《实验室检验》课件.ppt

第2章实验室检验 实验室检验就是运用物理学 化学和生物学等实验技术和方法 对病畜的血液 尿液 粪便 体液 如胃液 脑脊髓液 胸腹腔穿刺液 组织细胞及病理产物 在实验室特定的设备和条件下 测定其物理性状 分析其化学成分 或借助于显微镜观察其有形成分的方法 以获取反映机体功能状态 病理变化或病因等客观资料 配合临床资料进行综合分析 实验室检验是一种复杂而细致的工作 为了得到正确的结果 必须遵守严格的操作规程和次序 采取的样本必须有代表性 检验所有的试剂与器材 应符合要求 并定期进行检查和校正 要注意消毒工作 污染的器皿应先消毒后洗涤 以防传染性物质的扩散 血液检验 血液检验是临床医学检验中应用最广 对辅助诊断最有价值 最常用的基本内容之一 血液是由血浆和血细胞两部分组成 是通过循环系统与全身各个组织器官密切联系 参与机体呼吸 运输 防御 调节生理 维持正常新陈代谢和内外环境平衡的 临床血液学检查内容 物理学检查 借助物理学方法测定其物理特性 如出血时间 凝血时间 红细胞脆性 红细胞沉降率 红细胞压积 化学检验 即用定性或定量的化学分析方法 检测被检标本各种化学成分方面的变化 如血红蛋白的检查 显微镜检查 检查其血细胞的形态及数量的变化 如红细胞 白细胞 血小板等 临床血液检查内容 自动化仪器检验 血液分析仪 血液检验 血液样本的采取与抗凝 猪的前腔静脉采血 马的颈静脉采血 兔的耳静脉采血 血液检验 血液的抗凝 草酸钠是常用的抗凝剂 每1 5 2 0mg可抗凝1 0ml血液 可用于血液常规检验 因对红细胞大小有影响 故不能用红细胞压积测定 如测定红细胞压积时 可用双草酸盐抗凝剂或乙二胺四乙酸二钠 双草酸盐抗凝剂草酸钠0 8g草酸铵1 2g蒸馏水加至100ml溶解后吸取0 5ml 加入供采血试管或小瓶中 置干燥箱内 温度不超过80 烘干备用 可供5ml全血抗凝 血液检验 乙二胺四乙酸二钠 EDTA Na2 每10mg可使5ml全血抗凝 或配成10 的溶液 每2滴可使5ml全血抗凝 可适用于一般的血液学检查 特别是血小板计数 但因为影响血小板聚集和白细胞吞噬功能 不适合于血象及血小板功能检查 3 8 枸橼酸钠溶液每0 5ml可使5ml全血抗凝 常用于血沉 凝血因子和血小板功能检查 因其毒性小又可作为血液保养液 但不适用于血液化学检验 由于抗凝剂溶解缓慢 故只能配成溶液 不能用粉剂 血液的抗凝 血液检验 肝素肝素价格最贵 其优点是抗凝作用强 不影响血细胞的体积 不致溶血等 可用于多种血液生物化学分析和红细胞压积测定 但过量的肝素可引起白细胞聚集和血小板减少 故不适用于白细胞和血小板计数 也不适用于血涂片检查 因其在瑞氏染色时会出现蓝色背景 更不能用于凝血象的检查 血液的抗凝 通常用肝素粉剂配成1g L水溶液 取0 5ml置小瓶内 放于37 50 中烘干后贮于冰箱内保存 能使5ml血液不凝固 肝素抗凝剂应及时使用 放置过久易失效 怀疑传染病时 采血应防止到处流散 检后残余血液及所用器皿应进行消毒处理 红细胞背景知识 红细胞也称红血球 是血液中数量最多的一种血细胞 同时也是脊椎动物体内通过血液运送氧气的最主要的媒介 在所有的脊椎动物及若干无脊椎动物 其血红素包含在特定的细胞中来进行其机能活动 这种血球称为红细胞 其它的血细胞 如白血球 则是免疫细胞 红细胞中含有血红蛋白 因而使血液呈红色 血红蛋白能和空气中的氧结合 因此红细胞能通过血红蛋白将吸入肺泡中的氧运送给组织 而组织中新陈代谢产生的二氧化碳也通过红细胞运到肺部并被排出体外 血红蛋白更易和一氧化碳相合 当空气中一氧化碳和含量增高时 可引起一氧化碳中毒 红细胞和血红蛋白的数量减少到一定程度时 称为贫血 红细胞大量被破坏可引起溶血性黄疸 红细胞描述 多 小而圆 中央着色较浅 无核 禽类称为凝血细胞 一般为卵圆形 有细胞核 比哺乳动物的大得多 数量少 血液检验 红细胞沉降率测定 魏氏法 魏氏血沉管长30cm 内径2 5mm管上有0 200的刻度 每一刻度的距离为1mm 其溶积为1ml 先向10ml刻度试管中加入3 8 枸橼酸1ml 再自静脉采血4ml 颠倒混合数次 然后用魏氏血沉管吸取抗凝剂至刻度0处 擦去管外血液 在室温条件下 垂直放于血沉管架上 经15 30 45 60min 分别观察并记录细胞沉降数值 血液检验 红细胞沉降率测定 六五 型血沉管法 于血沉管中加入抗凝剂 草酸钠0 015 0 02g 枸橼酸钠粉末0 04 0 05g 自颈静脉直接采血至刻度 0 处 立即充分混合 于室温垂直立于试管架上 镜15 30 45 60min各观察一次 并记录红细胞沉降的数值 血液检验 红细胞沉降率测定 各种动物的正常血沉值 测定血沉时必须用新配制的抗凝血 血液与抗凝剂混合要充分 柱面上不应有气泡 它可使血沉变慢 用魏氏法测定时 事先应检查血沉架是否好用 以防漏用 测定时室温以20 左右为宜 温度过低可以减慢血沉 血液检验 血红蛋白测定 红细胞遇酸溶解 游离出血红蛋白 并被酸化为褐色的酸性血红素 稀释后与标准色柱比色 即可求得血红蛋白的含量 血红蛋白试纸测定法器材应备有测定血红蛋白试纸和4g 15g 血红蛋白标准比色板 测定时 取试纸一条 吸附被检血液一小滴 待血完全浸透后 立即置于所附标准色板的小孔下 肉眼与色板色泽进行比较 选择颜色相同或近似者 即得100ml血液所含血红蛋白的克数 沙利氏血红蛋白测定法沙利氏血红蛋白计由比色架 标准比色柱 血红蛋白测定管及血红蛋白吸管组成 测定管有两个刻度标志 一侧的2 24刻度表示100ml血液中含有的血红蛋白克数 另一侧有20 160刻度 表示100ml血液中所含血红蛋白的百分数 血液检验 血红蛋白测定 血红蛋白增高见于各种原因引起的血液浓缩 如腹泻 呕吐 大汗 多尿及肠梗阻等 血红蛋白减少见于各种贫血 如马鼻疽 牛结核 牛羊肝片吸虫病 仔猪蛔虫等 血液检验 红细胞计数 红细胞计数是将一定量的供检血液经一定倍数稀释后 计数一定容积的红细胞数 并换算为每立方毫米血液内含量 血液检验 红细胞计数 健康动物红细胞数 万 立方毫米 白细胞计数 血液检验 白细胞计数 用冰醋酸将红细胞破坏后 计算每立方毫米内白细胞总数 健康动物白细胞数 个 立方毫米 结核病时鸡的肝脏结核结节 血液检验 白细胞分类计数 健康动物各类白细胞分类数值 血液检验 临床意义 白细胞增多嗜中性白细胞增多 见于猪 牛巴氏杆菌病 马腺疫 肺炎及化脓性感染等 嗜酸性白细胞增多 见于某些蠕虫病 过敏性疾病及湿疹等 淋巴细胞增多 见于结核 鼻疽 布氏杆菌病 猪瘟及牛梨形虫病 单核细胞增多 见于败血性疾病 某些梨形虫病及李氏杆菌等 白细胞减少嗜中性白细胞减少 见于病毒性传染病 药物中毒 如长期服用抗生素 各种疾病的垂危期 嗜酸性白细胞减少 见于败血症 某些病毒病及牛梨形虫病等 淋巴细胞减少 多为嗜中性白细胞增多而造成的相对性变化 血液检验 在分析嗜中性白细胞增 减变化时 还应注意嗜中性白细胞的成熟情况 若未成熟的嗜中性白细胞增多 即出现嗜中性髓样细胞 幼稚型和杆状核嗜中性白细胞的比例增多 则称为核左移 若血液内分叶核嗜中性白细胞大量增多 而且核的分叶数目也增多 则称为核右移 白细胞总数增多的同时 出现核左移 表示骨髓造血机能加强 机体处于积极防御阶段 而白细胞总数减少时见有核左移 则表示骨髓造血机能减退 机体的抗病力降低 至于核右移 乃骨髓造血功能衰退的标志 多因机体高度衰竭而引起 常提示预后慎重 临床意义 光学显微镜的使用 物镜转换器2 接物镜3 游标卡尺4 载物台5 聚光器6 彩虹光阑7 光源8 镜座9 电源开关10 光源滑动变阻器11 粗调螺旋12 微调螺旋13 镜臂14 镜筒15 目镜16 标本移动螺旋 操作步骤 1 观察前准备 显微镜从显微镜柜或镜箱内拿出时 要用右手紧握镜臂 左手托住镜座 平稳地将显微镜搬运到实验桌上 将显微镜放在自己身体的左前方 离桌子边缘约10cm左右 右侧可放记录本或绘图纸 调节光照 不带光源的显微镜 可利用灯光或自然光通过反光镜来调节光照 光线较强的天然光源宜用平面镜 光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜 但不能用直射阳光 直射阳光会影响物像的清晰并刺激眼睛 将10 物镜转入光孔 将聚光器上的虹彩光圈打开到最大位置 用左眼观察目镜中视野的亮度 转动反光镜 使视野的光照达到最明亮最均匀为止 自带光源的显微镜 可通过调节电流旋钮来调节光照强弱 凡检查染色标本时 光线应强 检查未染色标本时 光线不宜太强 可通过扩大或缩小光圈 升降聚光器 旋转反光镜调节光线 2 低倍镜观察 镜检任何标本都要养成必须先用低倍镜观察的习惯 因为低倍镜视野较大 易于发现目标和确定检查的位置 将标本片放置在载物台上 用标本夹夹住 移动推动器 使被观察的标本处在物镜正下方 转动粗调节旋钮 使物镜调至接近标本处 用目镜观察并同时用粗调节旋钮慢慢下降载物台 直至物像出现 再用细调节旋钮使物像清晰为止 用推动器移动标本片 找到合适的目的像并将它移到视野中央进行观察 3 高倍镜观察 在低倍物镜观察的基础上转换高倍物镜 较好的显微镜 低倍 高倍镜头是同焦的 在转换物镜时要从侧面观察 避免镜头与玻片相撞 然后从目镜观察 调节光照 使亮度适中 缓慢调节粗调节旋钮 慢慢下降载物台直至物像出现 再用细调节旋钮调至物像清晰为止 找到需观察的部位 并移至视野中央进行观察 并准备用油镜观察 4 油镜观察 1 用粗调节器将镜筒提起约2cm 将油镜转至正下方 2 在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油 3 从侧面注视 用粗调节器将镜筒小心地降下 使油镜浸在香柏油中 其镜头几乎与标本相接 应特别注意不能压在标本上 更不可用力过猛 否则不仅压碎玻片 也会损坏镜头 4 从接目镜内观察 进一步调节光线 使光线明亮 再用粗调节器将镜筒徐徐上升 直至视野出现物像为止 然后用细调节器校正焦距 如油镜已离开油面而仍未见物像 必须再从侧面观察 将油镜降下 重复操作至物像看清为止 5 观察完后复原 下降载物台 将油镜头转出 先用擦镜纸擦去镜头上的油 再用擦镜纸蘸少许乙醚乙醇混合液擦去镜头上残留油迹 最后再用擦镜纸擦拭2 3下即可 注意向一个方向擦拭 将各部分还原 转动物镜转换器 使物镜头不与载物台通光孔相对 而是成八字形位置 再将载物台下降至最低 降下聚光器 反光镜与聚光器垂直 最后用柔软纱布清洁载物台等机械部分 然后将显微镜放回柜内或镜箱中 白血病 肥大细胞 白细胞 艾滋病 现象分析一 2008年9月8日 位于甘肃省兰州市的中国人民解放军第一医院泌尿科又接收了一名8个月大 来自该省岷县的患有 双肾多发性结石 和 输尿管结石 病症的婴儿 这是该院三个多月来接受的第14名患有同样疾病病例 婴儿服用问题奶粉后尿液发红 有结晶现象 分析形成原因 尿液的常规检查 三鹿奶粉为石家庄三鹿集团股份有限公司所生产 该企业是国产奶粉品牌的 龙头 奶粉产销量已连续11年全国第一 结石宝宝 事件爆发 陕西 江苏 湖北等地医院同现肾病婴儿 矛头疑指这些婴儿曾食用的三鹿奶粉 南京发现有5名婴儿患肾结石 他们都曾经吃过三鹿同一品牌的奶粉 此前甘肃14婴儿也疑因吃三鹿品牌奶粉齐患肾结石 尿液的检查内容 物理学方法 检查其物理性状 如尿量 尿色 透明度 气味 密度等 化学方法 测定其所含化学成分 如蛋白质 葡萄糖 潜血等 显微镜检查尿中的沉渣 如无机沉渣 有机沉渣等 尿液检查 泌尿系统包括肾 输尿管 膀胱和尿道等部分 肾是尿液形成的器官 其余是尿液形成的通道 俗称尿路 尿液是血液经肾小球滤过 肾小管和集合管的重吸收及排泌产生的终末代谢产物 尿液的检查 不但对泌尿器官疾病的诊断具有重要意义 而且具有决定性意义 而且对一些内分泌及代谢疾病 循环系统疾病 肝胆疾病 血液及造血系统疾病 某些药物中毒 庆大 卡那霉素和磺胺药物 重金属 铅 镉 汞 中毒的判断和分析也具有辅助诊断意义 尿液检验 尿液检验 尿液常规检查注意事项 1 供检尿应在清晨空腹采取的新鲜尿液为佳 因为这种尿液是在夜间形成的 受外界因素影响少 若不能马上检查又值天气炎热 为防止发酵 需保存在冰箱或加入防腐剂保存 2 供检尿液最好是导尿管采集的尿液 因为这种尿液没有尿道 阴道污染物污染 3 采集尿液后 应立即检查 若不能及时检验 可加防腐剂 即每100ml尿液中加入福尔马林3 4滴或麝香草酚0 1g 尿液的采集和保存 采集尿液 通常用清洁的容器 在家畜排尿时直接接取 也可用塑料或胶皮制品做尿袋 固定在公畜阴筒的下方或母畜的外阴部以接取尿液 必要时可进行人工导尿 尿液采取后应立即检查 如不能及时检查或需送检时 为了防止尿液发酵分解 需加入适量的防腐剂 常用的防腐剂有甲苯 每升尿中加入5ml 硼酸 每升尿中加入2 5g 甲醇溶液 每升尿中加入1 2ml 麝香草酚 每升尿中加入1g 氯仿 按尿量的0 5 加入 但要注意 做细菌学检查时 不可加入防腐剂 尿液检验 尿常规检查内容 尿液一般物理性状的检查 包括透明度 尿色及气味等 尿液一般化学性状的检查 包括酸碱度 尿蛋白质 血液 血红蛋白的检查 1 透明度盛尿液于玻璃容器内 透光观察 正常的马尿因含有碳酸钙及不溶性碱性盐 故马尿混浊不清 牛及其他家畜因碳酸钙及不溶性盐很少 故澄清透明 如马尿透明时 是喂精饲料过多或骨软症 胃肠炎的象征 牛尿变为混浊时 常是肾炎 尿路炎症的表现 尿液检验 尿常规检查内容 2 尿色正常尿为深黄色或淡黄色 病理情况下有红尿 是泌尿系统出血 肌红蛋白尿或血红蛋白尿 尿呈黄绿褐色是胆红质尿 尿胆素原尿的特征 乳白色尿 见于尿中含有乳糜 脓细胞 大量磷酸盐和尿酸盐时 3 尿气味4尿量5 尿密度 尿液检验 尿蛋白质正常尿含微量蛋白质 但用一般方法检查不出来 若尿中证明含有蛋白质时称为蛋白尿 见于泌尿系统炎症及热性病 尿糖尿酮体尿潜血 血红蛋白和肌红蛋白 尿常规检查内容 尿液检验 尿沉渣检验尿沉渣检查 在临床上很重要 故一般住院病畜应作此项检查 检查时应特别注意识别尿液中各种有形成分 各种上皮细胞 脓球 细菌及无机盐等 尿常规检查内容 尿中有机沉渣检查无机盐沉渣检查 尿液检验 红细胞 尿中出现红细胞 是泌尿系统出血的特征 红细胞的形态 在新鲜尿液呈圆形淡红绿色 酸性尿中 则红细胞皱缩 边缘呈锯齿状 碱性尿中 红细胞膨胀或破坏 呈现阴影 白细胞 正常尿中仅有白细胞 尿液中最常见的是中性白细胞 而淋巴细胞及单核细胞均少见 尿中出现白细胞是肾 膀胱的炎症 在新鲜尿中其形态比红细胞大有核 易识别 酸性尿中其形态比较完整 加稀醋酸后其核更明显 碱性尿中则膨胀而清晰 肾上皮细胞 比白细胞约大1 3 呈圆形 有一个较大的核 细胞质内有小颗粒 易识别 若尿中出现多量肾上皮细胞时 是肾实质性炎症 尾状上皮细胞 呈梨形或梭形 比白细胞大2 4倍 有一个圆形或椭圆形的核 这种细胞 来自肾盂 膀胱 尿道粘膜的深层 尿中出现时是重剧炎症 尿道炎的居多 尿中的上皮细胞1 肾上皮细胞2 肾盂及尿路上皮细胞3 膀胱上皮细胞 尿液检验 扁平上皮细胞 细胞大而扁平 核小而圆 细胞边缘稍卷起 或几个在一起 容易与其他细胞区别 它来自膀胱 尿道的表层 出现时膀胱 尿道的炎症 但膀胱炎居多 管型 管型是肾有炎症的标志 当肾患病时 由肾小球滤出的蛋白质在肾小管内变性凝固或蛋白质与其他成分相结合形成管型 尿中出现管型时 是肾病的特征 图9 2尿中的各种管型1 上皮管型2 颗粒管型3 透明管型4 红细胞管型5 脂肪管型6 蜡样管型 尿液检验 透明管型 玻璃样管型 是其他管型的基础 其特征是结构均匀 无色半透明 一般认为是由蛋白质凝固而来 或各种实质细胞变性形成 是轻度肾炎 也见于热性病及肾充血 若尿中长期少量出现 是慢性间质性肾炎的特征 这在诊断上很有价值 上皮细胞管型 是蛋白质与肾小球脱落的上皮细胞粘集而成 尿中出现时 是急性肾炎的特征 尿液检验 颗粒管型 是在透明管型内含有粗大的或细小的颗粒 这种颗粒是肾小球上皮变性崩解的颗粒或蛋白质凝固的颗粒 其与透明管型不同的是表面有颗粒 但较透明管型而短 因混有血液的色素 故呈黄色或褐色 出现颗粒管型时 表现肾小球有严重的损害 见于重剧性肾炎 蜡样管型 一般较粗 末端往往折断 边缘往往有缺口 结构均匀 轮廓明显 有玻璃样闪光 表面类似蜡块 长而直 很少有弯曲 比透明管型宽 色较灰暗 是肾小管上皮淀粉样变性的结果 表示肾小管有严重变性或坏死 是重剧性肾炎之症 予后多不良 尿液检验 脂肪管型 为上皮管型和颗粒管型中的脂肪性产物所形成 是一种较大的管型 表面盖以脂肪滴和脂肪酸结晶 根据其强屈光的化学性质 不难区别 它不溶于酸和碱 而可溶于醚中见于肾脂肪变性性炎症 红细胞管型 是在透明或颗粒管型内有多量红细胞的一种管型 见于肾出血性炎症 尿液检验 酸性尿中无机盐沉渣1草酸钙结晶2硫酸钙结晶3尿酸结晶4尿酸盐结晶 图碱性尿中的无机沉渣1 碳酸钙结晶2 磷酸钙结晶3 4 磷酸铵镁结晶5 尿酸铵结晶6 马尿酸结晶 尿液检验 尿液检查结果的分析判定 尿液检出蛋白质时 可认为是泌尿系统的疾病 但到底是什么部位发病或是什么病 还得经过尿沉渣的检查 肾脏本身疾病引起的尿蛋白 则尿沉渣可检出肾上皮细胞及管型 尿路疾病引起的尿蛋白 则尿沉渣可检出尾状上皮细胞 扁平上皮细胞或磷酸铵镁结晶 而无肾上皮细胞及管型 其他疾病引起的尿蛋白 如热性病等则具有原发病症状 且尿蛋白出现时间短 随原发病的治愈而消失 尿液检验 尿液检查结果的分析判定 红尿红尿即尿呈红色 除泌尿系统出现出血性炎症外 肌红蛋白和血红蛋白尿病 尿也呈红色 应注意鉴别 尿液检验 根据尿液中异常成分分析判定疾病1尿液中有蛋白 血液 尿路上皮细胞 肾上皮细胞时 是泌尿系统的疾病 2尿液中仅检出血红蛋白时 是幼畜溶血病 犊牛水中毒或焦虫病的特征 3尿液中仅检出肌红蛋白时 是肌红蛋白尿病的表现 4尿液中仅检出尿胆原时 是实质性肝炎的特征 5尿液中仅检出胆红质时 是胆道阻塞的特征 6尿液中仅检出酮体是 见于牛酮血病及绵羊妊娠病 7尿液中仅检出尿蓝母时 见于胃肠炎 子宫内膜炎 胸膜炎等 尿液检验 尿液检验结果必须结合临床症状才能作出正确判定1 尿中出现蛋白质 尾状