沙门氏菌检验ppt.ppt

沙门氏菌检验 革兰氏阴性杆菌 前增菌 增菌 分离 生化试验 多价血清凝集试验 革兰氏染色 前增菌 固体样品 25g 电子天平 液体样品 25mL 25mL吸量管 225mL缓冲蛋白胨水 BPW 量筒 混匀 于36 1 培养8 18h注意 液体样品先用无菌NaOH或HCl调节PH至7 0 稀释瓶或具塞广口瓶 增菌 取阳性前增菌液 1mL 10mLTTB 1mL 10mLSC 42 1 18 24h 培养 36 1 18 24h 培养 科玛嘉显色平板 BS琼脂平板 分离 取阳性TTB试管和阳性SC试管 阳性TTB 1环 BS平板 划线 36 1 40 48h 培养 1环 显色平板 划线 36 1 18 24h 培养 阳性SC 1环 BS平板 划线 36 1 40 48h 培养 1环 显色平板 划线 36 1 18 24h 培养 平板划线示意图 开始处 开始处 沙门氏菌在科玛嘉显色平板上的菌落特征 紫红色菌落 沙门氏菌在BS琼脂平板上的菌落特征 黑色有金属光泽 棕褐色或灰色 菌落周围培养基可呈黑色或棕色 有些菌落呈绿色 周围培养基不变色 生化试验 在阳性BS或显色平板上挑取可疑菌落 三糖铁斜面 先划线 后穿刺 接种赖氨酸脱羧酶试验培养基 营养琼脂平板划线 尿素斜面 先划线 后穿刺 连做 接种针不要灭菌 36 1 18 24h 培养 灭菌后 取1环 加入胰蛋白胨水 培养 2020 3 11 11 可编辑 取阳性胰蛋白胨水 放阳性物品处 靛基质试剂用滴管取1 2滴加入阳性胰蛋白胨水中 结果 多数为阴性 三糖铁斜面培养结果 底层 产H2S 黑色 产气 有气泡 或不产气 红色 产碱黄色 产酸黑色 产硫化氢 尿素斜面培养结果 颜色变黄 产酸 尿素斜面 三糖铁斜面培养结果 底层 产H2S 黑色 产气 有气泡 或不产气赖氨酸脱羧酶试验结果 颜色变化 加深 为阳性尿素斜面培养结果 颜色变黄 产酸 革兰氏染色结果 G 红色 无芽孢 杆菌 凝集试验 从有典型沙门氏菌三糖铁斜面上用接种环取1环 玻片 用记号笔在玻片中间画条线 滴1 2滴灭菌生理盐水 滴1 2滴沙门氏菌多价血清 结果 沙门氏菌多价血清 凝固灭菌生理盐水 不凝固 另 从有典型沙门氏菌三糖铁斜面取1环 染色 在无菌室中固定 到微生物实训室染色 涂片 火焰固定 结晶紫初染 水洗 碘液媒染 乙醇脱色 水洗 吸干 番红或沙磺复染 水洗 干燥 镜检 染色 涂片 在载玻片中央滴一滴生理盐水 用无菌操作法挑取菌种于生理盐水中 调匀并涂成薄膜 注意 生理盐水不宜过多 涂片必须均匀 火焰固定 载玻片通过火焰1 2次固定 不可过热 以载玻片不烫手背为宜 结晶紫初染 涂片置于水平位置 涂片薄膜上加结晶紫1滴 染色1min 水洗 用自来水冲洗至冲下的水无色为止 碘液媒染 加碘液媒染1min 然后用水冲洗至冲下的水呈无色为止 乙醇脱色 用吸水纸将载玻片上的水吸净 用95 的乙醇滴于涂片薄膜上 滴洗至流出的乙醇不出现紫色为止 大约需要20 30s 立即用自来水冲洗乙醇约30s 用吸水纸吸干水分 番红或沙磺复染 在涂片薄膜上滴加番红1滴 染色1 2min 水洗 用水冲洗至冲下的水呈无色为止 干燥 于室温下自然干燥