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文档简介

实验四淋巴细胞分离淋巴细胞活性检测 实验目的 1 学习单个核细胞分离的基本方法 熟悉本实验的原理与用途 2 熟悉E玫瑰花环形成的原理 了解E玫瑰花环形成的实验方法 外周血单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞 可根据其与其他细胞形态 体积和密度的不同进行分离 利用聚蔗糖 泛影葡胺分层液作密度梯度离心 可将不同比重的血液组分按其密度不同作相应密度梯度分布 达到分离目的 收集到淋巴细胞 正常人和动物的T淋巴细胞表面具有能与红细胞 RBC 表面糖肽相结合的受体 E受体 即CD2分子 是T细胞所特有的表面标志 在体外一定条件下T细胞能直接与RBC结合 形成玫瑰花样细胞团 称为E玫瑰花环 常用于检测T细胞的数量 活性及分离T细胞 实验原理 实验器材 略 实验方法 1 小鼠摘眼球取血0 5ml 滴入装有0 5ml肝素的试管A内摇匀 Hank s液对倍稀释 2 将上述抗凝血用吸管慢慢加到有2ml淋巴细胞分离液的试管B中 确保沿管壁流下的血液与分离液形成明显的界面 3 配平试管A B 2000rpm离心15min 小心取出 4 小心吸取B试管内中间区域的白色雾状薄层 移入试管C 2020 3 19 5 可编辑 5 Hank s液洗2次 加Hank s液对倍稀释 2000rpm离心10min 对半弃上清液 重复一次 6 洗完后留下管底0 1ml液体 即为淋巴细胞悬液 7 加入0 1mlSRBC 500rpm离心5min 低速离心后能迅速形成E花环 称为Ea花环 activeTrosette 8 小心吸去上清 留0 1ml 轻轻吹匀 加0 8 戊二醛2滴混匀后固定2 3min 9 取1滴悬液涂片 晾干后加瑞氏染液1滴 盖上盖玻片 镜检 10 结果判断 凡能结合3个以上SRBC者即为E花环阳性细胞 计数200个淋巴细胞 算出花环形成细胞的百分率 Ea花环正常值为25 40 11 注意事
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