樟芝对乳腺癌的作用.doc

樟芝对乳腺癌的作用乳腺癌是乳房腺上皮细胞在多种致癌因子作用下，发生 了基因突变，致使细胞增生失控。由于癌细胞的生物行为发 生了改变，呈现出无序、无限制的恶性增生。它的组织学表 现形式是大量的幼稚化的癌细胞无限增殖和无序状地拥挤成 团，挤压并侵蚀破坏周围的正常组织，破坏乳房的正常组织 结构。乳腺细胞发生突变后便丧失了正常细胞的特性，组织结 构紊乱，细胞连接松散，癌细胞很容易脱落游离，随血液或 淋巴液等播散全身，形成早期的远程转移，给乳腺癌的临床 治愈增加了很大困难。全身重要脏器的转移如肺转移、脑转 移、骨转移等都将直接威胁人的生命，因此乳腺癌是严重危 及人体生命的恶性肿瘤。图 18 乳腺癌乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，占恶性肿瘤发病率的 7-10%，是城市女性恶性肿瘤发病率的第一位。它的发 病常与遗传有关，在 40-60 岁之间，绝经期前后的妇女发病 率较高。樟芝提取液对乳腺癌包括三阴乳腺癌有良好的治疗 效果。Hsin-Ling Yang 等（2006）证实了樟芝对 MCF-7 乳腺癌 细胞的生长具有抑制作用，并能导致 MCF-7 细胞的凋亡。用 浓度为 25-150mg/mL 樟芝发酵液处理 MCF-7 细胞，可见樟芝 发酵液可以使 MCF-7 细胞的活性丧失、染色体浓缩、细胞内 DNA 片段数量和 G1 期细胞数量的累积，从而促进 MCF-7 产 生对樟芝发酵液的浓度依赖性细胞凋亡，其现象通过显微镜 观察 ( 如图 19)。更进一步的研究发现，MCF-7 在凋亡过程中， 伴随有细胞中细胞色素 c 释放、caspase-3 活化和特定蛋白水 解酶聚合酶（ADP-ribose）裂解等过程的发生。同时，伴随有 Bax 蛋白水平的减少，及微量的 Bcl-2 的减少。另外，研究 过程中发现，樟芝可以诱导 MCF-7 细胞中剂量依赖性活性氧（ROS）的生成。整个研究数据显示，樟芝可以对 MCF-7 细 胞的活性产生抑制，诱导其发生细胞凋亡，可用于抗癌药物 的开发。图 19 显微镜下樟芝处理后 MCF-7 细胞细胞分别用 0g/ml，50g/ml，100g/ml 和 150g/ml 的樟芝处理 24h。 每个实验平行三次。You-Cheng Hseu 等（2007）研究发现樟芝可以对乳腺癌 细 胞 MDA-MB-231 中 的 环 氧 化 酶 -2（COX-2） 的 活 性 产 生 抑制作用，并可诱导乳腺癌细胞的凋亡。用不同浓度的樟芝 (40-240g/mL）处理 MDA-MB-231 细胞，结果发现，樟芝可 对其产生剂量和时间依赖性凋亡作用，伴随的现象有染色体 浓缩和体间 DNA 片段增加、细胞色素 c 释放、caspase 3 活化 和特定蛋白水解酶聚合酶（ADP-ribose）裂解等。该研究证实， 樟芝诱导 MDA-MB-231 乳腺癌细胞的凋亡过程中，细胞中的 COX-2 的活性受到了抑制。Hsin-Ling Yang 等（2011）经研究发现樟芝可以通过对 MAPK 信号通路的抑制实现对人乳腺癌细胞的转移能力产生 抑制。侵染试验和伤口愈合修复试验证实樟芝发酵液可以显 着地对 MDA-MB-231 细胞的入侵 / 迁移能力产生抑制作用， ( 如图 20) 所示。图 20 侵染试验和伤口愈合修复试验显示樟芝对 MDA-MB-231 细胞侵润和迁 移能力的抑制作用(A)MDA-MB-231 细胞用 80g/mL 的樟芝预处理 24h 后，进行膜下细胞入侵 试验，并拍摄（放大 200 倍）；细胞的侵润能力皆是相对于未经樟芝处理 细胞的侵润能力而言，未经樟芝处理的细胞的浸染能力为 100%；细胞的侵 染力是由细胞计数板里细胞的数量决定的。(B) 细胞刮伤处理后用 80g/mL 的樟芝处理，用显微镜（放大 100 倍）拍 摄 0h 和 24h 时细胞修复情况，并计算封闭区细胞的数量。结果为三次平行 实验的均值 SD，* 表示与对比值具有显著差异 (p0.05)。Yerra Koteswara Rao 等（2011）证实从樟芝中分离得到的Antrocin 作用于转移性乳腺癌 MDA-MB-231 细胞（MMCs）， 可 通 过 作 为 Akt/mTOR 途 径 的 选 择 性 小 分 子 抑 制 剂 而 实 现 对 MDA-MB-231 细胞的抑制作用，作用示意图 ( 如图 21)。 PI3K/Akt/mTOR 是 一 种 公 认 度 很 高 的 抗 癌 分 子 靶 点 途 径。 Antrocin 对 MMCs 的增殖抑制作用很强，其效果可超过阿霉 素、顺铂，所对应的 IC50 为 0.6M。而且可以防止 MMCs 癌 细胞的聚集，但对于正常非癌变 MCF10A 和 HS-68 细胞无任 何毒副作用。另外，Antrocin 可诱导 MMCs 细胞发生剂量依 赖性细胞凋亡及细胞色素 c 和聚合酶（ADP-ribose）的释放。 Antrocin 也引起了时间依赖性的抗凋亡蛋白表达的减少，包 括 Bcl-2、Bcl-xL 和存活素；而且，可以使细胞中 mRNA 的 数量减少；同时伴随着前凋亡蛋白和胞质细胞色素 c 的增加。 经过分子机制研究发现，antrocin 可抑制 Akt 及其下影响因子 mTOR、GSK-3 和 NF-B 的磷酸化。更进一步的研究发现， 未经 antrocin 处理之前，由小分子干扰 RNA 导致的 Akt 磷酸 化的减少，可增强对细胞生长的抑制作用和凋亡促进作用。 基于以上研究，得出 antrocin 作为 Akt/mTOR 的双重抑制剂， 在临床治疗转移性乳腺癌将有很大的应用前景。第四章樟芝的抗癌作用171图 21 Antrocin 通过 Akt/mTOR 途径作用于转移性乳腺癌 MDA-MB-231 细胞（MMCs）而实现对 MDA-MB-231 细胞的抑制Chuan-Chen Lee 等（2012） 经 研 究 发 现 樟 芝（AC） 对 HER-2/neu 超表达乳腺癌 gMDA-MB-453 和 BT-474 细胞可以 表现出显著的细胞毒性。其中，BT-474 细胞经 AC 作用后的 亚细胞情况 ( 如图 22) 所示。免疫分析显示，AC 对 HER-2/ neu 癌细胞与细胞内的酪氨酸磷酸化均可产生剂量依赖性抑 制。观察发现，经 AC 处理后，细胞内的活性氧（ROS）有 所增加，而抗氧化剂 N- 乙酰半胱氨酸（NAC）则可以有效的 阻止 AC 所诱导的 HER-2/neu 细胞减少和死亡，该实验结果 表明 AC 所导致的 HER-2/neu 的细胞减少和死亡是通过诱导 细胞内 ROS 的产生实现的。另外，AC 可以使细胞中 cyclin D1、cyclin E 和 CDK4 的表达降低，以及伴随有对 PI3K/Akt 和其下游影响因子 GSK-3 和 -catenin 表达的抑制。进一步的研究发现，AC 在诱导细胞凋亡的过程中，细胞中的 G1期细胞大量积累、DNA 碎片增多、线粒体功能出现障碍、细 胞色素 c 释放增多、caspase-3/-9 被活化、PARP 被降解及 Bcl- 2/Bax 表达失调等现象出现。群体集成实验则显示了 AC 可以 对 HER-2/neu 癌细胞的活性产生抑制作用。以上实验数据表 明，AC 可以用于 HER-2/neu 超表达乳腺癌的一种治疗手段。图 22 HER-2/neu 用 AC