干生化试剂原理及应用-杨惠聪.ppt

DryChemistry干化学技术与应用漳州市医院检验科杨惠聪 什么是干化学 所谓 干化学 是与传统的 湿化学 即溶液化学 相对比较而言的 它是以被检测样品中的液体作为反应媒介 待测物直接与固化于载体上的干粉试剂反应的一种方式 它与传统湿化学的最大区别就在于参与化学反应的媒介不同 随着生物化学中酶的分离 提纯 存储等技术的发展 传感器 光度计和电极技术的进步 以及计算机应用的普及 干化学技术在近20年里得到了长足的进步 相对于 湿化学 干化学 具有如优点 操作简单单个标本检测速度快 适用于急诊试剂稳定 有效期长结果准确 稳定无需供水系统 VariableDryChemistry干化学之种类 Tablet药片剂Strip试纸条Multi Film多层薄膜 最简单的二层结构 尿试纸条 用于生化分析的试剂载体最简单的是二层结构 在支持层塑料基片上有一试剂层纤维素片 在纤维素片中预固化了全部试剂 常见的是尿生化分析试剂条 尿液中的待测成分与预固相在纤维素片上的试剂直接反应 通过反射光度计测定其颜色的改变 从而计算待测成份的浓度 这种方法只能对待测成分进行定性或半定量测定 这样就限制了它在其它须准确定量的标本的应用 稍加改进的三层结构 在试剂层上加一多孔胶膜过滤层 其作用是将样品中的杂质过滤掉 并起保护试剂层作用 常见的是微量法测定葡萄糖的试剂条 三层试剂载体的测定光路是通过透明的塑料基片 而不经过最上面的过滤层 这样消除了样品中干扰成分的影响 保证了待测成分测定的稳定性和准确性 TrueDryChemistry真正之干化学Multi CoatingSlide多涂层薄膜干试剂片它集现代化学 光学 酶工程学 化学计量学和计算机技术于一体 TypesofSlides干片类型 CM RT PM IR Colorimetric RatePotentiometricImmuno RateSlideSlidesSlides比色 速率干片电势法干片免疫 速率法干片 DrySlide干片Methodology方法学 CM RTSlide Measurechemistryconcentrationbycolordevelopment通过颜色的变化来测定化学物浓度 Colorimetric RateSlide比色 速率法干片 比色 速率法干片 比色 速率法干片主要用于常规生化项目的测定 干片模式图显示了一个临床化学比色 速率法干片模式简图 在这个试剂片中 多种反应试剂被固化在一张透明聚酯膜上 上面覆以多孔的扩散层 然后被夹在一个塑料结构中 如图所示 共有4个功能层 扩散层 分布层 试剂层 指示剂层和支持层 每个试剂片的层数视所采用的分析方法而定 干片的大小大致与一枚邮票相同 显色剂层呈现的颜色深浅与待测物浓度成正比 ComponentsofOneSlide干片之基本组成 Sample标本 SpreadingLayer分布扩散层 Uniformlydistributesthesample均匀分布标本 它由TiO2 BaSO4和醋酸纤维素构成的100 300微米的多空聚合物 聚合物的孔径在1 5 30微米之间 分布层的孔径和厚度将取决于特定分析的需要 分布层的中空体积占40 90 这种毛细网状结构能使样品溶液快速 均匀地分布到下层 当一滴样品约10微升加在试剂片上后 毛细作用将样品迅速吸入多空扩散层 但样品在一瞬间被下面的凝胶层所排斥 因为凝胶层在接受血清组份之前 必须先生成水合物 SpreadingLayer分布层 Uniformlydistributesthesample均匀分布标本Filtersoutlargemolecules过滤大分子Maycontainreagentstobreakupmolecules byphysicalorbychemical可包含打断大分子的试剂 物理性和化学性Abackgroundforreflectivepurpose提供反射测定的背景 Uniformlydistributethesample均匀分布标本 Uniformlydistributethesample均匀分布标本 Uniformlydistributethesample均匀分布标本 Uniformlydistributethesample均匀分布标本 Uniformlydistributethesample均匀分布标本 Uniformlydistributethesample均匀分布标本 扩散层不仅可阻留细胞 结晶和其他小颗粒 它也可以根据需要让大分子 如蛋白质等滞留 当待检样品通过扩散层后 可以消除溶液中影响检测反应干扰物质 扩散层中的TiO2和BaSO4 一方面可用来掩盖待检样品中的有色物质 使反射光度计的测定结果不受影响 同时这些反光化合物也给干片底层的显色层提供反射背景 在一些特定试剂片中 扩散层中还含有选择性阻留某种成份或启动某种反应的物质 以提高分析的特异性 ABackgroundforLightReflection光反射的背景 ReagentLayer试剂层 Containsreagentindryform包含干性试剂Controleachreactionsequence控制反应顺序 Spreadinglayer分布层Reagentlayer试剂层 Indicatorlayer指示层Supportlayer支持层 试剂层 在化学试剂层中 根据实际测定的需要 可由数层至数十个功能试剂层组成 反应区的功能是将待测物通过物理 化学或生物酶学等反应转化为可与显色剂结合的化合物 试剂层中按照反应的顺序涂布了不同的化学试剂 使反应按照预先的设定依次进行 针对不同检测项目的个性化设计为化学反应提供了最理想的物理和化学反应环境 这就是为什么干化学技术能够确保更准确的试验结果 尿酸干片是使用清除剂层的一个示例 清除剂层含有抗坏血酸氧化酶 用于将抗坏血酸 维生素C 一种内源性干扰物 转化 对试剂层中所发生反应不产生干扰 2020 3 13 29 可编辑 IndicatorLayer指示剂层 Drivereactiontowardcompletion将反应驱于完成Containsadyetoproduceacoloredcomplex包含染料以产生显色复合物 Spreadinglayer分布层Reagentlayer试剂层 Indicatorlayer指示层Supportlayer支持层 指示剂层 反应底物进入指示剂层 在这里发生显色反应 此层包含染料或相似的指示剂 使反应产物到达指示剂层后生成了有色化合物 其颜色变化与分析物浓度成比例 被反射光检测 SupportLayer支持层 Provideforasupportingbase提供反应支持基Allowslightstopassthrough允许光路通过 Spreadinglayer分布层Reagentlayer试剂层 Indicatorlayer指示层Supportlayer支持层 支持层 此层是透明塑料制成 起到支持其它层的作用 且允许光线百分之百透射 以便对有色复合物进行测量 Detector Detector Transmission Reflection透射与反射 BUNReactionResult LowConc 低浓度 HighConc 高浓度 Transmission Reflection透射与反射 PotentiometricSlides电势电位法干片 ISE IonSelectiveElectrodeTechnology离子选择法电极技术3testsareperformedonVitrosSystemSodium Na 钠离子Potassium K 钾离子Chloride Cl 氯离子Measuresthepotentialdifferencebetweenthetwoelectrodes测定两电极间电势的不同 PMSlide 电势法干片 V Membrane M Cl AgCl Ag Membrane M Cl AgCl Ag aI ar Sample S1 reference S3 S2 S4 Paperinplastic saltbridge V OneDryISESlide ISECell 离子 钠 钾 氯 检测是干化学检测项目中的传统优势项目 采用离子法干片 其设计采用直接电势法 样本无需稀释 离子干片是由纸桥将两个离子选择性电极相连 通过电压表来测量患者样本和已知参比液之间的电势差 从而计算出钠 钾 氯的离子浓度 Immuno RateSlides免疫 速率法干片 ExamplesofIRtests 免疫速率法干片举例 Digoxin Phenytoin Phenobarbital CRP地高辛 苯妥英 苯巴比妥 C 反应蛋白Competitive Non competitiveIRformat竞争与非竞争性免疫速率反应模式Liquidsubstrateisrequired需要液体反应底物 IR 竞争法 例如地高辛 读数时采用了多点速率法来检测分析物浓度 分析物与酶标抗原竞争有限数量的抗体结合位点 加入含底物的免疫洗液 一方面洗去未结合物质 另一方面抗原抗体复合物与无色底物反应显色以670nm波长加入免疫洗液并孵育2 5min后读数 通过速率的变化采计算分析物浓度 发射光密度与分析物浓度成反比 非竞争法 CRP 读数时采用定点速率法 待测物与固相抗体 酶标抗体形成夹心 三明治 加入含底物的免疫洗液后洗去读数视窗区域未结合物质 抗原抗体结合物与底物反应显色 孵育2 5分钟时读数670nm发射光密度与待测物浓度成正比 Immuno RateSlide免疫 速率法干片 SpreadingLayer分布层 ReceptorLayer受体层 GelatinLayer胶乳层 Estarsupportlayer聚酯支持层 Enzyme Antibody Enzyme labeledAntigen GelatinReagent ApplicationofSample应用举例 PatientSample病人标本 EnzymeLabeledHapten酶标半抗原 ImmobilizedAb EnzymeLabledHapten ImmobilizedAb PatientSample EnzymeLabledHapten AntigeninSample ImmobilizedAb GelatinReagent GelatinReagent CompetitiveBinding竞争性结合 BindingAg FreeAg结合抗原与游离抗原 GelatinReagent S