[动物微生物学及免疫学课件]血清学反应.ppt

第十四章血清学反应 血清学反应 抗原抗体在体外结合的反应 因实施反应的某些重要因素是含抗体的动物血清 故名血清学反应 血清学反应具有严格的特异性和较高的敏感性 因此可用抗原或抗体的已知一方检测未知的另一方 作为传染病的辅助诊断和微生物的鉴定 一 凝集反应 1 直接凝集反应 细菌 红细胞等颗粒性Ag与相应Ig混合以后 在电解质参与下 经过一定时间Ag颗粒相互凝集形成肉眼可见凝集块 参与凝集反应的Ag称凝集原 Ig称凝集素 平板法和试管法 2 间接凝集反应 先将可溶性Ag或Ig吸附于一种与免疫无关的有一定大小的颗粒载体表面制成固相Ag或Ig 再与相应的待检Ig或Ag结合产生的反应 分为两类 间接血球凝集反应 HA 间接血球凝集抑制反 HI 间接血球凝集反应 HA 阳性 间接血球凝集抑制反 HI 阳性阴性 二 沉淀反应 胶体状态的可溶性Ag 如细菌和寄生虫的浸出液 组织浸出液 培养滤液 动物血清等 与相应Ig混合后 经一定时间 形成肉眼可见的沉淀物 临床上常用于诊断炭疽 梅素 鼠疫 猪丹毒 气肿疽等传染病 沉淀反应分为以下三种 实验管 4mm小管已知Ig层叠未知Ag交界面白色沉淀环对照管 4mm小管已知Ig层叠生理盐水交界面无沉淀环 1 环状沉淀反应 Ascoli反应 2 絮状沉淀反应 将Ag和相应在试管内或凹玻片上混匀 经过一定时间性 出现肉可见絮状或颗粒状不溶性沉淀物为阳性 如诊断梅毒的康氏反应 及用标准类毒素测定抗毒素血清效价的絮状试验等 3 琼脂扩散试验 单相琼扩 将已知 1 10稀释 加入等量的1 琼脂 56 管 或平板 中 凝固后 于其上 打孔 加待检Ag 孔中 置37 湿合感作 2 3h后可见白色沉淀带 双相琼扩 1 琼脂凝胶制成平板后 在上面按设计图形打孔 在孔内分别加Ag和Ig 放密闭湿盒中 将使之双相扩散而形成沉淀带 单相琼扩双相琼扩含已知Ig琼脂被检血清 Ig 待检Ag已知Ag 三 补体结合反应 溶菌反应 某些细菌 霍乱弧菌 与相应的抗体混合以后 如有补体参加 则细菌发生溶解的反应 称溶菌反应 溶血反应 红细胞与相应的抗体 溶血素 混合以后 如有补体以参加 则红细胞发生溶解的反应 称溶血反应 补体的特点 1 补体是酶类物质 但均以无活性的前体形式存在于血清中2 动物血清中尤其以豚鼠血清含量最高 故多用豚鼠的新鲜血清作为补体的来源3 补体性质不稳定 易失活 经56度30分处理即灭活 4 补体本身没有特异性能与任何一组抗原抗体复合物相结合 一但结合后不再游离 5 补体不与单独的抗原或单独的抗体相结合 补体结合反应的概念 补体结合反应 简称补反CFT 是指在补体参加下 以绵羊红细胞 Ag 和抗绵羊溶血素 Ig 作为指示系统的抗原抗体反应 补体结合反应的原理 补反包括两个系统五种成分 一是被检系统 溶菌系 中的已知Ag 待检Ig及仅供一组Ag Ig系统反应的定量补体 二是指示系统 溶血系 中的红细胞和溶血素 首先是溶菌系统的抗原与抗体复合物与补体相互混合后产生的反应 其次为了测知溶菌系统中补体是否被利用 再加入溶血系 绵红细胞和抗绵溶血素 作为指示系统 以观察因补体游离所产生的溶血情况 如果反应的结果是不溶血为诊断阳性 发生了溶血为诊断阴性 操作与结果 操练时 分两步进行 将待检系统的Ag Ig与补体三种成加入试管内 于37度水浴作用30分钟 然后加入指示系统 于37 水浴作用30分钟 观察结果 结果观察 不溶血为诊断阳性 发生溶血为阴性 四 中和实验 病毒或毒素与相应Ig以一定比例混合后 经过一定时间 病毒丧失对易感动物的致病性 或消除毒素在试管内的溶血现象 谓之中和反应 该试验既可在体外进行 也可在体内进行 可利用小动物 鸡胚 活细胞等作试验 操作如下 五 免疫荧光法 荧光素 如异硫氰酸荧光素 FITC 丽丝胺罗丹明B RB200 等受紫外线照射后可发荧光 FITC为绿色 RB200为玫瑰红色 荧光Ig 将荧光素 染料 连接在提纯的Ig分子上 这种用荧光素标记的Ig 免疫荧光法反应原理 荧光素与Ig分子结合后 并不改变其与相应Ag结合的特性 当用这种荧光Ig对受检标本染色后 在荧光显微镜下观察 可见暗视野中闪烁荧光的细菌等 根据这种现象便能对标本中相应Ag进行鉴定和定位 免疫荧光技术示意图 被检Ag 荧光Ig荧光复合物被检Ag 标准Ig 荧光抗I