第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测

第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,黑龙江中医药大学 临床医学院 诊断教研室黄 萍,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,第一节 概述 一、 何为ENA? ENA(Extractable nuclear antige) 盐水可提取性核抗原的总称。,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,核抗原： 组蛋白 ： 不溶于水 DNA ； 不溶于水 ENA： 可溶于生理盐水 是非组蛋白核蛋白，属酸性核蛋白抗原，是许多小分子量的RNA和多肽组成。,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,二、多肽抗体谱 ENA抗体是指能与核中盐水可提取抗原发生特异性结合抗体，既是抗核抗体的一部分。,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,ENA多肽抗体谱 是由许多小分子量的RNA和多肽组成。 不同的uRNA各有其相应的抗体。目前发现的相应的抗体已有十余种，其中，国际上共认的对风湿有特异的诊断价值的有七种。故将这七种抗体叫做多肽抗体谱,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,三、 免疫印迹 免疫印迹（Immunoblot IBT） 又称免疫转印技术。是一项新的生化技术。它对研究工作的影响与内切酶的发现和 PCR的基因扩增技术是等量齐观的。,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫印迹的基本原理： 将凝胶电泳与固相免疫结合起来，其主要的操作过程分三个步骤。 1、分离 盐水可提取抗原（ENA）中多 肽按分子量的大小，先用SDS 聚丙烯酰胺凝胶分离,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫印迹的基本原理： 2 、转移 将分离的组份从凝胶上转移到固相基质上，如硝酸纤维膜,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫印迹的基本原理： 3 、测定 对转移后的组份进行免疫法测定，显示出蛋白带。 既通过抗体的反应，用酶联免疫吸附法观察与抗体反应的多肽（呈显色带）的数量与分子量,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫印迹的基本原理： 免疫转印技术实际上是一项将凝胶电泳技术、固定化技术及分子亲和技术三者融为一体的免疫转印技术。,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫转印技术优点：,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫转印技术优点： 1、高分辨率 免疫转印技术综合了电泳技术分辨率强的特点。,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫转印技术优点： 2、高灵敏度 免疫转印技术综合了免疫反应敏感性高的特点，可检出最小蛋白质1pg(10-12g),第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫转印技术优点： 3、高特异性 免疫转印技术综合了免疫反应特异性，根据抗原抗体的特异反应，同一条蛋白印迹上可做多项分析。,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫转印技术优点： 4、高度稳定性 蛋白印迹膜便于保存，可存放6-12 个月。,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫转印技术优点： 5、设备简单，操作容易 免疫转印技术在临床检验中必有远大前程，并可能代替许多现有的传统检验方法。,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,第二节 检测对象 ENA多肽抗体谱 早期诊断SLE和多种风湿病， 有较高的特异性和敏感性， 有助于结缔组织病的诊断 和鉴别诊断,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,一、风湿病的定义 风湿病学是一门以内科学和临床免疫学为基础的新兴学科 其研究的对象是风湿性疾病，包括所有不同原因，以及不明原因引起的骨、关节、肌疾病。,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,广义：涉及所有骨、关节、肌肉疼痛和炎症 的疾病 感炎性： 莱姆（Lyme）氏病 代谢性： 痛风内分泌性： 甲状旁腺功能亢进遗传性； 粘液多糖病退化性： 骨关节炎生态环境性：大骨节病,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,狭义：主要指自身免疫性结缔组织疾病 类风湿性疾病骨关节炎 (RA)系统红斑狼疮 (SLE)干燥综合症 (SS)硬皮病 (PSS)皮肌炎和多发行肌炎 (DM/PM)混合性结缔组织病 (MCTD),第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,二、 适应症 1、临床上怀疑有风湿性疾病（结缔组织病或自身免疫性疾病），需进一步确诊者。 2、 已诊断为某种风湿性疾病，但需明确是否合并其它风湿性疾病，以指导治疗者。,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,二、 适应症 3 、诊断未明，但有下列症状，需排除或 确诊何种风湿性疾病者： 、原因不明发热伴有关节或肌肉疼痛。、淋巴结肿大或白血球减少或血小板减 少或溶血性贫血。、皮疹或不典型面部红斑，光敏感。、蛋白尿。,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,、心包炎或胸膜炎。、癫痫或精神、神经症状。、习惯性流产。、雷诺氏现象。、肿胀手或手指、足趾皮肤变硬。,第三章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,、肌肉有压痛或抬臂、下蹲起立时困 难。、下肢出现网状青紫。、肺间质病变或肺动脉高压。、经常口干、眼干、或反复腮腺炎。、易口腔溃疡或大量脱发。,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,、吞咽困难，食道蠕动减弱。、青年女性有偏头痛。、荧光抗核抗体阳性。、关节疼痛。、长期反复性原因不明低热。,第三章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,三 、送检标本 血清,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,四 报告方式 反应抗体 分子量 1. 抗Sm抗体+/- 29/28KD、13.5KD 2. 抗u1RNP抗体+/- 73KD、32KD、17.5KD 3.抗Scl-70抗体+/- 86KD、70KD 4.抗SSA抗体+/- 52KD 5.抗SSB抗体+/- 48/47KD、45KD 6.抗JO-1抗体+/- 55KD 7.抗Rib抗体+/- 38KD16KD15KD + 表示有该种自身抗体 - 表示无该种自身抗体,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,第三节 临床意义,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,临床意义一抗Sm抗体 1.Sm为病人Smith（发现抗体的第一位病人） 的名字缩写 2.抗Sm抗体是酸性糖蛋白 3.是目前公认的系统性红斑狼疮（SLE） 标记抗体，有利于SLE的早期诊断。、 注意：关键是13.5KD 一般是13.5KD和 29/28KD同时出现，若单独出现 29/28 KD、无13.5KD不能判断 抗Sm抗体阳性 4.阳性率30-50%，仅见于本病。,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,临床意义 二 、抗u1RNP抗体(抗RNP)1、是混合性结缔组织病(MCTD)的一项重 要血清学特征。2、阳性率可达95%以上。3、73 KD（国外报导为70 KD）和32KD可 同时出现，也可分别出现。17.5 KD常拌 73 KD和32 KD、一起出现，单独出现少见。4、其它结缔组织病的阳性率 系统性红斑狼疮 （SLE ） 30% 干燥综合症 (SS) 20% 硬皮病 (PSS) 7%,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,临床意义 三、抗Scl-70抗体 1、抗Scl-70抗体中的Scl Sclerosis的缩写 70代表抗原分子量，为70KD（70000） 2、是弥漫型硬皮病(PSS)的标记抗体。 3、阳性率可达50-64% 4、在86 KD和70KD两区带间有时可见到 两条较弱的区带，是100KD的降解产 物。 两区带一般同时出现。,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,临床意义 四、抗SSA抗体（抗RO抗体）1SS为干燥综合症（Sjogrens syndrome） 的缩写。A为抗原子序列号2曾以最先查到此抗体患者名字命名，又称 抗RO抗体。3对干燥综合症（SS）诊断有意义。阳性率 7080% 合并SLE 3050% 单纯SLE 810%,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,临床意义 四、抗SSA抗体（抗RO抗体）4可见于其它多种自身免疫性疾病。 包括SLE，硬皮症，多发性肌炎和类风湿关节炎等疾病。 5、 该抗体阳性也可引起亚急性皮肤狼疮的皮损与SLE的广泛光过敏性皮炎也相关，IgG类抗SSA抗体通过胎盘进入胎儿后可引起新生儿狼疮综合症。 6、 个别因抗体与心脏的传导系统相结合可造成先天性心脏传导阻滞。,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,临床意义 五、抗SSB抗体1抗SSB抗体常伴随抗SSA抗体同时出现。2抗SSB和抗SSA抗体并存，对诊断SS（干 燥 综合症）有特异性。348KD、47KD、45KD三区常不仅同时出 现，也与52KD区带同时出现， 但48/47KD有时很弱，不易分辨。,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,临床意义 六、抗JO-1抗体1是Pm/Dm（肌炎/皮肌炎）公认的标记抗 体，阳性率2540%。2主要见于多发性肌炎（Pm）在皮肌炎 （Dm）中阳性率较低。3抗JO-1抗体 该抗体阳性患者常会同时出现肌炎，肺部间质性病变的关节炎等症状。易被临床误诊为慢性肺部