析方法，来鉴定生药的真实性、纯度和品质优良度。(1)物理常数测定包括相对密度、体积比、旋光度、折光率、硬度、黏稠度、沸点、凝固点、熔点等的测定。这对挥发油、油脂类、树脂类、液体类药(如蜂蜜等)和加工品类(如阿胶等)药材的真实性和纯度的鉴定，具有特别重要的意义。(2)常规检查A水分测定 生药中含有超过安全水分的过量水分，使其霉烂变质，有效成分分解，质量下降。因此，控制其含水量对保证其质量有密切关系。B灰分测定 将生药粉碎、加热，高温灼烤至灰化，则细胞组织及其内含物灰烬成为灰分而残留，所得的灰分称为“总灰分”，包括药材本身所含的无机物（生理灰分）和外来无机物杂质（酸不溶性灰分）。大多数生药的生理灰分应在一定范围以内，故测定其总灰分就可限制药材中的泥沙等杂质。C. 膨胀度 膨胀度是衡量药材膨胀性质的指标，指每1g干燥药材在水或其他规定的溶剂中，在一定的时间与温度条件下膨胀后所占有的体积毫升数。主要用于含黏液质、胶质和半纤维素类药材。如葶苈子、车前子等含有丰富黏液质的果实、种子类药材。D酸败度 酸败度是指油脂或含油脂的种子类药材，在贮藏过程中发生复杂的化学变化，产生游离脂肪酸、过氧化物和低分子醛类、酮类等分解产物，出现异臭味，影响药材的感观性质和内在质量。测定其酸值、羰基值或过氧化值，以控制含油脂种子类药材的酸败程度。E色度 含挥发油类生药，易在贮藏过程中氧化、聚合而致变质。F.吸收度 药典对西红花、红花、莪术规定了吸收度值。G有害物质的检查 在生药品质鉴定和研究中，有害物质的检查是一项重要内容，是确保生药“安全、有效、可控”的首项。目前对生药中有害物质如农药残留、黄曲霉菌毒素及重金属等分析鉴定已引起极大重视。农药残留量 有机氯类农药中滴滴涕(总DDT)和六六六(总BHC)是使用最久、数量最多的农药。黄曲霉毒素 是真菌门曲霉属曲霉菌的产毒菌株所形成的代谢产物，是一种强致癌物质，为双呋喃环骈香豆素，双呋喃环是基本毒性结构。重金属 是指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。比重大于5，如铅、汞。砷盐 药典用古蔡氏法或二乙基硫代氨基甲酸银法两种方法。(3)一般理化鉴别A呈色反应 利用药材的某些化学成分能与某些试剂产生特殊的颜色反应来鉴别。这是最常用的鉴定方法，一般在试管中进行，亦有直接在药材饮片或粉末上滴加各种试液，观察呈现的颜色以了解某成分所存在的部位。B沉淀反应 利用药材的某些化学成分能与某些试剂产生特殊的沉淀反应来鉴别。C泡沫反应和溶血指数的测定 利用皂苷的水溶液振摇后能产生持久性的泡沫和溶解红细胞的性质，可测定含皂苷类成分药材的泡沫指数或溶血指数作为质量指标。D微量升华 是利用生药中所含的某些化学成分，在一定温度下能升华的性质，获得升华物，显微镜下观察其结晶形状、颜色及化学反应。如大黄粉末升华物有黄色针状(低温)、枝状和羽状(高温)结晶，加碱液则呈红色（蒽醌）。斑蝥的升华物为白色柱状或小片状结晶(斑蝥素)，加碱液溶解，再加酸又析出结晶。E显微化学反应 显微化学反应是将生药粉末、切片或浸出液，置于载玻片上，滴加某些化学试剂，显微镜下观察其产生的沉淀、结晶或特殊颜色。如黄连粉末滴加稀盐酸，可见针簇状盐酸小檗碱结晶； F荧光分析 利用生药中所含的某些化学成分，在紫外光或自然光下能产生一定颜色的荧光性质进行鉴别。直接取生药饮片、粉末或浸出物在紫外光灯下进行观察。如国产沉香与进口沉香在荧光显微镜下观察，国产者粉末中部分颗粒显海蓝色，部分显灰绿色荧光；进口者粉末中部分颗粒显竹篁绿色，部分显枯绿色荧光。秦皮水浸出液在自然光下显碧蓝色荧光。有些生药本身不产生荧光，但用酸、碱或其它化学方法处理后，可使某些成分在紫外光灯下产生可见荧光。如芦荟水溶液与硼砂共热，所含芦荟素即起反应显黄绿色荧光。有些生药表面附有地衣或真菌，也可能有荧光出现。荧光分析还可用于检查生药的变质情况。利用荧光显微镜观察生药化学成分存在的部位。如黄连折断面显金黄色荧光，木质部尤为显著，说明在木质部小檗碱含量较高。(4)色谱法色谱法是生药化学成分分离和鉴别的重要方法之一。其原理是借物质在流动相与固定相两相间不同的分配而导致相互间的分离，常用的方法有：薄层色谱(Thin Layer Chromatography，TLC)、气相色谱(Gas Chromatography，GC)、高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)、高效毛细管电泳（High Performance Capillary Electrophoresis，HPCE）、高速逆流色谱(High-Speed Counter-Current Chromatography，HSCCC)、超临界流体色谱（Supercritical Fluid Chromatography，SFC）、圆二色谱（Circular Dichrorism，CD）等。 (5) 光谱法光谱法是指用一定波长的光照射或扫描生药样品，取得特定的图谱和数据，进行生药定性、定量分析。其主要方法有：紫外光谱（Ultraviolet Spectrum，UV）、红外光谱（Infrared Spectrum，IR）、荧光光谱（Fluorescent Spectrum，FS）、核磁共振波谱（Nuclear Magnetic Resonance，NMR）和质谱（Mass Spectrometry，MS）。此外还有原子吸收光谱（AAS）、等离子体光谱（ICP）、X射线荧光光谱（XRF）等。（6）X射线衍射法（XRD）X射线衍射法（X-Ray Diffraction）是研究物质的物相和晶体结构的主要方法。当某一物质进行衍射分析时，该物质被X射线照射而产生不同程度的衍射现象，物质的组成、晶型、分子内成键方式、分子的构型等决定该物质产生特有的衍射图谱。（7）热分析法（Thermal Analysis，TA）许多物质在加热或冷却过程中，常会发生溶解、凝固、分解、化合、吸附、脱吸附、晶体转变等物理或化学变化，这时就会产生吸热或放热现象，研究测定这种变化的技术即为热分析技术。按分析内容分为热重法（TG）、差热分析法（Differential Thermal Analysis，DTA）和差动法（DSC）。其中差热分析法较为常用，即研究样品和参比物在相同环境下等速加温时，两者的温度与时间或与加热温度变化的方法。分析结果用热谱图表示，不同生药的热谱图各有其特征性。（8）电泳法(EP)带有电荷的粒子在电场中随缓冲液定向泳动的现象称为电泳(Electrophoresis)。依据生药中的一些带电荷的成分如有机酸、蛋白质、多肽、氨基酸、生物碱和酶等在一定强度的电场中，在相同的时间内，因各生药所含成分的电荷性质(正电和负电)、电荷量和分子量等不同，造成各成分的泳动方向(向正极或负极)、速度和距离等也不同，从而导致电泳图谱上谱带条数、分布和染色情况各有其特征性。(9)浸出物测定对于有效成分尚不明确或尚无精确定量方法的生药，一般可根据已知成分的溶解性质，选用水或其它适当溶剂为溶媒，测定生药中可溶性物质的含量，以示生药的品质。通常选用水、一定浓度的乙醇(或甲醇)、乙醚作浸出物测定。药典规定降香醇浸物80；黄芪水浸物170；独活醚浸物30。(10)含量测定含量测定方法常用的有：经典分析法(容量法、重量法)、分光光度法、气相色谱法、高效液相色谱法、薄层扫描法、薄层-分光光度法等。5. 现代鉴别方法(1)DNA分子遗传标记技术DNA分子遗传标记技术