第二十一章 免疫学检测原理.doc

第二十一章 免疫学检测原理 第一部分 学习习题 一、填空题 1抗原抗体反应的最大特点是_。2颗粒性抗原与相应抗体结合后，可以发生_反应；可溶性抗原与相应抗体结合后，在比例合适的情况下，可以发生_反应。3细胞因子的检测可以分为_、_、_三类。 二、多选题 A型题 1抗原-抗体反应所不具有的特征是： A分子表面的可逆结合 B具有高度特异性 C出现肉眼可见的反应需要适当的比例 D二者结合后，立即出现可见反应 E. 二者反应受电解质、酸碱度和浓度的影响 2检测可溶性抗原不能用： AELISA B单向琼脂扩散 C直接凝集反应 D反向间接凝集反应 E协同凝集试验 3.不属于抗原抗体反应的是： A. 酶联免疫吸附试验（ELISA） B锡克试验 C抗球蛋白试验 D放射免疫分析法（RIA） EE花环试验 4乳胶妊娠诊断试验属于： A协同凝集反应 B反向间接凝集反应 C直接凝集反应 D间接凝集反应 E间接凝集抑制反应 5下列免疫学测定方法敏感性最高的是： A沉淀反应 B凝集反应 CELISA D放射免疫测定 E补体结合试验 6抗原抗体反应最适宜的PH值为： A. 54.5 B4.55 C56 D68 E89 7用免疫荧光技术间接法检测组织中的抗原，应将荧光素标记： A. 抗原 B相应抗 C抗免疫球蛋白抗体 D抗原-抗体复合物 E抗C3抗体 8用ELISA双抗体夹心法检测抗原A时，固相载体的包被物是： A. 酶标抗A抗体 B未标记的抗A抗体 C酶标抗原A D未标记的抗球蛋白抗体 E酶标抗球蛋白抗体 9用免疫荧光技术直接法检测病原微生物时，荧光素应标记在： A. 微生物上 B抗人Ig抗体上 C抗原-抗体复合物上 D.抗微生物抗体上 E抗C3抗体上 10诊断DTH的皮肤试验，在前臂内注射少量可溶性抗原后，观察时间为： A10分钟 B.30分钟 C.6小时 D12小时 E.72小时 11可以用于对抗原进行免疫组化定位的方法是： ANorthern Blot BWestern Blot C溶血空斑试验 D免疫荧光技术 E混合淋巴细胞反应 12不能刺激T细胞增殖分化的物质是： A. 结核杆菌纯蛋白衍生物（PPD） B.刀豆蛋白A（Con A） C植物血凝素（PHA） D细菌的脂多糖（LPS） E美洲商陆（PWM） 13用ELISA双抗体夹心法检测血清中甲胎蛋白（AFP），应选择的固相包被物是： A已知AFP B酶标记AFP C抗AFP抗体 D酶标记抗AFP抗体 E待检血清 14能够定量测定待检物的免疫学试验方法是： A环状沉淀实验 B单向琼脂扩散 C抗球蛋白实验 D补体结合试验 E对流免疫电泳 15用于检测细胞免疫功能的皮肤试验是： A青霉素皮试 B锡克试验 C结核菌素试验 D破伤风抗毒素皮试 E白喉抗毒素皮试 B型题 AWestern Bloting B细胞毒实验 C溶血空斑实验 DE花环实验 EPHA淋巴细胞转化实验 1测T细胞数量 2测定抗体生成细胞数 3测定NK细胞杀伤活性 4测定非特异性细胞免疫功能 A测定Tc细胞的效应功能 BIgG测定 CSmIg测定 DT细胞亚群测定 E淋巴细胞转化实验 5PHA可用于 6免疫比浊法可用于 7流式细胞仪可用于 8细胞毒实验可用于 X型题 1ELISA A酶与相应底物作用产生颜色 B抗原或抗体可以特异性吸附于固相载体上 C可以用酶标测定仪作定量分析 D蛋白酶是其标记酶 E双抗体夹心法可以检测未知抗体 2能测定抗原的实验包括 A絮状沉淀试验 B间接凝集试验 C火箭电泳 D酶联免疫吸附试验 E荧光免疫技术 三、名词解释 1酶联免疫吸附试验 2放射免疫分析法 3免疫荧光技术 4凝集反应 5直接凝集反应 6间接凝集反应 7对流免疫电泳 四、问答题 1、从外周血分离淋巴细胞的方法有哪些？2、简述细胞毒试验的原理3、简述细胞因子的检测原理 第二部分 参考答案 一、填空题 1特异性2凝集、沉淀3免疫学检测法、生物活性检测法、分子生物学检测法 二、多选题 A型题 1. D 2. C 3.E 4.E 5.D 6.D 7.C 8.B 9.D 10.E 11.D 12 .D 13.C 14B 15.C B型题 1.D 2.C 3.B 4.E 5.E 6.B 7.D 8.A X型题 1.ABCD 2.ABCDE 三、名词解释 1酶联免疫吸附试验（ELISA）：将已知抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面上进行，用洗涤方法使固相上的抗原抗体复合物与液相中游离抗原或抗体分开。用于抗原或抗体的定量检测。2放射免疫分析法（RIA）：用放射性核素标记抗原或抗体进行的免疫学检测。常用于微量抗原或抗体的定量检测。3免疫荧光技术：用荧光素与抗体连接成荧光抗体、再与待检标本中的抗原反应，在荧光显微镜下观察抗原抗体反应的部位，用于抗原的定位检测。4凝集反应：颗粒性抗原（如细菌、细胞等）与相应的抗体结合后形成肉眼可见的凝集块。5直接凝集反应：将细菌或红细胞与相应抗体直接反应，出现细菌或红细胞凝集的现象。6间接凝集反应：将可溶性抗原包被（结合）在无关载体颗粒表面，再与相应抗体反应后，出现载体颗粒凝集的现象。7对流免疫电泳：在琼脂糖电泳凝胶的正负极端打孔，并分别加入抗体和抗原，在电场的作用下，抗体和抗原作定向扩散，其中抗体由于电渗作用，扩散方向为正极向负极，而抗原则由于电泳作用，扩散方向为负极向正极，在二着比例适当的位置出现沉淀线。用于抗原或抗体的定性检测。 四、问答题 1. 从外周血分离淋巴细胞的方法有哪些？答案（1）依靠淋巴细胞物理特征的分离方法* 葡聚糖-泛影葡酸（Ficoll）等密度梯度离心法，根据淋巴细胞的比重将其与其他血细胞成分分离。* 尼龙绵分离法：根据B淋巴细胞粘附于尼龙棉的特性，将B细胞与T细胞分开。（2）依靠表面标记的分离方法* E花环分离法：T细胞表面的CD2是绵羊红细胞（SRBC）受体，能使T细胞与SRBC结合形成E花环，因花环形成后比重变大，采用密度梯度离心即可将T细胞从其他淋巴细胞中分离出来。* 免疫磁珠分离法：将某种表面标记特异性抗体包被在磁性微珠上，与磁珠交联的抗体能够特异性结合具有这种表面标记的细胞结合，然后用强磁场可将具有这种表面标记的细胞分离出来。* 流式细胞术分离法：利用各种荧光素标记的表面标记特异性抗体，使不同表面标记的细胞结合上不同的荧光素，借助荧光活化细胞分选仪（FACS）将各种细胞分离开来。2. 简述细胞毒试验的原理答案：（1）对于可溶性物质（如抗体、补体、肿瘤坏死因子等）导致的靶细胞破坏，可以采用简单的染色法来进行检测，原理是当靶细胞破坏时，其胞膜完整性被破坏，当用染料（如台盼蓝、酚红、结晶紫等）染色时，损伤的细胞浆将会着色，而未受损的靶细胞因胞膜完整，会拒染。结合光密度的测定，能够进行定量检测。（2）对于效应细胞（如CTL、NK等）对靶细胞的损伤，可以采用同位素释放法、酶释放法来进行测定。其原理如下：* 51Cr释放法：用Na251CrO4标记靶细胞，若效应细胞损伤靶细胞，51Cr将释放进入上清，检测上清中的放射活性，即可计算出效应细胞对靶细胞的杀伤活性。* 酶释放法：靶细胞内具有多种酶，当靶细胞受损时，这些酶将从胞内释放至上清，通过上清中酶活性的检测，可以计算出效应细胞杀伤靶细胞的活性。最常用的酶是乳酸脱氢酶。（