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文档简介

目的要求基本原理实验用品方法与步骤实验结果实验报告 目的要求 掌握考马斯亮蓝的染色方法 了解细胞内微丝的分布 实验原理 细胞质中错综复杂的纤维网络结构称为细胞骨架 主要包括微管 微丝和中间纤维 考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白染料 它可以使多种蛋白质着色 由于有些细胞骨架纤维在该实验条件下不够稳定 有些类型的纤维太细 在光学显微镜下无法分辨 因此我们看到的主要是微丝组成的张力纤维 张力纤维在体外培养细胞中普遍存在 与细胞的附着 维持扁平铺展的形态有关 实验用品 1 器材 烘箱 青霉素小瓶 培养细胞飞片 水浴锅 载玻片 盖玻片 2 试剂 0 01mol LPBS M 缓冲液 1 TritonX 100 M缓冲液 0 2 考马斯亮蓝染液 3 戊二醛 PBS溶液 3 实验材料 洋葱内表皮 培养细胞飞片 方法与步骤 利用培养细胞为材料进行骨架显示时 先从培养箱中取出培养细胞飞片 弃去培养液 加入PBS漂洗 加入1 TritonX 100 M 缓冲液处理15分钟 M缓冲液轻轻洗3次 然后加入3 戊二醛 PBS液固定15分钟 PBS冲洗数次 0 2 考马斯亮蓝R250染色30分钟 水洗 镜检 以洋葱为材料进行细胞骨架显示时 先撕取一片洋葱内表皮 置于小平皿中进行操作 其余步骤相同 注意事项 PBS冲洗应适度 否则洋葱表皮细胞吸收大量水分易使液泡过分涨大 影响实验结果的观察 实验操作中 Triton的抽提是最关键的步骤 应注意抽提适度 实验结果 洋葱内
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