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第十七章基因重组与基因工程一、选择题(一)A型题1. 限制性内切酶切割DNA后产生()A. 5-磷酸基和3-羟基的末端B. 3-磷酸基和5-羟基的末端C. 5-磷酸基和3-磷酸基的末端D. 5-羟基和3-羟基的末端E. 以上都不是2. 可识别并切割特异DNA序列的称()A. 限制性外切酶B. 限制性内切酶C. 非限制性外切酶D. 非限制性内切酶E. DNA酶3. 在重组DNA技术中催化形成重组DNA分子的是DNA()A. 聚合酶B. 解链酶C. 连接酶D. 拓扑酶E. 内切酶4. 型限制性内切酶()A. 有内切酶和甲基化酶活性且通常识别回文序列B. 仅有内切酶活性C. 限制性识别甲基化的核苷酸序列D. 有外切酶和甲基化酶活性E. 仅有外切酶活性5. 下列哪种酶作用时需要引物()A. 限制酶B. 末端转移酶C. 逆转录酶D. DNA连接酶E. 解链酶6. 与DNA聚合酶相比，Klenow酶没有()A. 35外切酶活性B. 53聚合酶活性C. 53外切酶活性D. 53合成酶活性E. 转移酶活性7. 关于cDNA的正确提法是()A. 同mRNA互补的单链DNAB. 同mRNA互补的双链DNAC. 以mRNA为模板合成的双链DNAD. 以DNA为模板合成的双链DNAE. 以上都不是8. 在重组DNA技术中的分子克隆是指()A. 制备单克隆抗体B. 制备多克隆抗体C. 有性繁殖DNAD. 无性繁殖DNAE. 构建重组DNA分子9. 在下述双链DNA序列(仅列出其中一条链序列)中不属于完全回文结构的是()A. AGAATTCTB. TGAATTCAC. GGAATTCCD. CGTTAAGCE. AGATATCT10. DNA克隆依赖DNA载体的()A. 自我表达能力B. 自我转录能力C. 自我复制能力D. 卡那霉素抗性E. 青霉素抗性11. 在已知部分序列的情况下，获得目的DNA最常用的是()A. 化学合成法B. 聚合酶链反应C. 筛选cDNA文库D. 筛选基因组文库E. DNA合成仪合成12. 重组DNA技术常用的质粒DNA是()A. 病毒基因组DNA的一部分B. 细菌染色体外的独立遗传单位C. 细菌染色体DNA的一部分D. 真核染色体DNA的一部分E. 真核染色体外的独立遗传单位13. 某限制性内切酶按GGGCGCCC方式切割产生的末端突出部分含()A. l个核苷酸B. 2个核苷酸C. 3个核苷酸D. 4个核苷酸E. 5个核苷酸14. 某限制性内切酶切割5-GGGGGGAATTCC-3序列后产生()A. 5突出末端B. 3突出末端C. 5及3突出末端D. 5或3突出末端E. 平端15. 直接筛选目的DNA的方法是()A. 电泳B. 分子筛C. 分子杂交D. 氨苄青霉素抗性E. 青霉素抗性16. 不能用作克隆载体的DNA是()A. 质粒DNAB. 逆转录病毒DNAC. 细菌基因组DNAD. 腺病毒DNAE. 噬菌体DNA17. cDNA文库包括该种生物的()A. 某些蛋白质的结构基因B. 所有蛋白质的结构基因C. 所有结构基因D. 内含子和调控区E. 以上全包括18. 在基因工程中，DNA重组体是指()A. 不同来源的两段DNA单链的复性B. 目的基因与载体的连接物C. 不同来源的DNA分子的连接物D. 原核DNA与真核DNA的连接物E. 两个不同的结构基因形成的连接物19. 基因组代表一个细胞或生物体的()A. 部分遗传信息B. 整套遗传信息C. 可转录序列D. 非转录序列E. 以上都不是20. 基因工程使用的质粒通常存在于()A. 细菌染色体B. 酵母染色体C. 细菌染色体外D. 酵母染色体外E. 以上都不是21. 就分子结构而论，质粒是()A. 环状双链DNA分子B. 环状单链DNA分子C. 环状单链RNA分子D. 线状双链DNA分子E. 线状单链DNA分子22. 最常用的筛选转化细菌的方法是()A. 营养互补筛选B. 抗药性筛选C. 免疫化学筛选D. PCR筛选E. 分子杂交筛选23. 在对目的基因和载体DNA加同聚物尾时，需采用()A. 逆转录酶B. 多聚核苷酸激酶C. 引物酶D. RNA聚合酶E. 末端转移酶24. 用于重组DNA的限制性内切酶识别核苷酸的()A. 正超螺旋结构B. 负超螺旋结构C. -螺旋结构D. 回文结构E. 锌指结构25. 构建基因组DNA文库时，首先需分离细胞的()A. 染色体DNAB. 线粒体DNAC. 总mRNAD. 总tRNAE. 总rRNA26. 在利用lacZ失活的蓝白筛选法中，IPTG的作用是()A. 诱导宿主的肽的合成B. 作为显色反应的指示剂C. 直接分解X-galD. 作为酶的作用底物E. 作为显色剂(二)B型题A. 基因载体的选择与构建B. 外源基因与载体的拼接C. 重组DNA分子导入受体细胞D. 筛选并无性繁殖含重组DNA分子的宿主细胞E. 表达目的基因编码的蛋白质27. 需要限制性内切酶的是()28. 将获得DNA克隆的是()29. 要应用转化、转染或感染技术的是()A. 5突出末端B. 3突出末端C. 5及3突出末端D. 5或3突出末端E. 平端。30. 某识别6个核苷酸序列的限制性内切酶切割5-AGCTGAATTC-3产生()31. 某识别6个核苷酸序列的限制性内切酶切割5-CTGCAGAGCT-3产生()32. 某识别6个核苷酸序列的限制性内切酶切割5-AGGTTAACAG-3产生()A. 分B. 切C. 接D. 转E. 筛33. 获得目的基因属于基因工程中的()34. DNA连接酶用于基因工程中的()35. DNA重组子转化宿主细胞是()A. 分B. 切C. 接D. 转E. 筛36. 限制酶切割目的基因和载体是()37. 筛选含有重组体的宿主细胞是()A. 限制酶B. DNA连接酶C. 逆转录酶D. Taq DNA聚合酶E. 碱性磷酸酶38. 识别DNA回文结构，并对其双链进行切割的是()39. 用于聚合酶链反应的酶是()40. 将目的基因与载体进行拼接的是()A. RNA聚合酶B. 末端转移酶C. 碱性磷酸酶D. 逆转录酶E. 核苷酸酶41. 切除DNA末端磷酸基用()42. 在DNA 3-OH端加同聚物尾用()43. 合成cDNA用()(三)D型题44. 在基因工程中，可用碱性磷酸酶()A. 防止DNA自身环化B. 同多核苷酸激酶一起进行DNA的5-末端标记C. 制备突出的3-末端D. 制备突出的5-末端E. 将脱氧核苷酸加到DNA的3-OH上45. 质粒DNA ()A. 是基因组DNA的组成部分B. 具有独立复制功能C. 具有编码蛋白质的功能D. 含有目的DNAE. 含有各种抗生素抗性基因46. 分子克隆又称()A. 单克隆抗体制备B. DNA提取C. DNA克隆D. 基因克隆E. 重组DNA47. 属于限制酶的有()A. EcoRB. PstC. DNaseD. RNaseE. Klenow片段(四)X型题48. 关于限制酶叙述正确的()A. 是外切酶而不是内切酶B. 在特异序列对DNA进行切割C. 同一种限制酶切割DNA形成的末端是相同的D. 一些限制酶错位切割双链DNA，产生粘性末端E. 一些限制酶在识别位点沿对称轴切割双链DNA，产生平端49. 在分子克隆中，目的DNA可来自()A. 原核细胞染色体DNAB. 真核细胞RNA逆转录获得的cDNAC. 真核细胞染色体DNAD. 聚合酶链反应E. 人工合成的DNA50. 从基因组DNA文库或cDNA文库分离、扩增某一感兴趣基因的过程就是()A. 基因克隆B. 分子克隆C. 重组DNA技术D. 构建基因组DNA文库E. 构建cDNA文库51. 可用作克隆基因载体的DNA有()A. 质粒DNAB. 噬菌体DNAC. 病毒DNAD. 大肠杆菌基因组DNAE. 真核细胞基因组DNA52. 将重组体导入宿主细胞的方法有()A. 接合B. 转化C. 转座D. 转染E. 感染53. DNA克隆过程包括()A. DNA的制备和酶解B. 不同来源DNA的拼接C. 核酸分子杂交D. 细菌的生长和繁殖E. RNA的制备54. 可用于重组DNA的目的基因有()A. mRNAB. tRNAC. rRNAD. 基因组DNAE. cDNA55. 重组DNA时，外源基因又称()A. 目的基因B. 目的RNAC. 目的DNAD. 外源RNAE. 染色体外基因二、名词解释56. 基因重组57. 克隆58. 限制性核酸内切酶59. Klenow片段60. 基因文库61. 目的基因62. cDNA文库63. 感受态细胞64. 转化65. 转染66. 转导67. MCS68. 载体69. 质粒三、填空题70. 就克隆1个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必须包括_、_、_3个部分。71. 连接酶催化核酸连接形成_键，有DNA连接酶和RNA连接酶之分。72. DNA聚合酶的Klenow大片段是切割DNA聚合酶得到的分子量为76kD的大片段，具有 _和_ 两种活性。73. DNA重组连接的方法大致分为4种_、_、_、_。74. 一个完整的基因克隆过程包括：目的基因的获取，_的选择与改造，_的连接，重组DNA分子导入受体细胞，筛选出含目的基因重组DNA的转化细胞。75. 根据采用的克隆载体性质不同，将重组DNA分子导入细菌的方法有_、_、_及感染。76. 基因组文库含有组织或细胞的_信息，cDNA文库含有组织或细胞的_信息。77. 重组DNA分子是由_和_拼接而成。四、问答题78. 简述基因克隆及其基本过程。79. 何谓限制酶？大多数限制酶识别序列的结构特点是什么？80. 简述目的基因及主要来源和获取途径。81. 何为质粒？为什么质粒可作为基因载体？82. 怎样将一个平端DNA片段插入EcoR限制位点?83. 什么是蓝白筛选法？84. 什么是Klenow酶？有哪些活性？在基因工程中有什么作用？85. 质粒载体须具备哪些特征？86. cDNA文库与基因组文库有何不同？答案一、选择题1.A2.B3.C4.B5.C6.C7.C8.D9.D10.C11.B12.B13.B14.A15.C16.C17.A18.B19.B20.C21.A22.B23.E24.D25.A26.A27.A28.D29.C30.A31.B32.E33.A34.C35.D36.B37.E38.A39.D40.B41.C42.B43.D44.AB45.BE46.CD47.AB48.BCDE。限制性识别双链DNA中的特定位点，并水解该点磷酸二酯键，是内切酶。若在识别序列的2个对称点切开DNA双链，则产生带单链尾的粘性末端；若切割点是识别序列的对称轴，则产生平端或钝端。49.ABCDE。目的DNA来自任何感兴趣的基因，可通过制备基因组DNA、cDNA文库、PCR、人工合成等方法获得。50.ABC。构建基因文库和cDNA文库是基因克隆(分子克隆、重组DNA技术)的一个过程。51.ABC。用来克隆和扩增DNA片段的克隆载体应能够导入宿主细胞并在宿主细胞内复制。52.BDE。参见64-66题。53.ABCDE。DNA克隆基本程序包括：分目的基因和载体的获得(DNA的制备和酶解及以mRNA指导合成cDNA等)；接目的基因和载体的连接；转重组体的导入(在宿主细胞中生长和繁殖)；筛重组体的筛选(平板筛选及杂交等技术)。54.DE55.AC二、名词解释56. 即DNA重组，是将不同来源的DNA分子通过共价连接(磷酸二酯键)形成新DNA分子的过程。57. 是指通过无性繁殖产生与亲代完全相同的子代群体。58.简称限制酶或内切酶，是由细菌产生的一种能识别双链DNA中的特定位点，并水解该点磷酸二酯键的核酸内切酶。59. 用枯草杆菌蛋白酶将DNA聚合酶I裂解为36kD和76kD两个片段，大片段称为Klenow片段。60. 采用限制酶将基因组DNA切成片段，每一DNA片段都与一个载体分子拼接成重组DNA。将所有的重组DNA分子都引入宿主细胞并进行扩增，得到的分子克隆群，称为基因文库。61. 是指所要研究或应用的基因，也就是需要克隆或表达的基因。62. 以mRNA为模板，利用逆转录酶合成与mRNA互补的cDNA，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌，扩增为cDNA文库。63. 具备接受外源DNA能力的宿主细胞。64. 在基因克隆技术中，将质粒DNA及其重组体导入细菌的过程称为转化。65. 病毒及其重组体导入宿主细胞的过程称为转染。66. 噬菌体及其重组体导入宿主细胞的过程称为转导。67. 即多克隆位点，是指紧密排列的具有多种限制酶单一识别序列的一段DNA序列。68. 是指能在连接酶作用下和目的DNA片段连接、实现目的DNA的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的DNA分子。69. 是细菌染色体外的遗传单位，是一种双链环状的DNA分子，存在于宿主细胞质内，独立于染色体外，能自主复制，是常用的克隆载体。三、填空题70. 复制起点；选择标记；克隆位点。71. 磷酸二酯。72. 53聚合酶；35外切酶。73. 粘性末端连接；平头末端连接；人工接头法；同聚尾连接法。74. 基因克隆载体；目的基因和载体。75. 转化；转导；转染。76. DNA；mRNA。77. 目的DNA；载体DNA。四、问答题78. 以质粒等为载体进行DNA克隆的过程为基因克隆。DNA重组基本过程包括：分目的基因和载体的获得；接目的基因和载体的连接；转重组体的导入；筛重组体的筛选。79. 限制酶是由细菌产生的一种能识别双链DNA中的特定序列，并水解其磷酸二酯键的核酸内切酶。多数限制酶识别的DNA序列呈回文结构。80. 目的基因是指要研究或应用的基因，也就是需要克隆或表达的基因。其主要来源和获取途径如下表：来源可获得获取途径基因组文库所有基因重组DNA技术cDNA文库所有表达基因逆转录合成cDNA与重组DNA技术PCR扩增任一基因利用DNA模板酶促扩增人工合成已知序列且片段较短的DNA可在DNA合成仪上合成。81. 质粒是细菌染色体外的遗传单位，是一种双链环状的DNA分子，是仅能存在于宿主细胞质内、独立于染色体外、可以自主复制的遗传成分。质粒可作为基因载体是因为：分子量相对较小，能在细菌内稳定存在，有较高的拷贝数；具有遗传标志，便于筛选转化细胞；具有多克隆位点，如果在这些位点插入外源基因，会导致某种标志基因的失活，便于筛选。82. 化学合成长为10bp含有EcoR识别位点的DNA片段作为接头，然后与待克隆片段两端连接，如果用EcoR切割这种连接片段，就会产生EcoR的粘性末端。这种片段就可以插入任何EcoR的限制位点。83. 蓝白筛选法是一种利用蓝色化合物作为指示剂的筛选方法，筛选含有编码-半乳糖苷酶的基因。主要是在载体的非必要区插入一个大肠杆菌-半乳糖苷酶的基因片段lacZ。携带有lacZ的载体转入lac的宿主菌后，在含有5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷(X-gal)的平板上可形成蓝色菌落。外源基因