尿液分析的标准化及其尿沉渣定量检测技术新进展

1,尿液分析的标准化及其尿沉渣定量检测技术新进展,2,尿液分析的发展回顾,1590年荷兰人詹森发明了世界上第一台复合显微镜 1673年，Frederick Dekkers用加热醋酸酸化尿液的方法检测蛋白 1896年，Daiber出版了他的尿沉渣图谱 1911年，Benedict提出了稳定方便的尿糖检测方法Johns Hopkins Hospital 的Charles Emerson发表名著临床诊断 1956年Alfred Free发明的CLINISTIX，尿液分析史上第一个“浸入即读”的测试方法,3,国内尿液分析方法回顾,5060手工化学分析7080手工化学分析尿沉渣镜检8090尿液干化学分析2K2K1尿液干化学分析尿沉渣镜检2K2完整的尿液分析= 干化学+尿流式+镜检确认,4,检验医学的发展对尿液分析的要求,更准为临床提供更为准确可靠的检验结果更快缓解检验科不断增加的样品量的压力为临床提供更为及时的检验报告更多为临床提供更多的实验室诊断指标,“应对医疗纠纷举证倒置政策对临床和检验科的要求”,5,目前尿液分析所存在的问题,更准？过分依赖尿液干化学分析尿沉渣镜检的方法学不精密性样品处理过程所带来的干扰人工镜检主观因素的影响更快？单个样品：9.75分钟*批量处理：5.25分钟*更多？*尿液分析最佳方法,Frank Bailey，ASCP,6,尿液干化学检测方法的局限性,例如：白细胞：肾移植病人淋巴尿不表现脂酶尿糖：受其它还原物质的影响造成假阴性细菌：只能检测革兰氏阴性杆菌定性结果，不能用于疗效的监测 结论：不能代替镜检,7,尿沉渣分析的重要性,红细胞：泌尿系出血、泌尿系恶变、出血性疾病白细胞：泌尿系感染、急性肾小球肾炎、肾移植排异上皮细胞：肾小管病变管型红细胞管型：急性肾小球肾炎、肾梗塞白细胞管型：急性肾小球肾炎、肾综合症、肾盂肾炎上皮细胞管型：肾小管病变，如肾脏疾病、多种中毒透明管型：肾小球毛细管损害颗粒管型：肾盂肾炎、慢性肾疾病细菌：泌尿道感染,8,显微镜检查的不精密度,UF-100、CD-3500、计数板三种方法对比 检测104份脑脊液在低白细胞数的检测中， UF-100的CV为4.9% CD-3500的CV为28%镜检法的CV为40%,9,不同检验员间镜检结果的差异,10,显微镜检查的影响因素,标本在分析前形态改变标本混合不当离心的尿量不同离心速度和时间不同尿沉渣重悬的液量不同尿沉渣重悬的方法不同镜检一滴沉渣的液量不同盖片或计数板的差异视野数目和位置的差异成份识别上的人员差异显微镜视野大小的差异,11,0,50,100,150,200,250,300,350,400,450,500,RBC count (/,m,L),Sample 1,Sample 2,Sample 3,Sample 4,Sample 5,原液,400G, 5min,500G, 5min,500G, 15min,不同离心条件上清液中RBC的残留量,12,尿沉渣检查标准化的建议,标本的收集及运送2.2 标本的运送 按上述要求留取尿液应在2小时内完成检验。尿沉渣检验的操作步骤3.2 镜检 计数细胞数或管型，按/l报告。材料与器械1.5 自动化设备 有条件的实验室也可使用各类自动、半自动的尿沉渣分析仪作为尿沉渣分析，或用作过筛，但此类仪器必须经权威机构认可。,13,各种改良的镜检系统,14,DiaSys R/S2000系统,15,国联在线UD-S自动染色工作站,16,普利生AMP2000自动扫描式尿沉渣工作站,17,DiaSys R/S2000系统,主要部件为一个玻璃的光学计数板计数板固定在显微镜上并连接一个加样泵尿液标本首先按照常规步骤进行处理将加样管插入离心管的底部，启动加样泵吸取180微升的沉渣并利用涡流混合重悬在加样泵作用下尿沉渣流入检测区，分布在光学计数板上计数后，系统自动用700微升的盐水冲洗管路和计数板以防止交叉污染,18,为什么要使用全自动尿沉渣分析仪？,19,目前尿液分析所存在的问题,更准？过分依赖尿液干化学分析尿沉渣镜检的方法学不精密性样品处理过程所带来的干扰人工镜检主观因素的影响更快？单个样品：9.75分钟*批量处理：5.25分钟*更多？*尿液分析最佳方法,Frank Bailey，ASCP,20,为什么要使用全自动尿沉渣分析仪？,彻底排除样品处理过程的干扰因素以及人工镜检主观因素的影响，提高分析中质量控制提高筛选效率，保证样品的质量，强化分析前质量控制,21,全自动尿沉渣分析仪UF-100/UF-50,22,全自动尿沉渣分析仪,23,结果准确、重复性好,UF-100 和人工镜检法精密度比较（n=10）,24,9-氮杂菲（Phenanthridine）染色DNA和RNA发射荧光为: 橙色对死细胞胞膜穿透性强羰花青（Carbocyanine）细胞膜、核膜以及线粒体等膜性物质被染色发射荧光为：绿色,特异的荧光染色技术,25,彩色打印报告-临床报告,26,彩色打印报告-科研报告,27,质量控制,28,临床应用血尿来源的鉴别诊断,29,红细胞信息,80 100 ch,80 100 ch,30,UF-100对血尿来源的判断,Toru Hyodo, Kazuo Kumano et al. Detection of glomerular and non-glomerular red blood cell by automated urinary sediment analyzer. Jpn J Nephrol 37:35-43,1995. UF-100：敏感性 100， 特异性 92.54%* 镜检法： 敏感性 95.83%，特异性 93.33%马骏龙，丛玉隆等。全自动尿沉渣分析仪检测尿红细胞鉴别血尿来源的探讨。中华医学检验杂志 V20 (5), 1997。 UF-100：敏感性 100， 特异性 78.2% *Hyodo所选非肾小球病变对象排除了血尿同时伴菌尿病人,31,临床应用药物治疗疗效的观察,32,临床应用急性肾盂肾炎,33,临床应用输尿管结石，肾盂肾炎,34,临床应用肾病综合症,35,临床应用用于检测脑脊液中的白细胞,36,尿流式细胞仪检查脑脊液中白细胞,UF-100、CD-3500、计数板三种方法对比 检测104份脑脊液在低白细胞数的检测中， UF-100的CV为4.9% CD-3500的CV为28%镜检法的CV为40%,Reinhard Ziebig, Andreas Lun, Pranav SinHA. Leukocyte Counts in Cerebrospinal Fluid with the Automated Hematology Analyzer CellDyn 3500 and the Urine Flow Cytometer UF-100. Clinical Chemistry 46:2 242247 (2000),37,流式细胞仪分析脑脊液标本,UF-100及显微镜检测红细胞有好的相关性，r=0.919UF-100与白细胞的相关性为r=0.886UF-100与细菌的相关性为r=0.605，CSF出血标本细菌计数不可信颅咽管瘤病人的CSF中新形隐球菌、酵母菌及胆固醇结晶可检测出,JosT.Van Acker, Joris R. Delanghe et al. Automated Flow Cytometric Analysis of Cerebrospinal Fluid. Clinical Chemistry 47:3 556-560 (2001),38,UF在常规工作中的作用,UF的快速筛选功能大大降低人工镜检的工作量解决阳性样品的漏检问题，避免了医疗纠纷定量的标准化报告方式大大提高结果的准确性适用于临床治疗监测 提供新的临床信息RBC形态信息，用于血尿来源的鉴别诊断,39,简化工作流程,没有UF,有了UF,报告,报告,报告,40,试纸条筛选、沉渣分析、化学定量、微生物检查等是尿液分析不可缺少的内容。采用自动化仪器对这些颗粒进行分析是减